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犬红细胞膜糖蛋白的提纯与鉴定: 2013年; 为了研究犬的血型,首先从红细胞膜表面抗原即犬红细胞膜血型糖蛋白入手,试验采用低渗溶血法制备犬红细胞的鬼影细胞,进而制备兔抗犬的红细胞多克隆抗体进行细胞凝集检测,再经SDS-PAGE和蛋白质免疫印记分析蛋白条带。结果表明:试验所得犬细胞膜糖蛋白与国际上测得的部分犬血型糖蛋白分子质量相符。说明此种提纯方法可用于研究犬的红细胞膜表面糖蛋白。; 吕九云孟洋王媛叶臣君张泽力钱毓斌桑宇张段玲张彦龙; 关键词：红细胞膜糖蛋白提纯

EIAV Rev N端基序促进病毒Gag组装及拮抗马A3Z3分子抗病毒作用的机制研究: 近年来在逆转录病毒研究中发现的一些细胞内分子，包括Trim5a、Tetherin、SAMHDI和APOBEC3等，均扮演对病毒感染的天然免疫限制角色，被称为天然免疫限制因子。这些限制因子通过不同的机制抑制病毒在细胞内的有...; 张泽力; 关键词：GAG蛋白抗病毒作用; 文献传递

马胞嘧啶脱氨基酶A3Z3的多态性及抗马传染性贫血病毒作用: 2014年; 马胞嘧啶脱氨基酶家族成员之一的A3Z3分子(eqA3Z3),可通过胞嘧啶脱氨基酶活性限制马传染性贫血病毒(EIAV)的复制。为研究eqA3Z3分子多态性与其抗EIAV活性之间的关系,本实验采用RT-PCR技术从10匹马体内扩增A3Z3基因,对获得的不同马体内A3Z3分子的序列进行比对分析,发现了两种不同于已报道eqA3Z3分子的突变体。将其克隆于真核表达载体pcDNA-HA中,并分别与EIAV感染性质粒共转染293T细胞,通过GST Pull-down方法证明了3种分子均能够与EIAV Gag蛋白相互作用。此外,western blot结果显示3种分子均能够被包装进病毒粒子。同时荧光素酶活性结果表明3种分子具有相同的限制EIAV复制功能。以上研究结果有助于进一步深入了解和评价马属动物Apobec3分子抗逆转录病毒的作用。; 张泽力马建陈方锐尹鑫曹苏亚艾有为王玉龙王晓钧; 关键词：多态性马传染性贫血病毒抗病毒作用

恒河猴Tetherin蛋白对马传染性贫血病毒抑制作用的研究被引量：2: 2013年; Tetherin是新发现的具有限制多种病毒从细胞膜释放功能的细胞蛋白。本研究采用RT-PCR技术从恒河猴巨噬细胞中扩增Tetherin基因,将其插入真核表达载体pEF4/myc-His B中构建重组质粒pHF-Tetherin。并将其转染293T细胞,通过western blot和激光共聚焦分析Tetherin在293T细胞中的表达及亚细胞定位。将pHF-Tetherin分别与马传染性贫血病毒(EIAV)或猴免疫缺陷病毒(SIV)假病毒粒子感染性质粒共转染293T细胞,分析Tetherin对EIAV及SIV出芽的限制作用。研究结果表明,pHF-Tetherin转染293T细胞48 h后可以检测到Tetherin的表达并定位于细胞膜,而且该蛋白具有抑制EIAV及SIV从转染细胞中出芽的生物学功能。; 谷勤雍胡哲尹鑫张泽力吴星亮魏萍王晓钧; 关键词：马传染性贫血病毒猴免疫缺陷病毒

马TRIM5α基因的扩增及抗EIAV作用评价被引量：2: 2014年; TRIM5α是一种重要的天然免疫因子,能够限制多种逆转录病毒的跨种感染。为研究马的TRIM5α是否具有抗病毒作用,本实验采用RT-PCR技术从马外周血液细胞的总RNA中扩增TRIM5α基因。测序结果表明,与GenBank中唯一的马TRIM5α(eqTRIM5α)基因序列相比马基因组预测的TRIM5α(eqTRIM5α-predicted)基因在其C末端部位有208 bp片段的插入,该插入造成TRIM5α的截短突变(eqTRIM5α-S)。通过删除插入片段后得到与eqTRIM5α-predicted基因相同的全长马的TRIM5α(eqTRIM5α-F)基因。同时将eqTRIM5α-S基因和eqTRIM5α-F基因分别插入pLPCX-HA真核表达载体中构建重组质粒,并分别转染293T细胞,转染24 h后感染马传染性贫血(EIAV)假病毒。通过检测荧光素酶活性,实验结果表明相对于阴性对照组eqTRIM5α-S可以有效地降低EIAV假病毒的复制,而eqTRIM5α-F则无该生物学功能。但通过将两种eqTRIM5α重组质粒与EIAV-gag表达重组质粒共转染293T细胞,结果表明eqTRIM5α-S和eqTRIM5α-F均不能降解Gag蛋白,这表明eqTRIM5α-S可能存在另一种机制限制EIAV的复制。; 蔡伟刚那雷刘荻萩马建尹鑫张泽力艾有为王晓钧; 关键词：马传染性贫血病毒抗病毒作用衣壳蛋白降解作用

绿色荧光示踪马传染性贫血病毒样颗粒在活细胞中的组装过程被引量：1: 2013年; 马传染性贫血病毒(EIAV)gag基因编码的多聚Gag蛋白能够自动组装形成病毒样颗粒(VLPs)。为研究EIAV衣壳蛋白合成、组装及释放过程,本实验通过构建表达EIAV Gag-GFP融合蛋白重组质粒,并将其转染293T细胞,采用western blot检测不同时间点VLPs的产生及释放。并进一步通过活细胞和3D成像技术观察Gag-GFP在细胞中的表达动态及VLPs的组装过程。结果表明:Gag和GFP蛋白融合表达不影响VLPs的组装,转染约6 h后EIAV Gag蛋白进行合成并在细胞胞质聚集完成组装形成VLPs。该实验结果为进一步研究EIAV在细胞中的组装路线和机制奠定了重要基础。; 张泽力马建尹鑫谷勤雍艾有为曹苏亚王玉龙王晓钧; 关键词：病毒样颗粒

马A3Z3V1抑制马传染性贫血病毒早晚期反转录的鉴定: 2013年; 马A3Z3V1是宿主细胞内的一种APOBEC3免疫因子,它可以有效抑制马传染性贫血病毒(EIAV)在马宿主细胞内的复制。为鉴定马A3Z3V1分子对EIAV早晚期反转录的抑制作用,本实验根据EIAV的R/U5和gag基因序列分别设计了检测EIAV早晚期反转录产物的引物并建立了SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法,利用该方法评价免疫因子A3Z3V1对EIAV逆转录过程的影响。结果显示,在早期反转录过程中,A3Z3V1可以使EIAV的反转录产物最高减少7倍;在晚期反转录过程中,A3Z3V1可以使EIAV的反转录产物最高减少3倍。本实验结果将有助于进一步研究APOBEC3分子的抗病毒作用机制。; 吴星亮张泽力尹鑫艾有为戈曼王晓钧; 关键词：马传染性贫血病毒

抗马传染性贫血病毒Rev蛋白单克隆抗体的制备: 2014年; 为制备马传染性贫血病毒(EIAV)蛋白表达调控因子Rev的单克隆抗体(MAb),本研究以原核表达并纯化的重组EIAV Rev为免疫原,免疫BALB/c小鼠,将其脾细胞与SP2/0细胞融合,采用间接ELISA方法筛选阳性克隆,经3次细胞克隆纯化后获得一株能够稳定分泌抗Rev的杂交瘤细胞株。MAb亚型鉴定为IgG2a/κ。Western blot与间接免疫荧光试验结果显示,获得的MAb与真核表达的Rev呈阳性反应。本研究首次制备了抗EIAV Rev的MAb,为Rev的功能研究奠定了基础。; 郭纪珂戈曼张泽力马建申之义王晓钧; 关键词：马传染性贫血病毒 REV 单克隆抗体

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张泽力