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巩伟丽: 作品数：44 被引量：103H指数：6; 供职机构：军事医学科学院国家生物医学分析中心更多>>; 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划北京市科技新星计划更多>>; 相关领域：生物学医药卫生更多>>

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干涉Gankyrin基因表达对小鼠乳腺癌转移的影响被引量：2: 2013年; 目的建立稳定干涉癌基因Gankyrin的4T1-luc细胞株，探讨Gankyrin对小鼠乳腺癌转移的影响。方法采用慢病毒感染和抗性筛选方法获得稳定干涉Gankyrin的乳腺癌细胞株4T1-luc／shGankyrin，通过蛋白质印迹和实时定量PCR方法分别在蛋白质和mRNA水平检测Gankyrin的干涉效果；选用BALB／c小鼠进行4T1细胞原位种植，利用活体成像技术实时观测小鼠体内肿瘤生长和肿瘤转移情况，并对小鼠肺转移瘤进行病理学分析。结果采用免疫印迹和实时定量PCR，检测稳定敲低Gankyrin4T1细胞在蛋白质水平和mRNA水平的表达，均明显低于对照细胞，与对照细胞相比，不同干涉序列的4T1细胞mRNA水平分别为对照细胞的4．9％、25．1％、69．8％。利用活体成像进行细胞数与细胞发光强度的检测，选择细胞数与发光强度基本一致的#2细胞株进行小鼠原位种植，其产生的转移瘤进行实时观测，结果显示敲低Gankyrin的4T1细胞诱导的肺转移瘤荧光强度为3．02×10^6，而对照细胞为10．9×10^6，同时病理学证实了对照细胞产生的肺转移瘤免疫组织化学Gankyrin染色阳性，而敲低Gankyrin的4T1细胞的肺转移瘤免疫组织化学Gankyrin染色阴性。结论采用慢病毒感染的方法可以有效建立稳定敲低Gankyrin表达的细胞株；Gankyrin稳定干涉后对小鼠乳腺癌转移具有明显的抑制作用。Gankyrin有可能成为新的肿瘤治疗靶点。; 王少鑫巩伟丽韩秋影满江红靳宝锋; 关键词：慢病毒感染肿瘤转移

实时无标记肿瘤细胞迁移筛选技术体系的建立被引量：1: 2013年; 肿瘤转移是导致肿瘤患者死亡的最主要原因。细胞迁移在多步骤、多阶段的肿瘤转移过程中发挥着重要的作用。尽管有许多迁移相关分子的研究,但细胞迁移的分子机制仍不清楚。研究将xCELLigence细胞分析系统和RNA干扰技术结合,初步建立了实时无标记的肿瘤细胞迁移筛选技术体系。该技术体系的建立将为大规模的肿瘤细胞迁移筛选工作奠定基础,还将有助于发现肿瘤细胞迁移信号通路中新的调控分子,揭示肿瘤转移的分子机制。; 赵青穆蕊王少鑫韩秋影巩伟丽满江红; 关键词：肿瘤转移细胞迁移 RNA干扰

FlAsh在标记细胞内蛋白质中的应用: ＜正＞绿色荧光蛋白质GFP在生物学上已经得到广泛应用,它可以作为标记物来研究活细胞内基因、蛋白质的表达和功能定位。然而GFP无法分辨新生成的与原有的蛋白质分子,且GFP和它的不同突变; 满江红巩伟丽杨怡张飒周涛张德添; 文献传递

应用流式细胞分选技术分离人外周血原代单核细胞被引量：5: 2012年; 巨噬细胞是机体重要的免疫细胞,具有免疫调节、抗感染和抗肿瘤等重要功能。快速、有效地分离得到高纯度的人外周血单核细胞,是研究巨噬细胞功能的前提。利用细胞大小及胞内颗粒度属性对单核细胞与其他白细胞组分进行区分。通过流式细胞分选,获得了较高纯度单核细胞。单核细胞表面标志物CD14染色分析显示,该方法对单核细胞的分选效率达85%以上。进一步实验证明,分选得到的单核细胞能够在体外正常分化为巨噬细胞。; 陈媛巩伟丽湛小燕卓海龙张飒戴倩倩李涛; 关键词：人外周血

小鼠干扰素γ受体β基因启动子荧光报告载体构建及转录活性分析被引量：1: 2019年; 目的克隆小鼠干扰素γ受体β(Ifngr2)基因启动子,并应用双荧光素酶报告系统对其进行功能分析。方法首先应用欧洲启动子在线数据库(EPD)获得小鼠Ifngr2基因的启动子区域,包含转录起始位点在内的-1344～+48的DNA序列。然后以小鼠MEF细胞基因组DNA为模板,利用PCR扩增调取该序列,并进一步插入pGL4.19-luc2CP荧光素酶报告载体。通过PCR扩增获得启动子系列截短体并分别插入pGL4.19-luc2CP载体,共获得包含6个不同长度启动子序列的荧光素酶报告载体。进一步通过双荧光报告实验检测不同截短体对Ifngr2基因转录活性影响,确定其影响转录活性的关键区域。通过点突变探究潜在转录因子对Ifngr2基因转录的影响。结果成功构建小鼠Ifngr2基因启动子荧光素酶报告载体,获得有转录活性的启动子报告基因载体。启动子系列截短分析显示,-132～-97和-1059～-727包含启动子重要元件。生物信息学分析发现,在-132～-97区域内存在潜在的NF-κB结合位点,进而通过点突变实验得到验证。结论通过构建小鼠Ifngr2基因启动子报告载体并对Ifngr2启动子进行功能分析,发现小鼠Ifngr2基因启动子中的转录因子NF-κB结合区域,提示NF-κB在Ifngr2基因表达调控中起重要作用。; 王棋王心正韩秋影樊浩李亭亭巩伟丽周涛李卫华; 关键词：干扰素Γ 受体启动子转录因子转录调控

逆转录病毒感染结合流式细胞分选方法构建稳定过表达CUEDC2的MCF-10A细胞系被引量：4: 2012年; CUEDC2(CUE domain containing protein 2)是本实验室发现的功能未知蛋白质。已有研究证明CUEDC2通过抑制孕激素受体PR影响乳腺癌细胞的生长,同时CUEDC2的高表达能够降解雌激素受体ER而导致乳腺癌内分泌治疗耐药。为了深入研究CUEDC2在乳腺癌中的功能,构建了稳定过表达CUEDC2的MCF-10A细胞系。利用逆转录病毒将非融合形式的绿色荧光蛋白质GFP和CUEDC2基因稳定整合至靶细胞的基因组中,经过流式分选获得GFP阳性细胞,即为稳定表达CUEDC2的细胞株。上述方法高效快捷,极大提高了稳定细胞株的构建效率。同时该稳定细胞株的建立为CUEDC2的功能研究提供了必要的工具。; 陈媛巩伟丽韩秋影张飒李涛; 关键词：CUEDC2 稳定细胞系

荧光漂白后恢复技术及其在活细胞分子机制研究中的应用被引量：6: 2008年; 荧光漂白后恢复(FRAP)是一项利用荧光探针研究活体细胞中各类分子迁移特性的技术。简要介绍了FRAP技术的原理和具体实施要求,列出了动态比和扩散系数的计算公式,并例举了近几年FRAP技术在细胞分子机制研究中的应用。; 张志毅周涛巩伟丽张德添

磷酸酶PPM1G与IKKi相互作用下调IRF的转录活性: 2011年; 为了研究磷酸酶PPM1G对IRF信号通路的影响,首先在真核细胞中成功表达了HA-PPM1G蛋白质。应用双荧光报告系统,研究了PPM1G对IRF信号通路的影响。结果显示,过表达PPM1G能够显著抑制IKKi激活的IRF转录活性。进一步免疫共沉淀的实验结果表明,PPM1G和IKKi在细胞内存在相互作用。; 陈亮穆蕊甄诚高彦飞李腾周杰于鸣巩伟丽张维娜; 关键词：IRF 转录活性

蛋白质定位技术平台的建立及应用: ＜正＞1.成果的创新点建立了蛋白质定位全方位研究的复杂体系,特别是创新性地建立了基于细胞微阵列技术的高通量、大规模的多蛋白质定位技术,为功能蛋白质组学研究提供了一种全新的技术手段。同时利用该技术平台在哺乳动物细胞中筛选泛...; 周涛张学敏梁冰张志毅巩伟丽张飒李慧艳何昆李爱玲; 文献传递

CUEDC1抑制TNFα激活的AP—1的转录活性: 2010年; 为了研究CUEDC1蛋白质是否参与了AP—1信号通路,首先在真核细胞中成功表达了Flag—CUEDC1蛋白质,通过双荧光报告系统,研究了CUEDC1对AP—1信号通路的影响。结果显示,过表达CUEDC1能够显著抑制TNFα激活的AP—1转录活性,而对IFNα激活STAT3的转录活性没有影响,并且CUEDC1抑制AP—1转录活性影响是发生在TRAF2分子或者上游水平。; 王晨辉李文龙魏传宇穆蕊陈亮方迪峰周涛靳宝锋巩伟丽李爱玲; 关键词：转录活性

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