张鹏
- 作品数：6 被引量：76H指数：2
- 供职机构：湖北医药学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金湖北省高等学校省级教学研究项目湖北省高等学校优秀中青年科技创新团队计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- NR6A1过表达腺病毒载体构建及在血管平滑肌细胞中的表达被引量：3
- 2012年
- 目的:构建核受体家族分子NR6A1重组腺病毒载体,观察NR6A1蛋白在血管平滑肌细胞中的表达。方法:从cDNA文库中,利用PCR方法钓取目的基因NR6A1,采用In-Fusion克隆技术将目的基因插入腺病毒穿梭质粒pDC315-3FLAG,将重组质粒与辅助包装质粒pBHG loxΔE1,3 Cre共转染HEK293细胞,整合包装成重组腺病毒。运用蛋白免疫印迹技术检测NR6A1蛋白表达水平;运用免疫荧光化学技术检测NR6A1蛋白在平滑肌细胞中的亚细胞定位。结果:通过In-Fusion技术获得pDC-NR6A1-3FLAG阳性质粒,该质粒在HEK293细胞中重组成腺病毒Ad-NR6A1;蛋白免疫印迹技术发现pDC-NR6A1-3FLAG重组质粒及Ad-NR6A1均能够正确表达NR6A1蛋白;而且该蛋白定位于培养的血管平滑肌细胞核中。结论:In-Fusion技术能够高效克隆NR6A1基因,所构建的NR6A1过表达腺病毒能够正确表达NR6A1核蛋白,NR6A1定位于血管平滑肌细胞核中。
- 张亚辉钱航张志峰杨汉东闵新文郎明健张鹏
- 关键词：平滑肌细胞
- 小鼠Pim-3基因siRNA慢病毒载体的构建及表达
- 2012年
- 目的:本研究拟构建针对Pim-3基因的siRNA慢病毒载体,诱导靶细胞中Pim-3基因沉默。方法:分析Pim-3 mRNA序列特征,根据siRNA设计原则,设计并合成特异性针对小鼠Pim-3的siRNA靶DNA序列及阴性对照序列。用限制性核酸内切酶将pGCSIL-GFP载体线性化,将寡DNA片段退火成含有粘性末端的DNA双链后,与慢病毒骨架质粒连接转化至大肠杆菌中进行重组,运用PCR技术筛选阳性克隆并测序,得到pSC-Pim-3 shRNA质粒。采用脂质体将pSC-Pim-3 shRNA质粒和辅助包装质粒共转染到HEK293细胞中包装形成慢病毒。采用倍比稀释法测定慢病毒滴度。慢病毒感染NIH3T3细胞,运用实时定量PCR技术检测Pim-3基因mRNA表达水平,运用蛋白免疫印迹技术检测Pim-3蛋白表达水平。结果:酶切后获得7.5 kb的pGCSIL-GFP片段。DNA片段成功连接到pGCSIL-GFP载体;重组慢病毒的滴度约为2×109TU/mL。慢病毒能够高效感染靶细胞,并显著抑制内源性Pim-3基因的mRNA(抑制率超过70%)和蛋白(抑制率超过80%)表达。结论:针对Pim-3基因靶序列CCTCTTCGACT-TCATCACT的shRNA重组慢病毒能够有效沉默靶细胞Pim-3基因。
- 陈继舜钱航杨汉东闵新文郎明健张鹏
- 关键词：PIM-3RNA干扰慢病毒载体
- 沉默微小RNA-34a对类风湿关节炎大鼠症状改善和血清炎症因子水平的影响及其机制被引量：1
- 2021年
- 目的探讨沉默微小RNA-34a(miRNA-34a)对类风湿关节炎大鼠关节症状改善和血清炎症因子水平的影响及其机制。方法将60只大鼠随机分为空白组、模型组、过表达组、沉默组各15只,其中模型组、过表达组、沉默组建立类风湿关节炎模型。建模成功后,于沉默组大鼠双后肢骨关节处注射含10μL miRNA-34a抑制载体的慢病毒悬液,过表达组大鼠双后肢骨关节处注射含10μL miRNA-34a过表达载体的慢病毒悬液,空白组、模型组大鼠不做任何处理。评价各组大鼠足跖肿胀度、关节组织评分;并检测各组大鼠血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、细胞间黏附因子1(ICAM-1)水平,成骨细胞增殖率和凋亡率,以及关节组织中Toll样受体4(TLR4)、核因子κB抑制蛋白α(IκBα)mRNA表达水平。结果与空白组相比,其他3组大鼠血清TNF-α、IL-1β、ICAM-1水平,足跖肿胀度和关节组织评分,以及关节组织TLR4、IκBαmRNA表达水平均增加(P<0.05);过表达组、模型组、沉默组大鼠血清TNF-α、IL-1β、ICAM-1水平,足跖肿胀度、关节组织评分以及关节组织TLR4、IκBαmRNA表达水平依次降低(均P<0.05)。各时间点,空白组成骨细胞增殖率高于其他3组,凋亡率低于其他3组,过表达组、模型组、沉默组大鼠成骨细胞增殖率依次升高,凋亡率依次降低(均P<0.05)。结论沉默miRNA-34a可抑制类风湿关节炎大鼠的炎症反应并缓解关节症状,其机制可能与其下调TLR4/IκBα信号通路表达,从而促进成骨细胞增殖、抑制成骨细胞凋亡有关。
- 李刚刘亚东徐昕张鹏熊敏田大为
- 关键词：TOLL样受体4
- 双氢睾酮对人外周血内皮祖细胞增殖能力的影响被引量：1
- 2013年
- 目的探讨双氢睾酮(DHT)对人外周血内皮祖细胞增殖能力的影响。方法采用密度梯度离心法从健康成年男性外周血获得单个核细胞,接种于人纤维连接蛋白包被的培养板。培养7d后,经Dil标记的乙酰化低密度脂蛋白(Dil-acLDL)及FITC标记的荆豆凝集素-I(FITC-UEA-I)荧光双染法鉴定正在分化的内皮祖细胞。采用人工计数法和3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)法观察浓度为0nmol/L(对照组),1nmol/L DHT组,10nmol/L DHT组,100nmol/L DHT组DHT对内皮祖细胞增殖能力的影响。结果与对照组相比,各浓度DHT组内皮祖细胞增殖能力明显增强,差异有统计学意义(P<0.01);随着DHT浓度的升高促进作用逐渐增强,但浓度达100nmol/L时DHT对内皮祖细胞增殖能力促进作用有所减弱,但仍明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论在一定浓度范围内,DHT可呈剂量依赖性增强内皮祖细胞增殖能力。
- 刘睿余明华曹政张鹏柯青黄铁柱
- 关键词：前列腺肿瘤双氢睾酮内皮祖细胞增殖能力
- 核受体NR6A1通过上调RIPK3基因表达诱导血管平滑肌细胞凋亡被引量：1
- 2017年
- 目的:探讨核受体亚家族6A1(NR6A1)对血管平滑肌细胞凋亡的影响及可能的分子机制。方法:将腺病毒Ad-NR6A1感染大鼠血管平滑肌细胞,分别在感染后0 h、24 h和48 h时进行MTT实验,以时间为横坐标,A570为纵坐标绘制细胞生长曲线,观察NR6A1对细胞生长的影响;进行DAPI染色、TUNEL染色及caspase活性检测,观察细胞凋亡情况;进一步通过基因芯片技术,寻找NR6A1的靶基因;采用siRNA介导的基因沉默技术,观察受体相互作用丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶3(RIPK3)基因沉默对NR6A1诱导的血管平滑肌细胞凋亡的影响。结果:腺病毒Ad-NR6A1感染细胞48 h时,NR6A1过表达组细胞数量较对照组(重组腺病毒载体Ad-Lac Z)明显减少;DAPI染色显示NR6A1过表达诱导血管平滑肌细胞出现核浓缩和核碎裂的凋亡表型,TUNEL染色显示NR6A1过表达引起细胞凋亡,caspase活性检测结果显示NR6A1过表达细胞内caspase-3、caspase-8和caspase-9活性均较对照组高;基因芯片技术检测发现,NR6A1过表达上调血管平滑肌细胞中RIPK3基因表达;RIPK3基因沉默可以显著抑制NR6A1诱导的平滑肌细胞凋亡。结论:NR6A1通过上调RIPK3基因表达诱导血管平滑肌细胞凋亡。
- 张亚辉汪雄吴胜英彭吉霞武福云柯镜张鹏张秋芳吕艳霞
- 关键词：细胞凋亡
- 医学课程PBL教学评价体系的构建与应用被引量：70
- 2011年
- 为了更好地开展PBL教学，结合医学课程的特点，建立了PBL教学的评价体系。该PBL教学评价体系涵盖了PBL教学各环节的学生评价、教师评价和教学模式评价。通过在临床医学专业多门课程、多个年级学生中反复验证，成为比较成熟的评价系统，已正式全面应用。该评价体系各项指标的评价内容全面、科学、客观、易操作，应用效果良好，值得推广。
- 李文春李静王配军余明华张鹏
- 关键词：PBL教学教学评价
