李兴花
- 作品数：2 被引量：2H指数：1
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- 三甲基化组蛋白H3赖氨酸4对调节性T淋巴细胞foxp3基因表达的影响被引量：1
- 2012年
- 目的探讨天然调节性T淋巴细胞(nTreg)的三甲基化组蛋白H3赖氨酸4(H3K4me3)对foxp3基因的影响,寻找维持调节性T淋巴细胞(Treg)表型长期稳定的方法。方法使用免疫磁珠细胞(MACS)分选法从健康人外周血中分离出CD4+CD25+Treg。对CD4+CD25+Treg分别进行0 d、3 d、7 d培养,其中0 d为阴性对照组,3 d为阳性组1,7 d为阳性组2,采用流式细胞仪(FCM)对0 d、3 d、7 d nTreg膜表面标志CD25的变化进行检测,并分别对培养0 d、3 d、7 d的nTreg细胞通过染色质免疫共沉淀(ChIP-PCR)法检测foxp3基因启动子区H3K4me3及DNA水平变化。结果 1.使用细胞计数Kit-8(CCK-8)法确定植物血凝素(PHA)质量浓度在10 mg.L-1时为最佳的药物质量浓度,对Treg细胞的增殖作用最为显著。nTreg细胞培养0 d、3 d、7 d的表型变化呈递减趋势。随着培养时间(0 d、3 d、7 d)的延长,与foxp3基因启动子区结合的H3K4me3表达逐渐减少。2.采用ChIP-PCR法对培养0 d、3 d、7 d的nTreg细胞检测与H3K4me3结合的foxp3基因启动子区DNA水平变化。DNA凝胶电泳图显示,0 d、3 d在204 bp处可见条带(灰度值分别为2.31、0.91),7 d有模糊条带或无条带。三者比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 PHA不能维持Treg细胞的表型稳定,其机制与H3K4me3减少有关。
- 何敏李兴花刘华陈宁宁于艳辉卢思广刘健胜
- 关键词：调节性T淋巴细胞
- 小干扰RNA干扰人CD4^+CD_(25)-T淋巴细胞MLL1基因的表达被引量：1
- 2011年
- 目的探讨小干扰RNA(siRNA)对体外人CD4+CD25-T淋巴细胞MLL1基因表达的抑制效果及体外转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导调节性T淋巴细胞(iTreg)的影响,为治疗与Treg失衡相关的临床疾病提供理论基础。方法采用免疫磁珠分选方法从健康人外周血中分离出CD4+CD25-T淋巴细胞(纯度>85%)。MLL1基因的SET区对组蛋白3上的第4个赖氨酸位点的甲基化起重要作用,针对其设计并合成了不同的siRNAs,分别为带绿色荧光的siRNA(siRNA-FAM)、3个实验组(siRNA-1、siRNA-2、siR-NA-3)与1个阴性对照组(siRNA-NC)。采用脂质体法转染分选后培养24 h的人CD4+CD25-T淋巴细胞。先转染siRNA-FAM,于转染后的6 h,用荧光显微镜观察siRNA的转染效率,寻找最佳的转染条件。按照上述转染条件转染siRNA-1、siRNA-2、siRNA-3、siR-NA-NC。于转染后的48 h,每组取2×106个细胞,提取细胞内RNA,然后反转录为cDNA,用聚合酶链反应扩增该片段,用琼脂糖凝胶检测扩增后的DNA。在MLL1基因表达受到抑制的情况下,采用流式细胞术检测TGF-β1诱导72 h iTreg的比例。结果当siR-NA为100 pmol,脂质体为5×10-6 L时,siRNA的转染效率最高为(50.80±0.61)%。该实验条件下,发现实验组siRNA-2对MLL1基因mRNA较对照组有明显削弱作用(F=5.820,P<0.05)。在MLL1基因表达削弱的情况下,TGF-β1诱导72 h iTreg比例有明显降低(F=4.046,P<0.05)。结论 siRNA可以有效抑制人CD4+CD25-T淋巴细胞中MLL1基因的表达,找到了具有较高转染效率的siRNA。TGF-β1体外诱导的iTreg受核因子MLL1的调节。
- 李兴花何敏于艳辉陈宁卢思广
- 关键词：RNA干扰调节性T淋巴细胞转化生长因子-Β1
