徐彬
- 作品数：19 被引量：19H指数：3
- 供职机构：广东药科大学生命科学与生物制药学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金博士科研启动基金广东省医学科学技术研究基金更多>>
- 相关领域：医药卫生哲学宗教生物学文化科学更多>>
- ClC-3基因敲除小鼠的构建及鉴定
- 2017年
- 目的构建并鉴定ClC-3基因敲除小鼠,为研究ClC-3氯通道蛋白的生物学功能提供动物模型。方法将从2015年9月—2016年9月选取的6只赛业生物科技有限公司(广州)构建的ClC-3flox/+小鼠与2只Jackson实验室引进的Ubc-Cre小鼠进行杂交繁殖,得到基因型为ClC-3flox/flox-Cre+及ClC-3flox/+-Cre+的小鼠。取鼠尾DNA,通过PCR法鉴定子代小鼠的基因型。结果子代小鼠基因组DNA结果显示在357 bp与100 bp处均有条带,符合预期结果。结论该研究基于Cre/Loxp系统,利用loxp转基因的ClC-3flox/+小鼠和在全身表达Cre重组酶的Ubc-Cre小鼠,成功构建并鉴定了ClC-3基因敲除小鼠。
- 余杰毛建文徐彬
- 关键词：CLC-3基因敲除CRE/LOXP系统
- 他莫昔芬通过容积激活性氯电流抑制肝癌细胞增殖
- 2009年
- 目的:探讨他莫昔芬(TAM)对人肝癌SMMC7721细胞增殖的影响以及与容积激活性氯电流的关系。方法:MTT法检测TAM对细胞增殖的作用;流式细胞术检测TAM对细胞周期的影响;全细胞膜片钳技术观察TAM对容积激活性氯电流的抑制作用。结果:TAM能浓度依赖性地抑制SMMC7721细胞的增殖和低渗激活的容积激活性氯电流,两者呈正向直线相关;TAM也阻滞细胞周期于G0/G1期。结论:TAM通过调节容积激活性氯通道的开放抑制SMMC7721细胞的增殖,容积激活性氯通道可能是TAM抗肿瘤特别是雌激素受体阴性肿瘤的靶点。
- 毛建文徐彬王伟章袁健陈伟强李红枝
- 关键词：肝癌他莫昔芬细胞增殖氯通道
- 二甲基阿米洛利对人肺癌细胞增殖及细胞周期相关蛋白的影响
- 2010年
- 目的研究二甲基阿米洛利(dimethyl amiloride,DMA)对人高转移巨细胞肺癌细胞PGCL3增殖的作用及对细胞周期相关蛋白的影响。方法不同浓度的DMA作用于PGCL3细胞,用MTT法检测对细胞增殖的抑制作用;流式细胞术检测DMA对PGCL3细胞周期的影响;Westernblot检测DMA对细胞p21、cyclinA、细胞周期依赖激酶2(cell cycle depend on kinas e2,CDK2)、cyclinB1和细胞分裂周期基因25B(cell divide cycle 25B,Cdc25B)蛋白表达以及CDK2和Cdc25B蛋白活性的影响。结果DMA可抑制PGCL3细胞的增殖,并呈时间和浓度依赖性。DMA阻滞细胞于G2/M期和S期,上调p21蛋白表达,下调cyclinB1蛋白表达,降低CDK2和Cdc25B蛋白活性,但对cyclinA、CDK2和Cdc25B蛋白表达水平无影响。结论DMA可抑制人肺癌细胞增殖,并改变某些细胞周期相关蛋白的表达和活性,这可能是其抑制肿瘤的机制之一。
- 徐彬施静雯毛建文
- 关键词：肺癌细胞增殖细胞周期
- 碱性成纤维细胞生长因子荧光真核表达载体构建及对过氧化氢诱导血管内皮细胞凋亡的影响
- 2011年
- 背景:已证实外源性碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)可抑制血管内皮细胞凋亡。目的:构建表达bFGF的荧光真核表达载体,探讨其对过氧化氢(H2O2)诱导的血管内皮细胞凋亡和凋亡相关蛋白的影响。方法:通过基因亚克隆构建荧光真核表达载体pcDNA3.1-bFGF-GFP,利用脂质体介导将bFGF基因导入人脐静脉内皮细胞内,通过荧光观察和RT-PCR检测基因的表达。实验分为3组,对照组(转染pcDNA3.1)、过氧化氢组(转染pcDNA3.1+H2O2)和bFGF转染+过氧化氢组(转染pcDNA3.1-bFGF-GFP+H2O2),流式细胞术测定细胞凋亡率,Western blot检测caspase-3 P17活性亚单位和Bax蛋白表达。结果与结论:成功构建荧光真核表达载体pcDNA3.1-bFGF-GFP,该载体转染人脐静脉内皮细胞后,bFGF mRNA显著增加,并可观察到绿色荧光。与对照组相比,过氧化氢组细胞凋亡率和caspase-3 P17活性亚单位、Bax蛋白的表达量都明显增加(P<0.01),而bFGF转染+过氧化氢组的细胞凋亡率和caspase-3 P17活性亚单位、Bax蛋白的表达量则比过氧化氢组显著降低(P<0.01)。证实bFGF基因转染能抑制过氧化氢诱导的血管内皮细胞凋亡,其作用机制可能与调控Bax蛋白表达和caspase-3活性有关。
- 徐彬林桂先武晓英毛建文
- 关键词：碱性成纤维细胞生长因子血管内皮细胞凋亡BAX蛋白
- 阿米洛利对高转移肺癌细胞侵袭能力和uPA系统的影响被引量：1
- 2010年
- 目的:观察阿米洛利对人高转移肺癌细胞PGCL3体外侵袭能力和尿激酶型纤溶酶原激活物(urokinase-type plasminogenactivator,uPA)系统的影响。方法:不同浓度(25μmol/L、50μmol/L和100μmol/L)的阿米洛利作用于PGCL3细胞6h后,用Transwell小室法检测对细胞侵袭能力和运动能力的影响。阿米洛利作用24h后,用发色底物法检测对细胞分泌的uPA和纤溶酶原激活物抑制剂-1(Dlasminogen activator inhibitor-1,PAI-1)活性的变化。RT-PCR检测阿米洛利对细胞uPA、尿激酶型纤溶酶原激活物受体(urokinase-type plasminogen activator receptor,uPAR)和PAI-1 mRNA表达的影响。Western blot检测阿米洛利对细胞uPA、细胞外调节蛋白激酶2(extracellular regulated proteinkinase 2,ERK2)和ras蛋白表达情况的影响。结果:侵袭实验和运动实验结果均显示,经阿米洛利处理后,穿膜细胞数明显减少,在100μmol/L时,对侵袭和运动的抑制率分别为(37.7±4.1)%和(64.9±4.9)%,与对照组相比具有显著性差异(P<0.01)。同时,细胞分泌的uPA和PAI-1活性降低,当浓度达到100μmol/L时,差异具有统计学意义(P<0.05)。从25μmol/L开始,阿米洛利就可显著抑制PAI-1 mRNA的表达,当达100μmol/L时可明显下调uPAmRNA的表达,但各浓度对uPAR mRNA的表达均无影响。随着阿米洛利浓度的增加,uPA蛋白表达量逐渐减少,但对ras和ERK2蛋白表达量无明显影响。结论:阿米洛利能够抑制高转移肺癌细胞PGCL3的侵袭和运动,其作用机制与抑制uPA和PAI-1的活性和表达有关,有成为抗肿瘤转移药物的潜力。
- 徐彬施静雯毛建文
- 关键词：阿米洛利肺癌尿激酶型纤溶酶原激活物
- ClC-3荧光真核表达载体的构建及表达被引量：1
- 2013年
- 目的构建表达ClC-3的荧光真核表达载体,为研究其在肿瘤细胞中的作用提供分子工具。方法将ClC-3的编码序列亚克隆到pEGFP-N1质粒,构建荧光真核表达载体pEGFP-N1/ClC-3,利用脂质体介导将ClC-3基因导入人乳腺癌细胞MCF-7内,通过绿色荧光观察检测基因的表达。结果成功构建荧光真核表达载体pEGFP-N1/ClC-3,该载体转染MCF-7细胞后,可观察到绿色荧光。结论表达ClC-3的荧光真核表达载体构建成功,并在乳腺癌细胞中得到正确表达,为进一步研究ClC-3在乳腺癌中的作用奠定了基础。
- 杨清松张守盼林卓华毛建文徐彬
- 关键词：CLC-3MCF-7细胞转染
- 研究生生物技术药物学课程开设与教学初探
- 2015年
- 随着很多国家把生物技术创新药物的研发作为医药工业的战略重点,药学专业研究生掌握生物技术药物的最新进展和相关研发技术成为一种必然。生物技术药物学是本校新开设的硕士研究生选修课,本文从课程体系和内容、授课对象、教学方法以及考核方式等几方面总结了教学实践的体会和效果以及今后的发展方向。
- 徐彬
- 关键词：课程建设
- CLCN3/MMTV-PyMT转基因小鼠杂交群体的建立及鉴定
- 2014年
- 目的建立并鉴定CLCN3/MMTV-Py MT双转基因小鼠杂交群体,构建氯通道Cl C-3过表达的自发乳腺肿瘤转基因小鼠模型。方法将CLCN3转基因小鼠和MMTV-Py MT转基因小鼠分别进行繁殖,选取阳性子代鼠进行配对,培育杂交后代,然后通过PCR鉴定基因型、通过组织免疫荧光方法、Western blot检测转基因小鼠蛋白表达情况。结果成功繁育CLCN3转基因小鼠和MMTV-Py MT转基因小鼠,经PCR鉴定成功构建CLCN3/MMTV-Py MT双转基因鼠杂交群体,并成功保种和扩群,经组织免疫荧光和Western-blot分析双转基因小鼠的Cl C-3蛋白的表达高于MMTV-Py MT转基因小鼠。结论成功构建Cl C-3过表达的自发乳腺肿瘤转基因小鼠模型,为进一步研究Cl C-3在肿瘤生长和转移中的功能提供了良好的动物模型。
- 邓璐璐李琴吴慧毛建文徐彬
- 关键词：MT转基因小鼠
- 耐药肿瘤细胞中ClC-3、P-gp的表达变化及相关性被引量：4
- 2016年
- 目的观察电压门控氯通道3(Cl C-3)、P-糖蛋白(P-gp)在耐药肿瘤细胞中的表达变化,并探讨其相关性。方法提取人肝癌细胞株BEL-7402及其氟尿嘧啶耐药株BEL-7402/FU、人结肠癌细胞株HCT-8及其紫杉醇耐药株HCT-8/T的总RNA和蛋白,用荧光定量PCR法检测细胞Cl C-3和多药耐药基因1(MDR1)mRNA的表达,Western blotting法检测细胞Cl C-3蛋白和P-gp的表达,采用线性相关分析Cl C-3蛋白和P-gp表达的相关性。结果耐药细胞BEL-7402/FU和HCT-8/T中Cl C-3、P-gp的mRNA和蛋白水平都高于相对应的非耐药细胞BEL-7402和HCT-8(P均<0.05),在耐药肿瘤细胞中,Cl C-3蛋白与P-gp表达呈正相关(r=0.98,P<0.05)。结论 Cl C-3、P-gp在耐药肿瘤细胞中呈高表达,二者表达水平呈正相关关系。
- 林嘉麟施静雯刘学强余杰徐彬
- 关键词：肝肿瘤结肠肿瘤P-糖蛋白肿瘤细胞
- 稳定表达ClC-3对宫颈癌细胞顺铂敏感性的影响及其机制被引量：4
- 2014年
- 目的 :探讨稳定表达电压门控氯通道3(voltage-gated chloride channel 3,ClC-3)的宫颈癌HeLa细胞对顺铂敏感性的变化及其可能的机制。方法 :通过脂质体介导的方法将重组载体质粒pcDNA3.1/ClC-3转染至HeLa细胞中。pcDNA3.1/ClC-3转染后,蛋白质印迹法检测细胞中ClC-3蛋白和P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)的表达水平,实时荧光定量PCR法检测细胞中ClC-3和多药耐药基因1(multi-drug resistance gene 1,MDR1)mRNA的表达水平,MTT法检测顺铂对细胞增殖的影响,免疫荧光法检测细胞中ClC-3蛋白和P-gp的表达及定位。结果 :成功获得稳定表达ClC-3的HeLa/ClC-3细胞。HeLa/ClC-3细胞中ClC-3蛋白和P-gp的表达水平以及MDR1和ClC-3 mRNA的表达水平均明显高于转染空载体pcDNA3.1的HeLa/mock细胞,差异有统计学意义(P<0.05)。与转染空载体pcDNA3.1的HeLa/mock细胞比较,顺铂对HeLa/ClC-3细胞增殖的抑制作用明显降低,差异有统计学意义(P<0.05),顺铂对HeLa/ClC-3细胞的半数抑制浓度(half inhititory concentration,IC50)为71μmol/L,明显高于HeLa/mock细胞的32μmol/L(P<0.05)。ClC-3蛋白和P-gp共同定位于HeLa/ClC-3和HeLa/mock细胞的细胞膜。结论 :ClC-3可降低HeLa细胞对顺铂的敏感性,可能与ClC-3上调P-gp的表达水平有关。
- 王施思杨清松施静雯林嘉麟徐彬
- 关键词：宫颈肿瘤P糖蛋白顺铂CLC-3HELA细胞
