张善瑞
- 作品数：30 被引量：98H指数：6
- 供职机构：中国农业科学院上海兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学经济管理更多>>
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒感染性克隆疫苗株及其应用
- 本发明公开一种人工克隆弱毒疫苗株，该疫苗株是高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒弱毒疫苗株HuN4-F112的克隆毒株，在其结构蛋白基因序列中引入标记性的限制性内切酶位点。本发明还公开了一种重组载体，包含高致病性猪繁殖与呼吸综...
- 童光志周艳君张善瑞姜一峰李国新于海
- 文献传递
- 高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒HuN4株感染性分子克隆的建立及拯救病毒的鉴定被引量：5
- 2011年
- 为构建高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染性克隆,本实验根据 PRRSV HuN4 株基因组序列设计并合成 PRRSV 特异性引物,应用 RT-PCR 技术分6段扩增了 PRRS VHuN4 株全基因组 cDNA。将扩增的各个cDNA部分重叠片段分别克隆于 pBlueScriptⅡSK(+)载体中构建了感染性重组质粒 pHuN4。并在病毒 cDNA5'末端引入 sp6 启动子序列便于后期的体外转录获得病毒的转录本,在3'末段 Poly(A)尾引入 NotⅠ酶切位点用于线性化 pHuN4;此外,将 HuN4 基因组第14680位的A沉默突变为G产生一个 MluⅠ酶切位点作为鉴定拯救病毒的分子标记。pHuN4 通过酶切线性化后经体外转录及转染BHK细胞,并在 Marc-145 细胞中救获病毒。结果显示:救获的病毒能够在 Marc145 细胞引起明显的细胞病变;间接免疫荧光检测以及分子标记验证结果表明病毒拯救成功,而且拯救的病毒与亲本强毒生长曲线没有显著差异。利用拯救的第5代克隆病毒株对本动物进行致病性试验,结果显示实验猪在感染后第3d开始出现体温升高、厌食、消瘦等临床表现,发病率达100%,在感染后20d内陆续死亡,表明拯救的病毒保持了与亲本病毒株相一致的致病特征,以上研究证实我们成功的构建并获得 PRRSV 强毒 HuN4 株感染性克隆,为从基因水平上研究 PRRSV 的致病机制提供了技术平台。
- 张善瑞周艳君朱建平童武姜一峰童光志
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒感染性分子克隆
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒感染性克隆疫苗株及其应用
- 本发明公开一种人工克隆弱毒疫苗株，该疫苗株是高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒弱毒疫苗株HuN4-F112的克隆毒株，在其结构蛋白基因序列中引入标记性的限制性内切酶位点。本发明还公开了一种重组载体，包含高致病性猪繁殖与呼吸综...
- 童光志周艳君张善瑞姜一峰李国新于海
- 快速检测A型流感病毒的Taq Man实时荧光定量RT-PCR方法的建立被引量：6
- 2010年
- 根据A型流感病毒基质蛋白(matrix protein,M)基因保守序列设计并合成特异性引物和TaqMan BHQ探针,建立快速检测A型流感病毒的实时荧光定量RT-PCR方法。通过RT-PCR方法克隆A型流感病毒M基因靶序列并将其连入pMD-18T载体,制备阳性标准品,优化反应条件,以10倍系列稀释的标准品绘制标准曲线,其相关系数为0.998。检测结果显示,该方法的灵敏度可达10 copies/μL或1 EID50病毒且特异性良好,除A型流感病毒外,对猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒、猪圆环病毒2型、猪输血传播病毒检测结果均为阴性。该方法重复性好,批内和批间变异系数均小于3%。对40份实验感染样品的检测结果表明,该方法与病毒分离结果一致,比常规RT-PCR检测方法灵敏度更高,特异性更强。
- 马继红于海周艳君李国新闫丽萍张善瑞王斌童光志
- 关键词：A型流感病毒TAQMAN探针实时荧光定量RT-PCR
- 猪繁殖和呼吸综合征病毒GP3蛋白糖基化位点突变株的构建及其生物学特性分析
- 2011年
- 为研究猪繁殖与呼吸系统综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)GP3蛋白糖基化位点的作用,在弱毒疫苗株HuN4-F112感染性克隆的基础上,采用点突变的方法对GP3蛋白N29、N42、N50、N131位进行单点或多点组合突变去糖基化,构建了不同糖基化位点的单点和多点突变的PRRSV全长cDNA克隆,最终成功救获N29Q、N42Q、N50Q、N131Q、N29Q/N50Q、N29Q/N195Q六株含糖基化位点突变的病毒,而其余几种糖基化位点突变组合的全长cDNA未能拯救出病毒。对拯救毒株进行滴度测定及多步生长曲线绘制等特性分析,结果显示N29Q、N42Q、N50Q、N131Q位单个糖基化位点的缺失虽不影响子代病毒的产生但会不同程度地降低PRRSV感染细胞的能力,其中N50Q突变体较亲本下降6个滴度且生长明显延迟。多个糖基化位点同时缺失则会影响病毒的拯救,推测这些糖基化位点可能是产生具有感染性病毒粒子所不可或缺的。
- 刘欢欢周艳君姜一峰张善瑞童光志
- 关键词：GP3蛋白定点突变
- 高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒HuN4株感染性分子克隆的建立及拯救病毒的鉴定
- 为构建高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）感染性克隆，本实验根据PRRSV HuN4株基因组序列设计并合成PRRSV特异性引物，应用RT-PCR技术分6段扩增了PRRSV HuN4株全基因组cDNA。将扩增的各个...
- 张善瑞周艳君朱建平童武姜一峰童光志
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒感染性分子克隆特异性引物
- 表达猪瘟病毒E2蛋白重组猪繁殖与呼吸道综合征病毒的研究被引量：3
- 2012年
- 为构建表达猪瘟病毒(CSFV)E2蛋白重组猪繁殖与呼吸道综合征病毒(PRRSV),本研究首先利用高致病性PRRSV弱毒疫苗HuN4-F112株的感染性分子克隆作为平台,构建了一个在nsp2区有缺失的感染性分子克隆,命名为pHuN4-F112-△480-620。以pHuN4-F112-△480-620作为载体,采用突变PCR的方法将CSFV的主要保护性抗原E2基因1 bp～9 99 bp,1 bp～600 bp,1 bp～330 bp及256 bp～330 bp基因片段分别插到nsp2中aa 480～aa 620位氨基酸缺失编码区域。结果显示,插入完整E2基因或较大E2基因片段的重组PRRSV cDNA质粒均未能拯救出病毒,只有插入较小的E2基因片段(256 bp～330 bp)的重组病毒cDNA质粒成功地拯救出了重组病毒rPRRSV-F112-E2(256-330),拯救的病毒能够在MARC-145细胞上引起明显的细胞病变,而且生长速度明显高于其亲本病毒,间接荧光检测表明该重组病毒能够表达外源基因。
- 童武周艳君徐彦召姜一峰王亚欣张善瑞朱建平虞凌雪孙晶陈焕春童光志
- 关键词：猪繁殖与呼吸道综合征病毒猪瘟病毒感染性分子克隆重组病毒
- 金黄色葡萄球菌免疫组合物
- 本发明涉及金黄色葡萄球菌免疫组合物，主要由纤连蛋白连接蛋白和聚集因子，以及免疫增效剂和保护剂组成，各有效成分按重量所占比例为：纤连蛋白连接蛋白和聚集因子各350mg，免疫增效剂和保护剂各150mg。本黏附素基因表达产物组...
- 赵宏坤杨宏军陈志张善瑞
- 文献传递
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒基因工程标记弱毒疫苗株及应用
- 本发明公开了一种猪繁殖与呼吸综合征病毒基因工程标记弱毒疫苗株，该疫苗株包含猪繁殖与呼吸综合征病毒弱毒疫苗株HuN4-F112的基因组核酸，所述HuN4-F112基因组在编码Nsp2蛋白的基因区域内包含一个突变，该突变是在...
- 童光志周艳君徐彦召张善瑞
- 文献传递
- 高致病性猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒及其弱毒感染性克隆的构建和应用
- 猪繁殖与呼吸综合征（Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS）是目前严重危害养猪业的传染病之一,该病是由猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）感染引起的,其主要临...
- 张善瑞
- 关键词：感染性克隆
- 文献传递
