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CIP2A shRNA真核表达载体的构建及其对胃癌细胞增殖的抑制作用被引量：3: 2015年; 目的构建靶向CIP2A的shRNA真核表达质粒并探讨其对胃癌细胞增殖的调节作用。方法根据siRNA原理设计4对靶向CIP2A的siRNA序列,克隆到真核表达载体p GPU6/GFP/Neo中(shRNA-1、2、3和4)。脂质体转染人胃癌细胞系BGC-823,real-time PCR和Western blot法检测并筛选最佳抑制效率的shRNA表达质粒,CCK-8法检测对胃癌细胞增殖的影响。结果 4个靶向CIP2A的shRNA真核表达质粒经限制性酶切和测序证实基因已正确插入,转染效率可达到70%以上。转染后24、48和72 h,4个质粒均明显降低BGC-823细胞内CIP2A mRNA和蛋白的表达。相较于其他3个重组质粒,shRNA-1的抑制作用更为显著,且对胃癌细胞增殖有明显的抑制作用(P<0.05)。结论成功构建的靶向CIP2A的shRNA真核表达质粒,可有效抑制胃癌细胞CIP2A的mRNA和蛋白表达,并抑制胃癌细胞的增殖,为今后研究CIP2A在胃癌中的作用机制奠定了基础。; 师海蓉; 关键词：CIP2A 短发卡RNA 胃癌蛋白磷酸酶2A

沉默I2PP2A基因对胃癌BGC-823细胞增殖和迁移能力的影响被引量：6: 2015年; 目的探讨siRNA沉默I2PP2A基因表达对人胃癌BGC-823细胞增殖和迁移的影响及其可能的分子机制。方法脂质体转染法将靶向I2PP2A的短发夹状RNA(short hairpin RNA,shRNA)转染BGC-823细胞;Real-time RT-PCR和Western blot观察转染后胃癌BGC-823细胞I2PP2A mRNA和蛋白表达的变化;WST-1法和Transwell小室分别检测各组细胞增殖和细胞迁移能力的变化;最后采用蛋白质印迹分析法检测三组胃癌细胞中cyclin D1和MMP-9蛋白的表达。结果转染I2PP2A siRNA后胃癌BGC-823细胞的I2PP2A mRNA及蛋白表达明显受抑制;I2PP2A mRNA和蛋白表达下调抑制胃癌BGC-823细胞的增殖和迁移,并降低cyclin D1和MMP-9蛋白的表达。结论 I2PP2A表达下调介导的胃癌细胞增殖抑制和迁移降低可能与cyclin D1和MMP-9表达下调密切相关,I2PP2A可能成为胃癌治疗的新靶点之一。; 张荣姜涛龙炽慧孙贝贝鄢志雄师海蓉; 关键词：小分子干扰RNA 胃癌细胞迁移

病理生理学实验课的几点体会被引量：1: 2013年; 病理生理学的学科性质决定了病生教学在注重知识传授的同时,更要注重学生的创新思维、主动学习精神及科研素质的培养等,为后续的临床课程学习及学术探讨打下坚实的基础。因此提高病理生理学实验的教学质量,进一步推进教学改革,是每位教师的努力方向,也是反映教师授课质量的直观指标。在病理生理学实验教学中,不断吸取借鉴其他院校经验和改革成果,也注重自己的教学积累,在教学中有以下几点体会:注重和相关学科及其他院校及临床的交流,纳百川而取其精华;关注最新科研动态,密切联系大学生科研,在思想和实践两个方面提升教学效果;淡化"教",强化"学",确定学生的主体地位:淡化"教",并非不教,而是更加注重传授"渔",强化"学",除了强调自学书本上的知识,更意味着学习的主动性和在现有知识上的扩展,形成有效的学习方式。总之,在教学中既注重传统教学中好经验的保留,也注重思想的创新,使病理生理学教学既有沉淀又有革新,不断促进病生教学的发展。; 师海蓉; 关键词：病理生理学

病理生理学分层次实验教学的探索被引量：5: 2010年; 分层次实验教学以促进学生知识与能力的全面发展为目的。在现有验证性实验基础上增设综合性和创新性实验。调动学生的学习主动性，提高其独立思考和解决问题的能力，取得很好的教学效果。; 张磊李艳师海蓉邓昊镇鸿燕; 关键词：病理生理学分层次实验教学教学改革

慢病毒介导的shRNA靶向干扰I2PP2A胃癌稳定细胞株的建立: 2015年; 背景与目的:蛋白磷酸酶2A抑制剂-2(inhibitor 2 of protein phosphatase 2A,I2PP2A)在包括胃癌的多种肿瘤中过度表达,提示其可能在胃癌的发生中发挥重要作用。为进一步探讨I2PP2A的功能及其在胃癌发生中的作用,建立稳定抑制I2PP2A基因表达的人胃癌BGC823细胞株。方法:筛选出I2PP2A基因的RNA干扰(RNA interference,RNAi)有效靶序列,合成靶序列的Oligo DNA并构建p GLV2_sh RNA_I2PP2A慢病毒载体,酶切和测序鉴定正确后,经病毒包装,感染BGC823细胞,经嘌呤霉素筛选稳定表达细胞株,通过实时定量PCR(real-time PCR,RT-PCR)和蛋白[质]印迹法(Western blot)鉴定I2PP2A的表达。结果:重组慢病毒质粒经测序鉴定正确;RT-PCR和Western blot证实干扰I2PP2A后,BGC823细胞株中I2PP2A表达水平明显降低,抑制率约为90%。结论:成功构建了I2PP2A sh RNA慢病毒表达载体,建立了稳定抑制I2PP2A基因表达的人胃癌BGC823细胞株,为进一步研究I2PP2A在胃癌发生中的作用提供了可靠的细胞模型。; 师海蓉陈莹李长雷邱文洪; 关键词：胃癌慢病毒

靶向SET的shRNA真核表达质粒的构建及鉴定: 2011年; 目的:针对PP2A内源性抑制剂SET基因的不同部位,构建靶向SET的shRNA真核表达质粒,鉴定并筛选出最佳抑制效率的表达质粒.方法:针对SET基因的不同部位设计4对短发卡RNA(shRNA)的寡核苷酸片段,克隆到真核表达载体pGPU6中,构建靶向SET的shRNA真核表达质粒pGPU6/GFP/Neo-SET-shRNA-1、2、3、4.利用脂质体转染人胃癌细胞株BGC-823,Western blot法检测并筛选最佳抑制效率的shRNA表达质粒.结果:4个靶向SET的shRNA真核表达质粒pGPU6/GFP/Neo-SET-shRNA-1、2、3、4经限制性酶切和测序证实基因已正确插入,荧光显示转染效率可达到80%以上.Western blot法证实pGPU6/GFP/Neo-SET-shRNA-3明显降低BGC-823细胞内SET蛋白的表达.pGPU6/GFP/Neo-SET-shRNA-3对SET蛋白表达的抑制效应在72h达到最强.结论:成功构建靶向SET的shRNA真核表达质粒pGPU6/GFP/Neo-SET-shRNA-1、2、3、4,并筛选出最佳抑制效率的表达质粒,为今后研究SET在胃癌中的作用机理奠定了基础.; 师海蓉付政祺邓昊王绪明镇鸿燕陈莹刘丽江; 关键词：SET 短发卡RNA 蛋白磷酸酶2A

ER-α36介导的胃癌细胞生长与侵袭: 刘丽江邓昊黄萱镇鸿燕周红艳李艳陈莹付政祺邹丰师海蓉陈琼霞高友晶; 该项研究由国家自然科学基金面上项目资助，在于阐明雌激素在胃癌中的作用与机制。该项研究首次确定了胃癌细胞及人体胃癌组织中ER-α36(经典的ER-α的变异体)的表达与定位，并发现ER-α36的表达与肿瘤的浸润深度有关。采用...; 关键词：; 关键词：胃癌治疗

病理生理学的教学体会: 2014年; 病理生理学是一门重要的医学专业基础课,学好这门学科对医学生来说具有重要意义。作者通过教学实践,总结了几点在教学中可以帮助提高教学效果的经验。; 师海蓉; 关键词：病理生理学教学效果

ER-α36真核表达载体构建及稳定表达细胞株的建立: ＜正＞目的:ER-α36是新近发现—种新的ER-α66同源异构体,项目组前期研究发现人胃腺癌组织中存在ER-α36,主要定位于细胞质,癌组织中ER-α36 mRNA的含量明显高于癌旁组织和正常组织,且与性别无关,提示ER...; 师海蓉邓昊刘丽江; 文献传递

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师海蓉