吕倩
- 作品数：23 被引量：40H指数：5
- 供职机构：贵州医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金贵州省社会发展科技攻关计划项目贵州省卫生厅科学技术基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学轻工技术与工程更多>>
- 16SrRNA和secA1基因构建临床诺卡菌的系统发育树比较被引量：5
- 2017年
- 目的:比较16S rRNA和secA1基因构建诺卡菌分属Nocardia wallacei、Nocardia farcinica、Nocardia cyriacigeorgica及Nocardia otitidiscaviarum4个种系统发育树的多样性。方法:将8株临床分离的诺卡菌菌株分别接种于脑心浸出液琼脂培养基分离培养,观察其生长情况;提取细菌DNA,采用聚合酶链式反应扩增其16S rRNA和secA1基因序列并测序,所获序列与NCBI数据库进行BLAST比对,鉴定其菌种名;选取本研究鉴定的4个属共有的40个有效发表种及本研究分离的8株诺卡菌菌株的种,通过邻接法、最大似然法分别构建16S rRNA和secA1基因序列的系统发育树并比较。结果:本研究所收集的诺卡菌分属Nocardia wallacei、Nocardia farcinica、Nocardia cyriacigeorgica及Nocardia otitidiscaviarum 4个种,且Nocardia wallacei、Nocardia farcinica及Nocardia cyriacigeorgica基于secA1基因构建的系统发育树较16S rRNA在种内菌株亲缘关系的分化差异程度高及分类多样性多(P<0.05),而Nocardia otitidiscaviarum的分化程度和分类多样性在16S rRNA和secA1基因构建的系统发育树间差异无统计学意义(P>0.05)。结论:secA1基因用于诺卡菌种群的系统发育分析和分子进化的研究,较16S rRNA具有高度分辨率的优势。
- 王颜颜夏茂宁欧维正黄劲明春艳刘涛华吕倩周兵康颖倩
- 关键词：放线菌属诺卡菌RRNA基因A1基因
- 粪肠球菌导致两例新生儿肠炎的病原学分析
- 目的通过形态学及分子生物学方法分离及鉴定贵阳某医院新生儿科病房新生儿便血中的病原菌,结合医院诊断,分析新生儿便血原因,辅助临床诊断与治疗:方法1.直接标本涂片镜检观察鉴定;2.采用营养肉汤培养基富集培养,通过形态学观察结...
- 牟丽丽王颜颜刘涛华吕倩金方康颖倩
- 关键词：粪肠球菌耐药
- 念珠菌RPB1基因片段PCR扩增条件的优化被引量：1
- 2016年
- 目的:优化念珠菌RNA聚合酶Ⅱ大亚基(RPB1)基因片段的PCR扩增条件,筛选适宜念珠菌RPB1的PCR扩增体系。方法:使用改良CTAB法提取念珠菌基因组DNA,分别调整念珠菌RPB1基因片段PCR扩增过程中dd H2O含量、DNA模板含量、退火温度或循环次数,比较不同反应体系的PCR扩增效果。结果:在26μL的PCR反应体系中,DNA模板含量2μL、退火温度为56℃、循环40次时是念珠菌RPB1基因片段最稳定的PCR扩增反应体系,扩增得到24条皱褶念珠菌RPB1基因片段序列,上传至Gen Bank。结论:优化PCR扩增条件后,念珠菌RPB1基因片段的目的条带更明亮、清晰,为基因测序及深入研究念珠菌的工作奠定了基础。
- 吕倩王颜颜刘涛华牟丽丽陈燕康颖倩
- 关键词：念珠菌属CTAB基因扩增
- D1/D2、MLST及MALDI-TOF MS在新生隐球菌分类中的应用被引量：7
- 2016年
- 目的:比较单一D1/D2区域测定、多位点测序分型技术(MLST)和基质辅助激光解吸-飞行时间质谱技术(MALDI-TOF-MS)在新生隐球菌(Cryptococcus podzolicus)及与之邻近的其他种属的分类研究的稳定性和可靠性。方法:挑选以Cryptococcus podzolicus为主及与之相邻的其他种和属的菌株共20株及1株outgroup模式菌株,运用酵母菌基因组提取试剂盒提取其DNA,PCR扩增5个管家基因(ITS,D1/D2,rpb1,rpb2,tef1)并测序,以Bayesian法(Mr Bayes3.2.1)、最大似然法、邻接法(MEGA 6.0软件)分别构建5个管家基因及D1/D2基因序列的系统发育树;应用MALDI-TOF-MS采集蛋白指纹图谱,在Bruker Daltonics数据库(BDAL)和CBS真菌保藏中心数据库信息的基础上,对20株菌进行聚类分型,构建聚类分型树状图。结果:3种方法所得树状图在种间的层面上,均出现了a、b、c 3个分支;在种内的层面上,特别是a这一分支,均为Cryptococcus podzolicus,单一D1/D2区域所构建的系统发育树分化程度不大,各菌株间无明显的分类多样性,而MLST及MALDI-TOF MS所得到的树状图在种内均出现了明显的分类多样性及亲缘关系的差异性。结论:MLST及MALDI-TOF MS均可作为隐球菌属中菌株分类鉴别中有效的分子生物学方法,能可靠地揭示隐球菌属中各菌种的种间及种内的遗传进化关系,MALDI-TOF-MS比MLST则更为快捷准确。
- 刘涛华王颜颜吕倩牟丽丽陈燕康颖倩
- 关键词：发育生物学
- 新生隐球菌毒力相关基因的重测序筛选及基因敲除实验研究
- 本研究主要探讨可用于筛选引起新生隐球菌格鲁比变种(Cryptococcus neoformans var.grubii.)毒力差异相关基因的有效方法策略,并从中筛选和验证与毒力相关的差异基因。实验中筛选了毒力差异明显的两...
- 陈玉如赵亮金方牟丽丽刘涛华吕倩王颜颜康颖倩
- 关键词：新生隐球菌毒力基因基因敲除
- 粪肠球菌导致两例新生儿肠炎的病原学分析
- 目的通过形态学及分子生物学方法分离及鉴定贵阳某医院新生儿科病房新生儿便血中的病原菌,结合医院诊断,分析新生儿便血原因,辅助临床诊断与治疗:方法1.直接标本涂片镜检观察鉴定;2.采用营养肉汤培养基富集培养,通过形态学观察结...
- 牟丽丽王颜颜刘涛华吕倩金方康颖倩
- 关键词：粪肠球菌耐药
- 文献传递
- 新生儿肠炎粪肠球菌16S rRNA鉴定分析被引量：1
- 2014年
- 目的:分离和鉴定新生儿肠炎患儿便血中的病原菌,结合临床诊断,分析新生儿肠炎病因。方法:对2例新生儿肠炎病例的便血标本进行研究,(1)直接涂片镜检观察鉴定;(2)菌株纯化筛选;(3)采用CTAB提取法提取菌株的DNA,并通过PCR扩增菌株16S rRNA序列,将所获得的序列与Gen Bank数据库进行BLAST比对;(4)采用Kirby-Bauey纸片扩散法进行药物敏感试验。结果:(1)便血标本共分离纯化2株可疑菌株;(2)通过16S rRNA序列与Gen Bank数据库进行BLAST比对,两株菌株的序列与粪肠球菌的相似度达(99%);(3)分离的粪肠球菌对氨苄西林敏感性较高。结论:新生儿肠炎是由粪肠球菌感染引起,标本直接镜检与药敏试验有利于早期诊断及抗生素的合理应用。
- 康颖倩牟丽丽周晓明王颜颜刘涛华金方吕倩
- 关键词：肠炎粪肠球菌
- 新生隐球菌毒力差异菌株的全基因组测序及毒力相关基因的筛选被引量：1
- 2016年
- 目的了解及分析新生隐球菌格鲁比变种（Cryptococcus neoformans var grubii）两组毒力差异明显的多位点微卫星型（multilocus microsatellite typing，MLMT）菌株的全基因组序列，筛选出引起其毒力差异的相关基因。方法选取毒力差异最为明显的不同基因型菌株各1株进行全基因组重测序，运用比较基因组学方法全面分析测序结果，使用非同义SNPs（non-synonymous SNPs，nsSNPs）、无义突变SNPs、产生移码突变InDels的策略广泛筛选差异基因。对筛选出的基因在所有实验菌株中进行DNA测序验证，并提取总RNA，采用快速扩增5’和3’cDNA末端（rapidamplificationof5’and3’cDNAends，RACE）技术，克隆后测序获得对应基因的完整cDNA全长序列信息。结果通过全基因组重测序，环境株IFM56731和临床株IFM56800均分别获得127倍和111倍覆盖率的有效数据。分别对SNPs和InDels数据进行统计分析，应用无义突变SNPs和产生移码突变的InDel分别筛选出3个差异基因。对筛选出的6个基因在所有实验菌株中进行扩增测序，并对其中3个基因进行cDNA的测序分析，最终确定基因CNAG_01032的转录序列位置和结构，并验证了预测的无义突变位点存在于实际的mRNA中。结论本研究通过全基因重测序数据分析证明，应用无义突变SNPs和产生移码突变的InDels进行差异基因筛选的策略具有较好针对性，并筛选出6个潜在与毒力相关的基因，通过对所有实验菌株的测序和对全长cDNA的测序验证，最终筛选出基因CNAG一01032为可能引起菌株毒力差异的基因。
- 刘涛华王颜颜陈玉如赵亮吕倩牟丽丽康颖倩
- 关键词：全基因序列分析毒力
- 不同来源茶树组织的茶多酚含量比较
- 2016年
- 目的:比较不同茶树组织中茶多酚的含量,为茶树修剪枝叶的利用提供参考。方法:通过生石灰水沉淀法提取绿茶树的新鲜叶、干燥叶、新鲜树枝、干燥树枝的茶多酚粗提取物和纯化茶多酚,比较4种茶树组织的茶多酚粗提取物质量及提取率;采用分光光度计法测定标准茶多酚吸光度(A)值,绘制茶多酚标准曲线,通过4种茶树组织纯化茶多酚的吸光度(A)值在标准曲线上获得茶多酚含量并计算其纯度,比较4种茶树组织纯化茶多酚含量和纯度。结果:茶树组织茶多酚粗提取物质量及提取率从高到低依次为新鲜叶、干燥叶、新鲜树枝及干燥树枝,茶多酚含量从高到低依次为新鲜叶、干燥叶、新鲜树枝及干燥树枝,纯度从高到低依次则为新鲜叶、新鲜树枝、干燥叶及干燥树枝。结论:新鲜茶叶和新鲜茶树枝的茶多酚含量较高,可为茶叶及茶树枝综合开发利用提供参考。
- 吕倩涂云华李剑刘涛华张荣庆罗垚康颖倩
- 关键词：茶多酚分光光度法
- 新生隐球菌毒力相关基因的重测序筛选及基因敲除实验研究
- 本研究主要探讨可用于筛选引起新生隐球菌格鲁比变种(Cryptococcus neoformans var.grubii.)毒力差异相关基因的有效方法策略,并从中筛选和验证与毒力相关的差异基因。实验中筛选了毒力差异明显的两...
- 陈玉如赵亮金方牟丽丽刘涛华吕倩王颜颜康颖倩
- 关键词：新生隐球菌毒力基因基因敲除
- 文献传递
