朱向东
- 作品数：23 被引量：51H指数：5
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省自然科学基金国家重点实验室开放基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- gga-miR-21过表达细胞株对传染性法氏囊病病毒复制的影响
- 为了探讨gga-miR-21对传染性法氏囊病病毒(IBDV)复制的影响,用PCR方法从鸡的肝细胞基因组中扩增细胞pri-gga-miR-21,定向克隆于慢病毒表达质粒pL-EGFP中,获得重组慢病毒表达质粒pL-miR-...
- 欧阳伟朱向东王永山王永强潘群兴毕振威王笑梅
- 关键词：鸡传染病法氏囊病病毒病毒复制
- 文献传递
- 传染性法氏囊病病毒VP2与C3d串联基因重组表达质粒的构建及其免疫功能研究被引量：2
- 2012年
- 为提高传染性法氏囊病病毒(IBDV)VP2基因核酸疫苗的免疫效力,本研究根据已发表的鸡源补体C3d序列,设计并合成在5'端添加编码连接肽(Gly4Ser)2序列的C3d基因。用同尾酶BglⅡ和BamHⅠ构建含有3拷贝C3d与VP2基因融合的重组表达质粒pcDNA-VP2-3C3d。用脂质体法转染BHK21细胞,48 h后,westernblot分析表明,表达的重组蛋白为162 ku;间接免疫荧光试验检测转染细胞中具有特异性荧光。用pcDNA-VP2-3C3d与前期构建的pcDNA-VP2分别免疫2周龄SPF鸡,二免14 d后,间接ELISA法检测IBDV抗体效价,pcDNA-VP2-3C3d组抗体水平显著高于pcDNA-VP2组;MTT法检测鸡脾淋巴细胞增殖活性,pcDNA-VP2-3C3d组免疫诱导的特异性淋巴细胞增殖活性显著高于pcDNA-VP2组(p<0.05)。本研究表明C3d可以增强VP2基因免疫诱导的IBDV特异性体液和细胞免疫应答。
- 马金荣欧阳伟王永山吴晓悠朱向东张海彬范红结王忠灿唐雨德
- 关键词：VP2基因基因免疫
- 传染性法氏囊病病毒自然重配株全基因组序列分析
- 从具有新的流行病学特征的传染性法氏囊病(IBD)发病鸡群中分离到两株传染性法氏囊病病毒(IBDV),分别命名为QL和ZZ-11,对4周龄SPF鸡的致死率分别为94％和86％.为分析该毒株的分子生物学特征,对其全基因组序列...
- 朱向东王永山欧阳伟潘群兴毕振威李月华范红结王笑梅
- 关键词：鸡传染病法氏囊病病毒全基因组
- 文献传递
- 传染性法氏囊病病毒自然重配株全基因组序列分析
- 从具有新的流行病学特征的传染性法氏囊病(IBD)发病鸡群中分离到两株传染性法氏囊病病毒(IBDV),分别命名为QL和ZZ-11,对4周龄SPF鸡的致死率分别为94％和86％。为分析该毒株的分子生物学特征,对其全基因组序列...
- 朱向东王永山欧阳伟潘群兴毕振威李月华范红结王笑梅
- 关键词：传染性法氏囊病病毒基因组结构
- 文献传递
- gga-miR-21过表达细胞株对传染性法氏囊病病毒复制的影响
- 为研究microRNA(gga-miR-21)对传染性法氏囊病病毒(IBDV)复制的影响,本研究利用PCR方法从鸡的肝细胞基因组中扩增细胞pri-gga-miR-21,克隆于慢病毒表达质粒pL-EGFP中构建重组质粒pL...
- 欧阳伟朱向东王永山王永强潘群兴毕振威王笑梅
- 关键词：传染性法氏囊病病毒复制细胞株
- 文献传递
- 传染性法氏囊病病毒自然重配株全基因组序列分析被引量：20
- 2014年
- 从具有新的流行病学特征的传染性法氏囊病（IBD）发病鸡群中分离到2株传染性法氏囊病病毒（IBDV），分别命名为QL和ZZ—ll，对4周龄SPF鸡的致死率分别为94％和86％。为分析该毒株的分子生物学特征，对其全基因组序列进行了测定，2个病毒株基因组A节段长度为3260bp、B节段长度2827bp。病毒演化分析结果显示2个病毒基因组A节段的核苷酸序列与已发表的强毒株序列的同源性分别为96．8％～98．1％和96．9％～98．4％，处在IB—DV超强毒株分支上；而B节段与已发表的弱毒株序列的同源性分别为89．7％～90．4％和90．0％～90．7％，位于弱毒株分支上。IBDV超强毒株和弱毒株序列特征氨基酸残基与基序分析表明，QL和ZZ—11两个病毒株的A节段VP2基因的氨基酸残基为222A、249Q、253Q、254G、256I、294I和299S，七肽基序为SWSASGS，均符合超强毒株的分子特征；而B节段777～782位核苷酸序列为GGTGCC，没有KpnI酶切位点，具有弱毒株的序列特点。以上分析结果表明，QL和ZZ—11为IBDV自然重配株，A节段源于超强毒株，而B节段源于弱毒株。
- 朱向东王永山欧阳伟潘群兴毕振威李月华范红结王笑梅
- 猪流行性腹泻病毒的分离鉴定和全基因组序列分析
- <正>自2010年以来,猪流行性腹泻病毒(PEDV)已经成为诱发仔猪腹泻的主要病原,为研究近年来引起仔猪腹泻的PEDV的特性,进而为新型疫苗的研发奠定基础,2014年从辽宁某猪场腹泻仔猪小肠内容物中分离到一株病毒,并通过...
- 季朝阳时洪艳陈建飞石达朱向东冯力
- 关键词：猪流行性腹泻病毒全基因组
- 文献传递
- 传染性法氏囊病病毒感染细胞内源性microRNA表达差异分析被引量：6
- 2012年
- 细胞内源性microRNA(miRNA)在宿主与病原相互作用过程中发挥着重要的调节功能。为了分析细胞内源性miRNA与传染性法氏囊病病毒(IBDV)的相互作用,用IBDV弱毒和强毒分别感染鸡胚成纤维细胞(CEF)和SPF鸡,24h后,取感染CEF和法氏囊组织,提取细胞总RNA,用Hy3/Hy5双色荧光标记,与miRNA芯片杂交,进行芯片内标准化、芯片间标准化、表达差异比较以及聚类分析。结果显示:在IBDV弱毒感染的CEF中,有17个细胞内源性miRNA表达上调,17个miRNA表达下调;在IBDV强毒感染的鸡法氏囊组织细胞中,有30个细胞内源性miRNA表达上调,18个miRNA表达下调。根据表达差异显著的miRNA序列设计引物,用荧光定量RT-PCR方法验证芯片检测结果,2种方法的检测结果一致。结果表明,IBDV感染可诱导细胞内源性miRNA表达变化,这些上调或下调的miRNA能调控细胞内多种代谢和信号传导途径发生异常,引起细胞及组织器官发生病理学变化。
- 欧阳伟王永山王永强王笑梅朱向东毕振威范红结
- 猪传染性胃肠炎病毒间接免疫荧光检测方法的建立被引量：11
- 2017年
- 为建立猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)直观、特异和快速的检测方法,将TGEV接种PK-15细胞后,以抗TGEV N蛋白的单克隆抗体为一抗,荧光素FITC标记的山羊抗小鼠Ig G为二抗,建立了TGEV的间接免疫荧光(IFA)检测方法。结果显示,TGEV的最佳接种效价为1×102TCID50,培养时间为24 h,细胞最佳固定液为40 m L/L多聚甲醛,最佳封闭条件为10 g/L BSA 37℃封闭30 min,一抗的最佳使用浓度为1 ng/L,二抗的最佳稀释度为1∶100。对常见的猪流行性腹泻病毒、猪轮状病毒和猪圆环病毒2型等猪病病原检测均为阴性。结果表明,建立的检测方法对TGEV具有良好的特异性。本研究建立的方法为TGEV的实验室诊断及TGEV在感染细胞中的定位和动态分布提供了有效的检测手段。
- 朱蕴暖张鑫朱向东陈建飞时洪艳石达王鑫季朝阳冯力
- 关键词：猪传染性胃肠炎病毒
- 鸡传染性法氏囊病病毒VP2基因密码子的优化及其在大肠杆菌中的表达被引量：5
- 2013年
- 为了提高鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)VP2基因在大肠杆菌中的表达量,分析近期引起安徽免疫失败IBD病例中分离的强毒分离株AH1株的VP2基因,发现有49个稀有密码子,其中编码Arg(R)的有16个,编码Gly(G)的有6个。编码精氨酸的AGG(AGA)2个稀有密码子紧密相连(R区),另外还有2个相对比较集中的GGG密集区(G区)。根据大肠杆菌密码子使用频率对IBD强毒分离株(AH1株)VP2基因进行改造并合成优化基因,命名为mVP2。将mVP2基因分别克隆到pET-32a及pBV220原核表达质粒,构建了含密码子优化型IBDV VP2基因的原核表达质粒pET32-VP2和pBV220-VP2。SDS-PAGE结果显示,优化基因mVP2在大肠杆菌中的表达较野生型基因有十分显著的提高。Western-blot检测到目的蛋白能够与鸡抗IBDV超免疫血清反应。本研究为开展VP2基因结构与功能的深入研究及IBD免疫预防和快速诊断奠定了理论基础。
- 潘群兴朱向东欧阳伟王晓丽夏兴霞毕振威诸玉梅董晨红王永山
- 关键词：鸡传染性法氏囊病病毒VP2密码子优化
