张雪花
- 作品数：48 被引量：70H指数：6
- 供职机构：江苏省农业科学院更多>>
- 发文基金：江苏省农业科技自主创新基金公益性行业(农业)科研专项国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 猪乙型脑炎病毒株及其应用
- 本发明提供一种猪乙型脑炎病毒株及其应用，属于生物技术领域。本发明提供猪乙型脑炎病毒JEV-JS株，其微生物保藏号是：CGMCC NO.4247。另外，本发明提供一种疫苗组合物，包括灭活的猪乙型脑炎病毒JEV-JS株和兽药...
- 张道华唐波张雪花侯继波
- 以人结核杆菌hsp70为载体的“通用型”禽流感疫苗构建及免疫效力研究
- 2009年
- 化学合成H5N1亚型禽流感病毒M2蛋白N端胞外域基因序列3拷贝基因(3M2e),与人结核杆菌hsp70蛋白基因融合,克隆至原核表达载体pET-32a(+),构建表达载体pET-3M2e与pET-3M2e-hsp70。重组质粒转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导重组蛋白获得表达,通过镍亲和层析获得纯化的融合蛋白,利用Western blot鉴定重组蛋白免疫原性。将纯化的重组蛋白免疫20日龄的禽流感非免鸡,以人工合成的M2e与KLH偶联后免疫鸡作为阳性对照,以pET-32a(+)载体蛋白注射组作为阴性对照,初免后2周加强免疫。通过抗M2e抗体检测、细胞病变抑制试验与间接免疫荧光试验评价重组蛋白免疫后产生的体液免疫反应;利用流式细胞分群及细胞因子产量检测评价重组蛋白免疫后产生的细胞免疫反应。加强免疫后4周用100EID50的H9N2亚型AIV攻毒,通过Real-time PCR检测攻毒后3、5、7天免疫鸡泄殖腔棉拭子中病毒的含量。结果表明,重组蛋白3M2e hsp70免疫组能够刺激免疫鸡产生较高的抗体水平及细胞免疫应答,并且攻毒后泄殖腔棉拭子中病毒含量明显降低。
- 郑其升徐公豹侯红岩张雪花侯继波
- 关键词：禽流感病毒免疫效力
- 猪圆环病毒3型Cap蛋白在毕赤酵母中的优化表达
- 2022年
- 以猪圆环病毒3型(porcine circovirus type 3,PCV3)Cap蛋白为模式抗原,探索病毒衣壳蛋白在毕赤酵母中高效表达的方法。体外构建多拷贝毕赤酵母表达载体,转入GS115感受态细胞后获得含有1、2、4、8拷贝目的基因的毕赤酵母菌株。对上述酵母菌株进行摇瓶发酵,利用SDS-PAGE、Western blot和灰度分析等方法检测目的蛋白表达情况。消除GS-8CAP菌株博来霉素(Zeocin)抗性后获得抗生素敏感型菌株(GS-8CAP-ZeoS),向该菌株中继续转入8拷贝酵母表达质粒从而获得GS-16CAP菌株,评估GS-16CAP的目的蛋白产量。结果显示:GS-8CAP菌株目的蛋白产量与GS-1CAP相比提高487.6%;GS-16CAP菌株目的蛋白产量是GS-8CAP的1.64倍,是GS-1CAP的9.47倍;通过与梯度稀释的牛血清白蛋白(BSA)进行蛋白条带比较,评估GS-16CAP菌株目的蛋白产量约为113 mg/L。研究表明,多拷贝技术能够有效提高Cap蛋白在毕赤酵母中的产量。本研究将为毕赤酵母高效表达其他病毒衣壳蛋白提供重要参考,并为PCV3亚单位疫苗的开发奠定基础。
- 李丁李炳坤武奇张雪花梅梅
- 关键词：毕赤酵母多拷贝
- 1株猪源乙型脑炎病毒株的免疫原性研究被引量：2
- 2015年
- 将从江苏地区筛选出的1株增殖性能稳定猪源JEV JS01毒株作为疫苗,用毒株制备灭活疫苗进行免疫原性研究。试验采用经过细胞传代获得JEV JS01病毒液(1×10^(7.5)TCID50/m L),以甲醛灭活后加入油佐剂,制备猪源乙型脑炎灭活疫苗。腹腔免疫9~12 g小鼠,攻毒保护结果显示对照组小鼠全部死亡,免疫组90%以上健活。分别肌肉注射免疫仔猪及后备母猪,不同时间采集血清测定JEV ELISA抗体。检测结果显示,免疫后试验猪血清抗体效价较免疫前均有显著提高,后备母猪免疫8个月后抗体仍全部为阳性,抗体水平与免疫剂量呈正相关性。试验表明该猪源乙脑病毒JS01毒株具有良好的免疫原性,可以用作疫苗用毒株。
- 唐波张道华张雪花常晨刘国阳华涛侯继波
- 关键词：免疫原性灭活疫苗
- A亚群禽白血病病毒env基因在昆虫细胞中的表达与鉴定被引量：1
- 2017年
- 为获得A亚群禽白血病病毒(ALV-A)env基因的表达产物,以ALV-A AH10毒株病毒RNA为模板,通过反转录PCR扩增得到env基因,将其克隆到转移载体p Fast Bac1中,转化DH10Bac感受态细胞,获得重组穿梭质粒r Bacmid-env A,r Bacmid-env A转染昆虫细胞Sf9,获得重组杆状病毒。间接免疫荧光试验(IFA)和免疫印迹试验(Western-blot)结果显示,重组蛋白可与抗ALV-A抗体发生特异性反应,重组蛋白分子大小约为90 000,与预期大小相符,表明env基因在Sf9细胞中获得了良好表达。
- 梅梅胡晓田秦爱建陆吉虎秦爱建陆吉虎唐应华
- 关键词：ENV基因
- 一种广谱型H9亚型禽流感亚单位疫苗及其制备方法
- 本发明提供一种广谱型H9亚型禽流感亚单位疫苗及其制备方法，属于基因工程领域。该广谱型H9亚型禽流感亚单位疫苗中抗原为氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示的蛋白。本发明广谱型H9亚型禽流感亚单位疫苗抗原能与H9亚型禽流感...
- 梅梅王卫华张雪花武奇
- 猪细小病毒VP2融合IFN-γ提高其在小鼠体内免疫原性被引量：2
- 2017年
- 为了检验细胞因子IFN-γ与猪细小病毒VP2融合蛋白的免疫效力,通过重叠延伸PCR技术将IFN-γ与PPV的VP2基因融合到一起,利用杆状病毒表达系统构建了重组杆状病毒r Bac-VP2、r Bac-VP2-IFN-γ,并在小鼠上验证了免疫原性。猪细小病毒ELISA抗体和中和抗体检测结果显示,VP2-IFN-γ组明显高于VP2和PPV灭活苗组;淋巴细胞增殖试验结果表明,VP2-IFN-γ组淋巴细胞数明显高于不加IFN-γ组。上述结果表明IFN-γ可提高猪细小病毒亚单位疫苗体液和细胞免疫应答,为重组IFN-γ的猪细小病毒病亚单位疫苗开发提供理论依据。
- 张雪花华涛陆吉虎梅梅张道华侯继波唐应华
- 关键词：猪细小病毒VP2IFN-Γ重组杆状病毒免疫原性
- 高效佐剂对猪细小病毒和圆环病毒二联灭活疫苗的免疫增强效果被引量：4
- 2018年
- 为评价高效佐剂VA5对猪细小病毒和猪圆环病毒二联灭活疫苗的免疫增强效果,将VA5与猪细小病毒、猪圆环病毒疫苗混合免疫BALB/c小鼠和豚鼠。结果显示,VA5佐剂能明显提高猪细小病毒血凝抑制抗体效价和血清病毒中和抗体效价,亦能提高猪圆环病毒ELISA抗体和中和抗体效价,并可降低二种抗原的使用量。VA5佐剂显著提高小鼠和豚鼠免疫后的淋巴细胞刺激指数。攻毒后,VA5佐剂处理组动物脾脏PCV2/PPV病毒载量明显低于不含高效佐剂的免疫组。VA5佐剂能提高猪细小病毒、猪圆环病毒疫苗在小鼠/豚鼠中的抗体效价,提高细胞免疫力,降低攻毒后的排毒。
- 张雪花张道华张道华梅梅陆吉虎唐波梅梅唐应华
- 关键词：猪细小病毒病毒载量
- 猪细小病毒、疫苗组合物及其应用
- 本发明提供猪细小病毒、疫苗组合物及其应用，属于生物技术领域。猪细小病毒PPV-JS株，其微生物保藏号是：CGMCCNO.6605。本发明还提供一种疫苗组合物，包括灭活的猪细小病毒PPV-JS株和兽药学上可接受的佐剂。本发...
- 张雪花张道华唐波侯继波
- 文献传递
- Ⅰ群血清4型禽腺病毒基因工程亚单位疫苗、制备方法及其应用
- 本发明提供Ⅰ群血清4型禽腺病毒基因工程亚单位疫苗、制备方法及其应用，属于基因工程领域。Ⅰ群血清4型禽腺病毒基因工程亚单位疫苗，所述疫苗的抗原是序列如SEQ ID NO:2所示的多肽。本发明还提供含有序列如SEQ ID N...
- 梅梅唐应华陆吉虎张雪花侯继波
