周海俊
- 作品数：4 被引量：15H指数：2
- 供职机构：四川大学华西医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金陕西省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人结直肠癌干细胞微球体培养及鉴定被引量：6
- 2009年
- 目的探索结直肠癌细胞系干细胞微球体培养方法,并对Colo205细胞微球体是否具有肿瘤干细胞特性进行鉴定。方法结直肠癌Lovo、Colo205及SW480细胞在含生长因子无血清培养基(SFM)中悬浮培养。流式细胞术、裸鼠成瘤实验、Transwell小室实验分别检测Colo205细胞及其微球体表面标记分子CD133、CD44表达,体内成瘤能力和体外侵袭能力。微球体细胞在含血清培养基中贴壁培养后流式检测CD44分子表达变化。RT-PCR分析Colo205细胞及其微球体CD44、Musashi-1及Oct4 mRNA的表达。结果3种细胞系均能在特殊配制的SFM中形成可以稳定传代的微球体,SFM新鲜配制、用细胞分离剂Accutase替代胰酶传代以及保持细胞的悬浮状态均有利于微球体的形成和增殖。Colo205微球体中CD44+细胞比例显著增多,贴壁分化后逐渐减少至与Colo205细胞无明显差异。与Colo205细胞相比,微球体具有更强的侵袭能力和体内成瘤能力,并高表达干细胞标记分子Musashi-1及Oct4 mRNA。结论利用特制SFM悬浮培养可得到结直肠癌细胞系微球体,这种微球体富集了肿瘤干细胞。
- 周继陶龚日祥陈向征周海俊朱亚杰刘素蕊黄娟毕锋
- 关键词：结直肠癌肿瘤干细胞微球体无血清培养基
- RhoE对cd44基因启动子的转录活性及大肠癌细胞系恶性生物学行为的影响被引量：2
- 2011年
- 目的研究RhoE对cd44基因启动子的转录调控,并探讨RhoE对裸鼠体内成瘤性的影响。方法采用PCR技术从人胚肾HEK293细胞中扩增出cd44启动子,并将其插入荧光素酶报告基因载体pGL3-Basic中,经测序确定所扩增的DNA序列,并将其转染入SW480及LoVo细胞中监测其活性。将pcDNA3.1-RhoE和pcDNA3.1分别与pGL3-CD44 promoter共转染大肠癌LoVo细胞和SW480细胞,双荧光素报告基因检测活性。另外将pcDNA3.1-RhoE和对照组分别稳定转染LoVo细胞和SW480细胞,并将筛选的稳定表达的细胞分别接种裸鼠,观察肿瘤的生长;用免疫组化的方法检测RhoE对肿瘤组织细胞形态及CD44分子表达的影响。结果测序结果表明,扩增的cd44启动子序列正确,双报告基因实验检测荧光素酶活力表明构建的报告基因具有启动子活性。含cd44启动子序列的报告基因在pcDNA3.1-RhoE阳性的LoVo细胞中表达受到抑制;HE染色显示pcDNA3.1-RhoE转染组较对照组肿瘤细胞明显变小,且大小和形态呈现一致性,已没有瘤巨细胞,相应的肿瘤细胞核的体积也变小。结论 RhoE通过抑制cd44基因启动子的活性部分逆转肿瘤的恶性生物学行为。为研究RhoE表达与cd44基因的关系及CD44蛋白表达与结直肠癌发生、发展及浸润转移的关系提供了良好的实验基础。
- 周海俊李立兰岳彩霞魏雯李楠静唐秋琳毕锋
- 关键词：RHOE荧光素酶报告基因体内成瘤
- Rac1b小干扰RNA对结直肠癌细胞恶性生物学行为的影响
- 2011年
- 目的观察Rac1b小干扰RNA(Si-Rac1b)对结直肠癌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响。方法 Si-Rac1b在lipofectamineTM2000介导下转染筛选出的Rac1b高表达的结直肠癌细胞SW1116,分别从RNA和蛋白水平检测转染细胞Rac1b的表达,采用细胞增殖实验,损伤刮擦实验,体外侵袭实验(Trans well小室)和hoechst方法分别检测Si-Rac1b转染细胞的增殖潜力,迁移与侵袭能力和凋亡的变化。结果成功转染Si-Rac1b的肿瘤细胞,Rac1b mRNA和蛋白表达都明显下调,而Rac1 mRNA和蛋白表达无明显变化;Si-Rac1b可明显抑制结直肠癌细胞SW1116的增殖、迁移和侵袭均并能促进SW1116细胞的凋亡。结论 Si-Rac1b能够部分逆转结直肠癌细胞SW1116的恶性生物学行为。
- 李立兰周海俊岳彩霞李楠静魏雯唐秋琳毕锋
- 蛋白酶体抑制剂MG132对RhoA诱导的肿瘤血管生成的抑制作用的研究被引量：7
- 2011年
- 目的探讨RhoA对血管内皮生长因子(VEGF)、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)和微血管生成的影响以及蛋白酶体抑制剂MG132对RhoA调控作用的影响。方法将组成性激活的RhoA的真核表达质粒,在脂质体介导下转染胃癌细胞系MKN-45,经G418筛选出阳性单克隆并用Western blot检测是否稳定转染成功;应用ELISA检测不同细胞培养上清中VEGF的含量;建立组成性激活RhoA的荷瘤鼠模型,并用MG132治疗并观察治疗效果;用免疫组化染色方法检测RhoA及MG132对肿瘤细胞表达HIF-1α、VEGF及CD31的影响。结果组成性激活RhoA的稳定转染细胞株构建成功;组成性激活的RhoA促进VEGF的分泌,而MG132抑制VEGF的分泌;组成性激活的RhoA促进肿瘤的生长,差异有统计学意义(P<0.05),MG132抑制肿瘤的生长,差异有统计学意义(P<0.01);组成性激活的RhoA促进HIF-1α、VEGF及CD31的表达,MG132抑制HIF-1α、VEGF及CD31的表达,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 MG132通过抑制RhoA对HIF-1α、VEGF及CD31的上调来影响肿瘤血管的生成。
- 岳彩霞马骥周海俊唐秋琳李立兰毕锋薛妍
- 关键词：RHOA微血管密度缺氧诱导因子-1ΑMG132
