单莹
- 作品数：3 被引量：3H指数：1
- 供职机构：东南大学附属中大医院更多>>
- 发文基金：江苏省自然科学基金南京市科技发展计划项目教育部留学回国人员科研启动基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 细胞增殖相关基因p16,PCNA和CyclinD1在尖锐湿疣中的表达被引量：3
- 2013年
- 目的探讨细胞增殖相关基因p16,PCNA和CyclinD1在尖锐湿疣中的表达及意义。方法分别采用免疫组织化学和RT-PCR法检测30例尖锐湿疣、寻常疣、跖疣中细胞增殖基因p16,PCNA和CyclinD1的表达情况,并与30例正常包皮组织进行对照。结果 p16蛋白在尖锐湿疣、寻常疣、跖疣和正常对照中的阳性表达率分别为:26.67%,16.67%,6.67%和0;p16 mRNA的阳性表达率分别为:23.33%,16.67%,6.67%和0。疣皮损p16蛋白表达评分和mRNA光密度高于正常对照,差异有统计学意义(P<0.05)。PCNA蛋白在各组的阳性表达率分别为:93.33%,86.67%,76.67%和70.00%;PCNA mRNA的阳性表达率分别为:90.00%,76.67%,70.00%和70.00%。疣皮损PCNA蛋白表达评分和mRNA光密度高于正常对照,差异有统计学意义(P<0.05)。CyclinD1蛋白和mRNA在各型疣和正常对照阳性表达率均为0。结论 p16和PCNA基因在尖锐湿疣、寻常疣和跖疣的发生发展中起一定作用,尤其是对尖锐湿疣的促增殖作用显著。
- 靳华张红叶单莹董正邦潘永正张丽华王飞
- 关键词：尖锐湿疣HPV细胞增殖相关基因P16PCNACYCLIND1
- 携人乳头瘤病毒6型全基因细胞的组织工程皮片培养的初步研究
- 2015年
- 目的：建立人乳头瘤病毒6型（HPV6）全基因体外组织工程皮片培养模型，为进一步研究 HPV病毒周期奠定基础。方法用电转的方法，将 HPV6全长线性基因和质粒 pEGFP-▲EGFP 共转染 hTERT 细胞，G418抗性筛选，Southern 印迹法检测细胞内 HPV 病毒含量；3T3 J2滋养层细胞、I 型鼠尾胶原与含 HPV6基因的 hTERT 细胞（HPV6.hTERT 细胞）混合后，在金属网格上共同培养，逐渐形成皮片样结构。 HE 染色和免疫组化检测皮片的组织结构和 HPV6 L1蛋白表达，电镜检查皮片病毒颗粒。结果 HPV6全长线性基因成功转入 hTERT 细胞，Southern 印迹法检测细胞内含 HPV6 DNA；与3T3 J2细胞、I 型鼠尾胶原共同培养的 HPV6. hTERT 细胞随时间而增殖分化，逐渐形成具有疣状增生外观的皮片。皮片 HE 染色显示，培养7 d 即出现典型的皮肤分层结构；培养21 d 皮片可见明显乳头瘤样增生、空泡细胞、角化过度、角化不全等 HPV 感染组织病理表现。免疫组化显示皮片上部有 HPV6 L1蛋白表达。电镜检测发现皮片中存在 HPV6病毒颗粒。结论 HPV6全基因组织工程皮片培养模型为 HPV 的生物学研究提供了一个平台，但在应用上有一定的局限性。
- 王飞郭宗科张红叶潘永正董正邦陈梅单莹严翘余卫平
- 关键词：病理学病毒包膜蛋白质类
- 人乳头瘤病毒6型全基因转染hTERT细胞
- 2015年
- 目的探讨共转染与筛选技术获得稳定携带有HPV6全基因细胞的可能性,为HPV6全基因体外培养模型的建立奠定基础。方法质粒p EGFP-1用限制性内切酶切下EGFP段,凝胶电泳,纯化取掉EGFP段的DNA片段,T4 DNA连接酶进行线状DNA的自身环化,转染DH5a细胞,抗生素筛选,获去掉EGFP片段的新质粒p EGFP-△EGFP,多组内切酶酶切鉴定。限制性内切酶切下质粒p SP65-HPV6的HPV6全长基因,纯化后获HPV6全长线性基因。将线性HPV6基因和质粒p EGFP-△EGFP电转法共转染h TERT细胞,抗生素筛选、传代,Southern blot方法检测细胞内HPV6 DNA。结果HPV6基因组DNA转至h TERT细胞,经G418筛选1d,培养皿内可见对G418抗性的阳性细胞克隆出现,其形态与普通h TERT细胞相似。用Southern blot检测细胞内HPV11基因组的存在,传3代后,细胞内依然检测到HPV6 DNA存在。结论 HPV6基因组DNA可通过电转法成功导入h TERT细胞内,通过筛选可获得阳性细胞,HPV6 DNA在细胞内可保持3代以上。
- 郭宗科王飞张红叶潘永正董正邦陈梅单莹严翘余卫平
- 关键词：转染
