刘胜牙
- 作品数：66 被引量：158H指数：8
- 供职机构：深圳国际旅行卫生保健中心更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- NLRP3基因单核苷酸多态性TaqMan探针实时荧光PCR检测方法的建立被引量：3
- 2016年
- 目的建立以Taq Man探针实时荧光PCR技术为基础的核苷酸结合寡聚化结构域样受体3(Nucleotide-binding oligomerization domain,Leucine rich Repeat and Pyrin domain containing,NLRP3)基因单核苷酸多态性(Single nucleotide polymorphism,SNP)检测方法。方法以20份健康人血液样本为对象,选择NLRP3基因的两个SNP位点(rs3806265和rs35829419),针对每个位点分别设计1对PCR引物和2条Taq Man探针,进行实时荧光PCR扩增,对SNP位点进行分型。用常规PCR和基因测序的方法对Taq Man探针实时荧光PCR分型的结果进行验证。结果用建立的Taq Man探针实时荧光PCR分型法对20份样本进行检测,其中rs3806265位点发现TT基因型3份,TC基因型8份,CC基因型9份;rs35829419位点发现CC基因型20份,无AC和AA基因型。分型结果与常规PCR及基因测序分型方法完全一致。结论基于Taq Man探针技术的实时荧光PCR方法简单、快速,可实现对NLRP3基因位点的分型检测。
- 刘胜牙朱玉兰甄胜西谢聪贤李微刘健平
- 关键词：TAQMAN探针实时荧光PCR单核苷酸多态性
- 冠状病毒NL63实时荧光PCR检测试剂盒及其非诊断性检测方法
- 本发明公开了一种冠状病毒NL63实时荧光PCR检测试剂盒及其非诊断性检测方法，该荧光定量RT-PCR检测方法操作快速、灵敏，从标本中的病毒RNA提取到结果判定,最快能够在4h 内得到结果，省去了传统RT-PCR方法扩增后...
- 朱玉兰刘胜牙谢聪贤甄胜西徐媛
- 文献传递
- 测定疟原虫含量的方法和检测疟原虫含量的系统
- 本发明涉及一种测定疟原虫含量的方法和检测疟原虫含量的系统。上述测定疟原虫含量的方法包括如下步骤：用细胞处理液处理待测样品，得到细胞悬液，细胞处理液中含有4.0g/L～6.0g/L的聚氧乙烯醚和4.0g/L～5.5g/L的...
- 董瑞玲甘鑫谢昭聪顾大勇何建安朱玉兰孙杰张树平刘胜牙
- 上海口岸2001—2005年HIV-1病原体变异分子流行病学研究被引量：3
- 2009年
- 〔目的〕了解上海口岸2001—2005年艾滋病病毒I型感染者(HIV-1)毒株基因亚型分布、变异情况及流行特征。〔方法〕收集2001—2005年上海口岸51份HIV抗体检测确认阳性的血样标本,提取前病毒DNA,使用套式聚合酶链反应进行体外扩增,获得核心蛋白(gag)和包膜蛋白(env)区基因的核酸片段,测定其序列和进行亚型分析。〔结果〕37份标本扩增阳性,共检出8个亚型,包括B亚型11份;CRF01-AE10份;CRF02-AG5份;A亚型4份;C亚型4份;G亚型、B’,和CRF07_BC亚型各1份。上海口岸毒株亚型分布于五大洲15个国家和地区,主要流行CRF01-AE和B亚型,从2004年开始出现其它亚型逐渐增多趋势。〔结论〕上海口岸流行的HIV-1毒株复杂多样,出入境人员是我国HIV毒株输入的主要渠道,流行毒株以性接触传播为主,AE重组毒株具有较强的传播优势。
- 田桢干方筠章琪阎俊张晓航邢辉刘胜牙朱锦德
- 关键词：人类免疫缺陷病毒1型分子流行病学
- 结核分枝杆菌荧光定量PCR检测方法的建立与应用被引量：14
- 2008年
- 目的建立结核分枝杆菌的荧光定量PCR检测方法,探讨荧光PCR检测痰标本中结核分枝杆菌的应用价值。方法根据结核分枝杆菌基因保守序列设计引物和探针,并构建标准品。对102例培养涂阳的结核痰液标本和45例非结核感染者的痰标本,应用荧光定量PCR法、痰涂片抗酸染色法检测结核分枝杆菌。结果荧光定量PCR、抗酸染色法检测结核分枝杆菌的特异性分别为100%、30%。结论荧光定量PCR是一种快速、敏感性高、特异性强的结核分枝杆菌辅助诊断方法,具有重要的应用价值。
- 朱玉兰王佃鹏高朝贤黄宗炎刘胜牙
- 关键词：结核分枝杆菌抗酸染色荧光定量PCR
- 深圳出入境人员流感病毒感染的流行病学调查被引量：1
- 2009年
- 目的了解深圳口岸出入境人员流感病毒感染的流行病学特征。方法选择深圳福田地铁、深圳湾和罗湖口岸3个国境口岸为出入境流感监测点,对监测到的流感样病例采集咽拭子标本,并进行流行病学调查。运用荧光实时RT-PCR技术检测流感样病例的咽拭子标本,结合流行病学资料进行分析。结果2008年7月～2009年2月,在3个深圳口岸监测到的流感样病例为441份,其中,55份流感样病例的咽拭子标本中流感病毒核酸检测阳性,总检出率为12.5%。其中A型流感病毒核酸阳性47例,占85.5%,B型流感病毒核酸阳性8例,占14.5%;男性41例,占74.5%,女性11例,占20.0%,性别不详者3例,占5.5%;儿童(15岁以下)23例,占41.8%,成人32例,占58.2%。结论2008～2009年深圳口岸出入境人员流感样病例中以A型流感病毒感染为主,了解深圳国境口岸出入境人员流感病毒感染的情况,预防和控制出入境人员流感病毒的流行具有十分重大的意义。
- 刘胜牙朱玉兰黄宗炎刘春芳穆庄徐媛王佃鹏李微高朝贤
- 关键词：出入境人员流感病毒
- 梅毒螺旋体Tp0453和TpN47抗原的制备及应用被引量：1
- 2011年
- 目的表达纯化梅毒螺旋体Tp0453和TpN47蛋白,评价2种蛋白的检测效果,并建立一种新的梅毒抗体检测方法。方法以梅毒螺旋体Nichols菌株基因组DNA为模板,通过PCR扩增Tp0453和TpN47蛋白基因,构建原核表达载体;转化表达菌株后经IPTG诱导表达,并优化表达条件,大规模培养后采用Ni2+亲和柱纯化目的蛋白;纯化蛋白用过碘酸钠法进行HRP标记,采用双抗原夹心ELISA法分别评价两种蛋白的检测效果,在此基础上,按比例混合两种抗原,并建立双抗原夹心ELISA检测法。结果构建了Tp0453和TpN47蛋白的原核表达载体,在低温(27℃)和低剂量IPTG(0.1mmol/L)诱导条件下,有效的实现了Tp0453和TpN47蛋白的可溶性表达。采用Ni2+亲和纯化方法成功纯化出了高纯度的Tp0453和TpN47融合蛋白,ELISA检测结果显示Tp0453比TpN47具有更强的反应性,两种蛋白混合,建立的双抗原夹心ELISA检测法通过血清学试验表明具有很好的敏感度和特异性。结论实现了梅毒螺旋体Tp0453和TpN47蛋白快速高效的表达,并结合2种抗原优势,建立了一种高效的梅毒双抗原夹心ELISA检测方法。
- 朱玉兰黄宗炎刘胜牙王佃鹏叶健忠张登峰
- 关键词：梅毒螺旋体双抗原夹心纯化
- 冠状病毒NL63实时荧光PCR检测试剂盒及其非诊断性检测方法
- 本发明公开了一种冠状病毒NL63实时荧光PCR检测试剂盒及其非诊断性检测方法，该荧光定量RT-PCR检测方法操作快速、灵敏，从标本中的病毒RNA提取到结果判定,最快能够在4h内得到结果，省去了传统RT-PCR方法扩增后处...
- 朱玉兰刘胜牙谢聪贤甄胜西徐媛
- 文献传递
- 登革热病毒多重荧光PCR检测及基因分型方法的研究被引量：8
- 2012年
- 目的建立一种登革热病毒双靶基因多重荧光PCR检测方法，用于登革热病毒的实验室诊断和基因分型。方法选取登革热病毒Ⅰ-Ⅳ型病毒保守区设计型特异性引物探针和通用型引物探针。评估多重荧光PCR检测方法的特异性、重复性和检测限；并对20份阳性样本进行检测。结果20个登革热阳性核酸标本在通用型检测全部为阳性，特异性型别检测发现登革热病毒Ⅰ型10例、登革热病毒Ⅱ型3例、登革热病毒Ⅲ型3例、登革热病毒Ⅳ型4例；20名正常无症状人群标本提取的核酸和HIV、HCV和HEV通用型和特异性型别检测全部为阴性。梯度检测的变异系数均小于5％。对登革热Ⅰ-Ⅳ型病毒检测最低检测限达10^3 eopies／ml。结论本研究建立的登革热病毒双靶基因多重荧光PCR检测及分型方法具有特异性好、重复性好、快速易操作等优点，可用于登革热病毒的快速检测和基因分型鉴定。
- 王佃鹏朱玉兰刘胜牙董瑞玲甄胜西
- 关键词：登革热基因分型
- 北京市2006年HIV-1流行毒株的gag和env基因序列测定及亚型分析被引量：9
- 2007年
- 目的监测2006年北京市北京户籍HIV感染者中HIV-1型流行病毒株的亚型分布特点和变化规律。方法采集北京市2006年新确认北京户籍HIV-1感染者的抗凝全血样品32份，分离血浆，提取病毒RNA，用巢式聚合酶链反应方法扩增病毒gag和env基因，并进行序列测定和亚型分析。结果系统进化分析表明北京户籍HIV-1感染者样品分别属于5个亚型，分别为B亚型9份，泰国B亚型2份、C亚型2份，流行重组型CRF07BC亚型5份，流行重组型CRF01_AE亚型4份。结论北京市居民中已存在多种HIV-1亚型和流行重组型，应加强对HIV-1毒株亚型变异的监测，及时调整防治策略。
- 叶景荣邢辉刘海林黑发欣赵月娟刘胜牙孙伟东张启云张琴卢红艳贺雄邵一鸣
- 关键词：人类免疫缺陷病毒1型巢式聚合酶链反应
