宁钧宇
- 作品数：11 被引量：70H指数：5
- 供职机构：北京大学基础医学院生理学与病理生理学系更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划教育部科学技术研究重大项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 应用RNA干扰技术研究激素非依赖性高转移潜能前列腺癌细胞中survivin的表达及意义被引量：3
- 2006年
- 目的研究 survivin 在激素非依赖性高转移潜能前列腺癌中的表达及其与前列腺癌的生物学行为及侵袭和转移潜能的相关性。方法应用 RNA 干扰技术构建 survivin 真核表达载体,转染人激素非依赖性前列腺癌高转移亚系 PC-3M-1E8细胞系。通过细胞生长曲线、肿瘤细胞裸鼠异种接种、软琼脂集落形成实验检测体内、体外细胞生长能力;流式细胞术检测 survivin RNA 干扰质粒对细胞周期及细胞凋亡的影响,Western blot 检测 caspase3活性片段,观察 survivin 抑制细胞凋亡的情况;Matrigel 穿膜实验检测肿瘤细胞体外侵袭能力。结果稳定转染 survivin RNA 干扰质粒的 PC-3M-1E8细胞中 survivin 的 mRNA 及蛋白水平明显降低,蛋白水平与阴性对照组相比,约下降78%～80%,差异有统计学意义(P<0.01);体外培养细胞生长速度及裸鼠体内肿瘤生长速度均明显减慢,锚着不依赖性生长的能力(软琼脂克隆形成数:14.33±3.51)与阴性对照组(52.33±6.81)及空白对照组(54.00±6.00)相比明显降低(P<0.01);凋亡细胞比例明显增加,空白对照组、阴性对照组及干扰阳性组的凋亡比例分别为5.88±0.99、6.97±1.60、16.40±1.95,干扰阳性组的凋亡比例显著高于对照组(P<0.01),并伴有 caspase3活性片段的表达增加;细胞阻滞在 G_0/G_1期(干扰阳性组、阴性对照组及空白对照组的细胞 G_0/G_1期的比例分别为52.71±1.10、43.59±1.83及43.65±3.44,P<0.05),并在细胞形态学上出现多核巨细胞现象;细胞体外侵袭能力明显降低,干扰阳性组的细胞(38.67±6.59)与阴性对照组(46.07±9.97)及空白对照组(47.87±9.58)相比穿膜细胞数明显减少(P<0.05)。结论 survivin 在激素非依赖性高转移潜能前列腺癌中高表达,并与细胞凋亡、细胞生长及肿瘤侵袭有关。抑制 survivin 的表达可能成为临床治疗激素非依赖性前列腺癌的方法之一。
- 朱翔宁钧宇由江峰王洁良崔湘琳方伟岗郑杰
- 关键词：前列腺肿瘤肿瘤侵润
- 幽门螺杆菌及其CagA与胃粘膜病变相关性研究
- 宁钧宇
- 关键词：幽门螺杆菌胃粘膜
- TMSG-1基因功能的初步研究被引量：2
- 2003年
- TMSG-1是用mRNA差异显示技术克隆的转移相关基因,它在高转移肿瘤细胞系和有转移的肿瘤组织中表达下降。以高转移的前列腺癌细胞系PC-3M-1E8为受体细胞,通过基因转染技术观察了TMSG-1基因表达对细胞V-ATPase活性、细胞内pH值和细胞凋亡情况的影响,同时利用GFP对TMSG-1细胞内定位进行了分析。结果表明,V-ATPase在PC-3M-1E8细胞系,转染空载体和转染反义TMSG-1细胞系的活性无明显差异。在转染正义TMSG-1的细胞系中,V-ATPase的活性比PC-3M-1E8细胞系,转染空载体和转染反义TMSG-1细胞系均有明显增高(P
- 马春树宁钧宇由江峰柳林郑杰方伟刚王洁良崔湘琳吴秉铨
- 关键词：前列腺癌MRNA差异显示基因转染基因表达PH值
- 乙型肝炎病毒DNA多聚酶基因YMDD突变的快速检测被引量：7
- 2003年
- 裴斐郑杰宁钧宇由江峰杨京平
- 关键词：乙型肝炎病毒多聚酶基因基因突变肝移植PCR-RFLP
- G3BP与肿瘤转移相关性研究
- 宁钧宇
- 关键词：G3BP肿瘤转移前列腺癌
- TMSG-1基因转染对肿瘤转移表型的影响被引量：10
- 2003年
- 目的 :研究肿瘤转移抑制基因TMSG 1对肿瘤转移表型的影响。方法 :将含TMSG 1全长开放阅读框架的 1.5kbcDNA克隆于 pcDNA3,构建正义及反义TMSG 1cDNA真核表达载体 ,以脂质体转染人肺巨细胞癌PG的高转移亚系BE1,挑选G4 18抗性克隆 ,RT PCR检测正义或反义TMSG 1cDNA在转染细胞中的表达 ,进行转染细胞体外肿瘤生物学行为检测。结果 :RT PCR显示正义TMSG 1cDNA转染的BE1细胞 (BE1 S)中TMSG 1表达明显高于BE1及空载体对照细胞 ,反义TMSG 1cDNA转染细胞 (BE1 AS)中TMSG 1表达低于空载体对照细胞。与BE1及空载体对照细胞 (BE1 V)相比 ,BE1 AS细胞体外生长较快 ,软琼脂克隆形成能力明显增强 ;而BE1 S细胞体外生长能力没有显著改变 ,但其穿越Matrigel的能力及软琼脂克隆形成能力明显减弱。流式细胞仪分析结果显示BE1 S的G0 、G1期的细胞较BE1 V细胞比例增多 ,并且BE1 S出现了细胞凋亡峰。结论 :实验结果表明反义TMSG 1基因转染可增强BE1细胞的体外生长、体外侵袭能力及克隆形成能力。而正义TMSG 1基因转染则使BE1细胞的侵袭能力及软琼脂克隆形成能力减弱 ,而对细胞体外生长能力无明显影响。结论支持TMSG
- 边巴马春树由江峰宁钧宇方伟岗郑杰
- 关键词：肿瘤转移表型病理生理学
- G3BP单克隆抗体制备及G3BP在肿瘤组织中表达的检测被引量：18
- 2005年
- 目的 为了研究G3BP(Ras- GAPSH3- bindingprotein)的功能及作用机制,采用原核表达G3BP蛋白诱导免疫,制备抗G3BP单克隆抗体,并检测G3BP在临床常见肿瘤中的表达情况。方法 采用原核表达载体pGEX- 5X1,通过IPTG诱导,使用大肠杆菌BL21,高质量表达GST -G3BP融合蛋白。将纯化后的原核表达蛋白注射BALB/c小鼠诱导产生免疫应答,采用经典杂交瘤技术制备单克隆抗体,并应用酶联免疫吸附试验(ELISA)、蛋白免疫印迹和免疫组织化学染色ABC法进行抗体鉴定和肿瘤检测。结果 筛选出分泌抗G3BP抗体的单克隆杂交瘤细胞,免疫球蛋白亚类鉴定为IgG1,蛋白免疫印迹及抗原竞争抑制实验表明该抗体是特异性抗G3BP抗体。石蜡切片免疫组织化学法检测临床标本,在肺癌、结肠癌、胃癌、乳腺癌等临床肿瘤活检标本中检出G3BP表达明显增高。在乳腺癌临床组织标本中,G3BP表达水平与c -erbB2表达正相关,与淋巴结转移正相关。结论 成功制备了抗人G3BP单克隆抗体,所得到的特异性G3BP单克隆抗体能够应用于ELISA、Western蛋白免疫印迹以及免疫组织化学染色对不同样本的G3BP表达水平进行检测。G3BP在肺癌、结肠癌、胃癌、乳腺癌等肿瘤中表达明显增高。G3BP有可能作为肿瘤标志物辅助对乳腺癌预后的判断。
- 宁钧宇由江峰裴斐王洁良崔湘霖郑杰
- 关键词：G3BP单克隆抗体G3BP肿瘤组织基因表达免疫应答
- 不同转移潜能肿瘤细胞胸腺素β10表达水平及微丝结构的差异性研究被引量：12
- 2004年
- 目的 研究胸腺素 β10 (Thymosinβ10 ,Tβ10 )表达水平与人类肿瘤转移潜能的相关性以及细胞内微丝骨架的变化差异。方法 利用Northern blot和细胞爬片免疫组织化学的方法检测 4组 9种具有不同转移潜能的人类肿瘤细胞系中Tβ10mRNA和蛋白的表达水平 ;通过组织化学的方法显示细胞内微丝骨架的变化。结果 Tβ10的mRNA和蛋白表达水平在高转移潜能的人类肺癌、黑色素瘤和乳腺癌细胞中高于相应的不 /低转移肿瘤细胞 ;高转移性癌与不 /低转移癌细胞比较 ,前者细胞内肌动蛋白多聚体减少 ,微丝骨架杂乱、模糊 ,而低转移癌系微丝骨架粗大、结构清晰、排列整齐。结论 在所研究的人类肿瘤中 ,Tβ10mRNA和蛋白表达水平与肿瘤的转移能力呈正相关性 ;肿瘤转移潜能的增高伴有肌动蛋白多聚体的丢失和微丝结构的解聚 ,微丝骨架的这种变化与Tβ10的表达增高具有相关性。
- 刘从容马春树宁钧宇由江峰廖松林郑杰
- 关键词：肿瘤转移肿瘤细胞
- 人肿瘤转移抑制基因TMSG-1单克隆抗体的制备、鉴定及在肿瘤检测中的应用被引量：23
- 2005年
- 目的 明确人肿瘤转移抑制基因TMSG- 1蛋白分子量大小和细胞定位,制备和鉴定TMSG- 1单克隆抗体,并探讨其在临床肿瘤标本检测的价值。方法 采用多肽固相合成法 (Fmoc法 )合成 15肽TMSG -1抗原片段,并与匙孔槭血蓝蛋白 (mcKLH)偶联,免疫BALB/C小鼠,采用细胞融合、ELISA法检测和快速有限稀释法筛选和制备单克隆抗体,并应用Western印迹和免疫组织化学ABC法染色进行抗体鉴定和肿瘤检测。结果 筛选出抗TMSG- 1抗体的单克隆杂交瘤细胞系C8,免疫球蛋白亚类测定为IgM。半抗原竞争抑制实验证实该抗体是特异的抗TMSG- 1抗体。Western印迹显示不转移癌细胞亚系 2B4和LH7有明显的相对分子质量为 45 .000蛋白条带,而高转移亚系 1E8和BE1则条带很弱。细胞免疫组织化学染色显示 2B4和LH7强阳性,为细胞膜和细胞质着色;而 1E8和BE1则为阴性。石蜡切片ABC法检测 52例乳腺癌和 41例结肠癌组织中TMSG- 1蛋白表达发现:未转移的癌组织多为中度阳性或强阳性,中度以上阳性率分别为 36% (乳腺癌 )和 52. 4% (结肠癌 );而转移的癌组织多为弱阳性或阴性, 中度以上阳性率分别为 7 .4% (乳腺癌 )和 35% (结肠癌 ),统计学分析表明TMSG 1在未转移癌组织中的表达显著高于转移性癌组织 (P<0 .05)。结论 成功制备了抗人肿瘤转移抑制基?
- 裴斐由江峰宁钧宇杨京平王玉萍韩志惠王洁良崔湘霖杨邵敏郑杰
- 关键词：乳腺肿瘤结肠肿瘤肿瘤转移单克隆抗体
- 幽门螺旋杆菌及其 CagA 与胃粘膜病变相关性研究
- 宁钧宇
- 关键词：幽门螺杆菌胃粘膜病变
