廉虹
- 作品数：19 被引量：23H指数：3
- 供职机构：中国医学科学院北京协和医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金北京市自然科学基金卫生部卫生公益性行业科研专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 应用CRISPR/Cas13b编辑技术治疗TNNT2R141W转基因小鼠的扩张型心肌病被引量：1
- 2020年
- 应用CRISPR/Cas13b系统对TNNT2R141W转基因扩张型心肌病(dilated cardiomyopathy,DCM)小鼠进行探索性治疗,尝试发现治疗扩张型心肌病的一种新方式,为CRISPR/Cas13b系统在体内应用提供实验基础。随机设计11种Cas13b-TNNT2 gRNA并成功构建表达质粒,把它和人源TNNT2过表达质粒共同转染到293T细胞中,通过实时定量PCR(Q-PCR)检测人源TNNT2 mRNA的表达水平。结果显示,gRNA2引导Cas13b敲低目标基因的效率最高,达到80%(P<0.0001)。把gRNA2表达质粒包装到慢病毒载体中,转导出生后1 d的DCM小鼠原代心肌细胞。Q-PCR检测结果表明,CRISPR/Cas13b系统对人源TNNT2 mRNA敲低效率达到55%(P<0.01)。把PspCas13b和gRNA2的表达载体分别包装到AAV9病毒载体中,再将200μL约1×1012AAV9病毒颗粒通过尾静脉注射到4月龄DCM小鼠体内,待注射小鼠发育至5月龄时。Q-PCR检测结果显示,AAV9+DCM组TNNT2R141W表达水平较未注射组对照明显下降至40%(P<0.01)。对5月龄野生型(WT)、DCM(未注射病毒组)和AAV9+DCM(基因组编辑工具注射组)三组小鼠的心脏形态、心功能、心肌纤维化和心力衰竭等表型的观察结合显示:DCM小鼠的心血管形态异常,而AAV9+DCM小鼠心血管形态趋于正常。对3组小鼠的心脏进行超声心动图,并对心功能指标进行统计发现,DCM组较WT组小鼠的左心室射血分数(left ventricular percent ejection fraction,LV EF%)、左心室短轴缩短率(left ventricular percent fractional shortening,LV FS%)分别下降50.4%(P<0.0001),55.1%(P<0.0001),而AAV9+DCM组较DCM组小鼠的LV EF%、LV FS%分别上升66.5%(P<0.01),77.0%(P<0.01)。通过Q-PCR和天狼星红染色检测3组小鼠的心肌纤维化程度。结果显示,DCM组较WT组小鼠的Col3a1和Postn两种纤维化基因,分别高表达5.2倍(P<0.001)、4.5倍(P<0.01),而AAV9+DCM组较DCM组小鼠两种基因表达分别下降2.0倍(P<0.05)、1.4倍(NS)。天狼星红染色结果显示,纤维化区域明显下降;通过Q-PCR和蛋白质免疫
- 匡歆王玉瑶聂宇李昊陈显达廉虹刘立会李佳成郭睿
- 关键词：扩张型心肌病
- 小鼠病理性心肌肥厚伴随心外膜激活
- 2015年
- 目的研究心外膜细胞在小鼠病理性心肌肥厚中的性状变化。方法利用异丙肾上腺素(isoproterenol,Iso)诱导小鼠发生病理性心肌肥厚。腹腔连续注射7天和14天后,应用超声和麦胚凝集素(WGA)染色检验心肌肥厚造模效果。使用心外膜细胞特异标记转基因小鼠(Wt1Cre ERT2/+;Rosa26 RFP/+)检测病理性心肌肥厚与心外膜激活之间的联系。结果 (1)在注射Iso后,小鼠心重比有上升趋势,14d上升明显(P<0.05)。7d心功能出现代偿性增强(P<0.05),14d心功能衰弱。(2)心肌细胞的轮廓变大,转基因小鼠的免疫荧光发现病理性心肌肥厚中心外膜被激活。结论在Iso引起的病理性心肌肥厚中心外膜细胞被显著激活。表明心外膜可能在病理性心肌肥厚进程中发挥着重要作用。
- 黄慧辉聂宇廉虹胡盛寿
- 关键词：异丙肾上腺素心外膜
- 大质粒转染人源心室肌Ac16细胞条件探究
- 2022年
- 该研究主要针对大质粒转染人源心室肌Ac16细胞的方式及最适条件进行摸索。采用人源心室肌Ac16细胞作为研究模型,分别用Lip3000转染、核酸脂质体(Hieff Trans;Liposomal)转染和慢病毒转染三种方法将外源大质粒pLenti-CasRx-EGFP导入Ac16细胞中,通过统计表达绿色荧光蛋白的阳性细胞比例,分析外源基因的转染效率,探索大质粒pLenti-CasRx-EGFP的最佳转染方式和转染条件。结果表明,Lip3000转染Ac16细胞的最适转染条件为:质粒与Lip3000的比例为1:2;核酸脂质体转染Ac16细胞的最适条件为:质粒与脂质体的比例为1:3;慢病毒感染Ac16细胞的最适MOI值为200;通过比较三种转染方式的转染效率发现慢病毒的转染效率最高。最后得出大于10 Kb的大型质粒(pLenti-CasRx-EGFP)转染人源心室肌Ac16细胞最适合的方式是利用慢病毒转染,最佳MOI值为200。
- 李亚欢范承昊向晨莹廉虹
- 关键词：转染
- 三种代谢产物对老年急性心肌梗死患者发生肾损伤的预测价值
- 2024年
- 目的探讨老年急性心肌梗死(AMI)患者入院时血浆葡萄糖酸、富马酸和假尿苷联合预测急性肾损伤(AKI)的价值。方法收集2021年12月至2022年7月中国医学科学院阜外医院急诊科转入冠心病重症监护室治疗的老年AMI患者78例,根据住院期间AKI发生情况分为AKI组40例和非AKI组38例。采用液相色谱串联质谱定量分析AMI患者入院时血浆葡萄糖酸、富马酸和假尿苷水平。采用ROC曲线下面积(AUC)确定3种血浆代谢产物预测AMI患者发生AKI的价值。采用多因素logistic回归分析AKI的临床危险因素。结果AKI组与非AKI组血浆葡萄糖酸、富马酸和假尿苷水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。ROC曲线分析显示,葡萄糖酸、富马酸和假尿苷对老年AMI患者AKI发生无预测价值(AUC=0.576,95%CI:0.449~0.704,P=0.246;AUC=0.595,95%CI:0.467~0.721,P=0.154;AUC=0.563,95%CI:0.435~0.692,P=0.337)。多因素logistic回归分析显示,左心室射血分数(LVEF)是老年AMI患者发生AKI的独立预测因素(OR=0.923,95%CI:0.870~0.978,P=0.007)。结论老年AMI患者血浆葡萄糖酸、富马酸和假尿苷不能早期预测AKI发生,而LVEF是老年AMI患者发生AKI的独立预测因素。
- 林祥蓉王子颖邢大一韩京申宇王欣杨新卫廉虹
- 关键词：心肌梗死葡萄糖酸富马酸假尿苷
- Apbb1基因对心肌细胞增殖影响的探究
- 2022年
- 目的 探究β淀粉样蛋白前体蛋白结合蛋白B-1(Apbb1)基因对H9c2心肌细胞增殖的影响。方法 利用小干扰RNA与pcDNA3.1;质粒对H9c2心肌细胞系进行敲低与过表达Apbb1基因处理,通过CCK8实验、qPCR实验以及细胞免疫荧光实验检测细胞增殖情况,评价Apbb1基因对心肌细胞增殖的作用;利用在线数据库String分析APBB1蛋白的互作蛋白,探究其可能发挥作用的方式。实验分为4组:敲低对照组、敲低Apbb1组、过表达对照组和过表达Apbb1组。结果 相较于敲低对照组,敲低Apbb1组Apbb1基因表达下降52%(P<0.01,n=3),细胞增殖在48 h时下降44%(P<0.01,n=3),但是在72 h时细胞增殖增加86%(P<0.0001,n=3);细胞周期相关基因Ccnb1和Ccna2 mRNA表达水平分别升高80%(P<0.0001,n=3)和76%(P<0.0001,n=3);细胞免疫荧光实验发现PH3与Aurora B阳性细胞分别增加4.33%(P<0.01,n=3)和4.67%(P<0.05,n=3)。相较于过表达对照组,过表达Apbb1组Apbb1基因表达上调119倍(P<0.001,n=3),细胞增殖在48 h与72 h分别降低1.23倍(P<0.0001,n=3)和1.04倍(P<0.0001,n=3);细胞增殖标志分子Ki67和细胞周期相关基因Ccnb1和Ccna2 mRNA表达水平分别降低25%(P<0.01,n=3)、72%(P<0.001,n=3)和38%(P<0.001,n=3);PH3与Aurora B阳性细胞分别降低3.7%(P<0.01,n=3)和4.36%(P<0.05,n=3)。蛋白互作网络分析结果表明KAT5、APP与APLP2是APBB1互作最为显著的蛋白。结论 敲低Apbb1基因促进H9c2心肌细胞增殖,过表达Apbb1基因抑制H9c2心肌细胞增殖,Apbb1可能通过影响细胞周期G2/M期影响心肌细胞增殖,KAT5蛋白可能与APBB1蛋白互作影响心肌细胞增殖。
- 刘俊孙佳刘维静郝琰琰廉虹王玉瑶
- 关键词：H9C2心肌细胞增殖
- 1日龄乳鼠心肌梗死模型制备及标准化评估
- 2023年
- 目的优化新生1 d乳鼠急性心肌梗死手术细节,建立稳定的模型并进行标准化评估。方法出生1日龄(postnatal 1 day,P1)CD1小鼠实施三组手术操作:第一组,冠状动脉左前降支(left anterior descending,LAD)结扎(左心耳缘下方1 mm,宽度为1 mm,结扎深度<0.5 mm)为标准深度结扎组(standard myocardial infarction,SMI);第二组,LAD结扎位置和宽度不变,结扎深度>0.5 mm为深度结扎组(deep MI,DMI);第三组,只开胸不进行LAD结扎组为假手术组(Sham)。通过TTC、伊文思蓝-TTC染色明确LAD结扎是否成功;术后3、7、14、21、28 d通过HE染色和Masson染色评估P1小鼠LAD结扎的心肌组织损伤、纤维化和再生程度;术后28 d通过超声心动图检测小鼠心脏结构和功能变化。结果首先详细描述了P1乳鼠心肌梗死模型构建过程,通过实现LAD暴露、结扎、术后护理等过程提供了一种稳定再生和高存活率的MI程序。术后1 d通过TTC、伊文思蓝-TTC染色确定了SMI模型结扎成功,术后28 d超声心动图发现与假手术组相比,LVEF、LVFS、LVIDd和LVIDs无统计学差异,说明心脏结构和功能基本恢复正常,术后3、7、14、21、28 d Masson染色发现,SMI组心脏组织纤维化面积分别为15.67%、3.34%、2.99%、2.73%、1.11%,说明术后28 d心肌梗死面积几乎完全恢复;DMI组与SMI组相比,小鼠存活率降低了35.71%(SMI为85.71%,DMI为50%),术后28 d超声结果显示,LVEF、LVFS分别降低了(17.25±6.03)%、(11.37±4.06)%,LVIDd、LVIDs分别升高(0.46±0.15)%、(0.69±0.20)%(P<0.05),纤维化面积DMI组为SMI组6倍,说明>0.5 mm的深度结扎,心脏无法实现术后28 d的完全再生修复。结论本研究详细描述了1日龄小鼠标准急性心肌梗死模型建立过程,通过TTC、伊文思蓝-TTC染色、心脏超声,Masson染色方法评估了术后不同时间点心脏梗死面积、心脏结构、功能以及纤维化程度;同时明确>0.5 mm的深度结扎,心脏无法实现术后28 d的完全修复;本研究为�
- 郝琰琰布威麦热姆·热杰普向晨莹韩国玲刘维静刘俊聂宇廉虹王玉瑶
- 关键词：乳鼠心肌梗死冠状动脉左前降支
- 人GPR132蛋白与心脏再生关系的生物信息学分析
- 2022年
- G蛋白偶联受体132(GPR132)是一种可以响应细胞外信号并激活细胞内信号转导途径的七次跨膜蛋白,在肿瘤转移、动脉粥样硬化等疾病中发挥重要作用。缺血性心脏病目前在全球范围的死亡原因中名列首位,心力衰竭是该病的严重阶段,如何针对此阶段进行治疗显得尤为重要。急性心肌梗死是引起心力衰竭的主要原因,如何补充梗死的心肌促使心脏再生,恢复其结构与功能的研究可能有助于解决这一问题。由于GPR132蛋白能够在损伤后再生的小鼠心脏中显著高表达,本文欲探究GPR132蛋白与心脏再生的关系。本研究通过生物信息学方法分析人GPR132编码蛋白的结构、理化性质、亚细胞定位及互作蛋白等信息,为深入研究其生物学功能提供理论依据。人GPR132基因编码的蛋白质由380个氨基酸组成,具有七个跨膜区,主要分布于细胞膜上。蛋白质结构分析表明,该蛋白质高度保守,具有疏水性。蛋白质翻译后修饰分析结果表明,该蛋白质具有多个磷酸化位点,可能被多种蛋白激酶激活,主要是被PKA、PKC、PKG、CDC2、CK激酶与p38MAPK激酶激活。互作蛋白分析表明,GNB5、LTB4R与PTAFR可能与GPR132蛋白相互作用。GO分析结果表明,GPR132蛋白主要作为G蛋白偶联受体,分布在膜上,参与调控细胞周期G1/S期。以上研究结论为我们深入研究GPR132蛋白与心脏再生的关系提供了理论依据。
- 刘俊刘维静郝琰琰廉虹王玉瑶
- 关键词：生物信息学分析磷酸化修饰
- DWORF序列增强GFP荧光强度被引量：1
- 2019年
- 荧光蛋白质是重要且常用的标签蛋白质,但是在没有强启动子的情况下表达量低,会影响检测的灵敏度。DWORF(dwarf open reading frame)是由NONMMUG026737编码的长度为34个氨基酸的短肽,其mRNA 5′端能够启动下游基因表达。Kozak序列是现今唯一一个位于成熟mRNA 5′端的增强子,能够提高基因在蛋白质水平的表达,但对某些基因在蛋白质水平的表达增强效果不理想。为了检测DWORF mRNA 5′端(命名为DW)是否能够通过提高荧光蛋白质基因在蛋白质水平的表达,从而增强荧光强度,我们设计了如下实验:将DWORF mRNA 5′端与绿色荧光蛋白(green fluorescent protein, GFP)构建到表达载体中(命名为DW-GFP),转染细胞后检测荧光强度,发现与对照组相比,转染DW-GFP质粒的细胞荧光强度显著提高(56.82±1.77 vs. 45.97±0.44,P<0.05)。为了便于后续应用,将DW截短到18个碱基(命名为DW18),仍能显著提高GFP的荧光强度(33.57±1.11 vs.25.34±0.98,P<0.05),且比Kozak序列提高6.80%。同时,我们发现DW18与Kozak序列同时存在能够进一步提高GFP的荧光强度,比Kozak序列单独存在时提高13.58%。本研究证明DWORF序列及其截短形式(DW18)能够有效提高表达效率,为研究低丰度蛋白质的生物学功能提供了可能的方法和工具。
- 刘立会聂宇王金金廉虹
- 关键词：KOZAK序列
- PiggyBac转座酶转基因小鼠模型的建立被引量：4
- 2012年
- 目的建立表达PiggyBac转座酶转基因小鼠模型,为研究PiggyBac转座子介导基因修饰在小鼠中的应用提供工具。方法利用Cytomegalovirus(CMV)启动子驱动PiggyBac转座酶基因的表达,经显微注射法建立C57BL/6J表达PiggyBac转座酶的转基因小鼠。PCR鉴定转基因小鼠的基因型,RT-PCR检测PiggyBac转座酶在小鼠生殖系睾丸中的表达情况。PiggyBac转座酶转基因小鼠活性的检测,是通过与转座子供体转基因小鼠杂交检测供体位置变化来确定的。结果显微注射产生7只转基因小鼠并能传代,经RT-PCR筛选出一株在睾丸中相对高表达PiggyBac转座酶的转基因小鼠。随后与转座子供体转基因小鼠杂交,子代双阳小鼠与野生型小鼠杂交基因型分离,产生的子代转座子供体单阳性小鼠中具有转座子供体片段的转座反应。结论成功建立了表达Piggy-Bac转座酶转基因小鼠动物模型,该模型为PiggyBac转座子技术在小鼠中的应用提供了有价值的工具动物。
- 马元武王冬梅廉虹王贵利张连峰
- 关键词：PIGGYBAC转座酶转基因小鼠
- 先天性心脏病大动脉转位小鼠模型的建立被引量：1
- 2016年
- 目的：尝试建立一种先天性心脏病大动脉转位小鼠模型,为探讨该类疾病发生、发展的相关机制提供条件。方法：20只8~10周大的SPF级ICR孕鼠随机分为对照组（n=5）和实验组（n=15）。实验组孕鼠在E8.5天给予单次剂量全反式视黄酸（70 mg/kg）腹腔注射,对照组孕鼠在E8.5天给予单次剂量二甲基亚砜（70 mg/kg）腹腔注射。注射完毕后继续饲养至E18天后取出胚胎,在体式显微镜下观察心脏表型。结果：与对照组相比,实验组胚胎的早产、流产、胚胎吸收的发生率显著增加;大动脉转位表型明显,发生率为61.2%,同时合并突眼、神经管畸形等多种心外表型发生。结论：全反式视黄酸可以诱导小鼠胚胎发生大动脉转位,是一种可行的疾病动物模型。
- 高仕君聂宇廉虹胡盛寿
- 关键词：大血管错位全反式视黄酸
