李定霏
- 作品数：14 被引量：17H指数：2
- 供职机构：四川农业大学动物医学院更多>>
- 发文基金：四川省应用基础研究计划项目国家科技重大专项“十一五”国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 番鸭TLR5基因的序列分析及其在组织中表达分布的检测
- 2016年
- 为了解番鸭TLR5的全基因序列和它在不同组织器官中的表达分布,采用PCR方法对番鸭TLR5全长O RF区进行扩增,并建立了SYBR GreenⅠ实时荧光定量RT-PCR方法,用该方法对番鸭TLR5 mRNA在组织器官中的分布进行了测定。结果显示,番鸭TLR5基因编码区序列全长2 580 bp,由跨膜区、11个富亮氨酸重复序列(LRR)、1个富亮氨酸重复C端结构域(LRR-CT)以及1个TIR区组成;番鸭与同属的翘鼻麻鸭、绿头鸭比对,TLR5基因序列的同源性分别为98.9%、99.9%,TLR5氨基酸序列的同源性分别为97.7%、99.7%。番鸭TLR5 mRNA在脾、肝、肺中表达量最高,肾、脑、直肠、空肠、十二指肠次之,心、回肠、盲肠最低。
- 李定霏汪开毓汤承杨发龙侯薇
- 关键词：TOLL样受体番鸭实时荧光定量RT-PCR
- 荧光定量PCR技术及其在动物病毒病定量检测中的应用被引量：2
- 2005年
- 荧光定量PCR技术是一种核酸定量技术,该技术在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号累积实时监测整个PCR进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法.该技术具有特异性强、灵敏度高、重复性好、定量准确、速度快、全封闭反应等特点,因此在动物病毒病的检测中,荧光定量PCR技术不但能定量检测病原体感染的强弱和在机体内的分布,还具有灵敏、快速、省力的特点.
- 马莉岳华黄兴傅安静李定霏谢秀兰刘小银
- 关键词：荧光定量PCR动物病毒病
- siRNA干涉禽流感病毒在鸡胚成纤维细胞中基因表达的影响
- 本文根据GeneBank中禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)NP、PA和PB1基因保守区序列设计、合成3个小干扰RNA(Small interference RNA,siRNA)--siRN...
- 马莉岳华李定霏
- 关键词：RNAI鸡胚成纤维细胞禽流感病毒基因表达
- 文献传递
- 中药复方制剂防治鸡肾病变型传染性支气管炎的研究被引量：2
- 2006年
- 汤承岳华俞宁刘小银李定霏黄兴刘海燕傅安静马莉
- 关键词：传染性支气管炎病毒感染中药复方制剂病毒病防治肾病变型养鸡业抗病毒作用
- 波尔山羊产气荚膜梭菌病诊断
- 2006年
- 黄兴岳华马莉李定霏
- 关键词：波尔山羊产气荚膜梭菌病种羊场圈舍病羊抽搐
- shRNAs干涉新城疫病毒在鸡胚中的增殖
- 用pGenesil-3 vector,构建了针对新城疫病毒NP基因的3个短发夹RNA表达载体,将其与转染试剂SiLentFectTM Lipid Reagent按1:3比例混合均匀后与新城疫病毒同时经绒毛尿囊腔接种于鸡胚...
- 李定霏岳华马丽
- 关键词：短发夹RNA
- siRNA干涉禽流感病毒在鸡胚成纤维细胞中基因表达的影响
- 根据GeneBank中禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)NP、PA和PB1基因保守区序列设计、合成3个小干扰RNA(Small interference RNA,siRNA)——siRNA-...
- 马莉岳华李定霏
- 关键词：RNAI鸡胚成纤维细胞禽流感病毒基因表达
- RNAiFect^(TM)和SuperFect转染试剂对4种细胞活性的影响被引量：2
- 2005年
- 在RNA干涉中,转染试剂的用量与siRNAs的量成正相关关系,但因转染试剂对细胞有一定的毒性作用,超过一定用量可以引起细胞形状改变、脱落、甚至死亡,直接影响着干涉的效率,所以确定转染试剂的优化用量,是RNA干涉试验中的重要环节.将不同用量的RNA iFectTM和SuperFect两种转染试剂分别加入鸡胚成纤维(CEF)细胞、293细胞、PK细胞和MDCK细胞中,在4h和24h后观察细胞的活力情况,比较了不同转染试剂对不同细胞的影响.结果表明:相同用量的两种转染试剂对293细胞、PK细胞和MDCK细胞的生长的影响远远小于对CEF细胞的影响;两种转染试剂用于外源小分子转染时,建议在293细胞、PK细胞和MDCK细胞上的用量不超过3u l;两种转染试剂对CEF细胞的毒性较大,不适合用于转染.
- 李定霏岳华傅安静马莉黄兴
- 关键词：鸡胚成纤维细胞293细胞MDCK细胞毒性
- 腺病毒载体介导的外源绿荧光蛋白基因在鸡胚成纤维细胞中的表达研究
- 本研究将介导绿荧光蛋白的重组腺病毒(Adenovirus)接种鸡胚成纤维细胞,通过荧光倒置显微镜监测GFP表达情况和流式细胞仪测定GFP表达效率。结果发现,重组腺病毒能够感染鸡胚成纤维细胞并能在其上表达所带的外源GFP基...
- 傅安静岳华李定霏马莉
- 关键词：重组腺病毒鸡胚成纤维细胞
- 短发夹结构RNA干扰新城疫病毒的增殖被引量：9
- 2007年
- 以新城疫病毒(NDV)NP基因为标靶,构建3个细胞内表达发夹样结构小干扰RNA(shRNA)的质粒载体,在鸡胚成纤维细胞(CEF)和鸡胚上进行了RNAi试验,筛选出一个有效抑制病毒复制的小分子ndv1.用阳离子脂质体转染试剂Silent-fect将ndv1转染CEF,以不相关shRNA质粒载体HK为阴性对照,4h后接种NDV,与对照相比,干涉组在病毒感染后3hNP基因的表达量降低2.3倍,6h降低21.1倍,9h降低9.8倍;ndv1能在48h内完全阻断NDV在CEF中的增殖,延缓病变出现时间,减轻病变程度.将Silent-fect-ndv1混合物与NDV同时注入10日龄SPF鸡胚绒毛尿囊腔,能使105ELD50NDV感染后17h鸡胚尿囊液中病毒增殖量减少94.4%,使106ELD50 NDV感染后17h鸡胚尿囊液中病毒增殖量减少62.5%.实验结果证实,在CEF中存在RNAi机制,抑制ND VNP基因的表达能有效阻断该病毒增殖,说明NP基因在NDV复制过程中起重要作用.实验结果为进一步利用RNAi技术在CEF和鸡胚中研究病毒基因组功能及筛选抗病毒小分子奠定了基础.
- 岳华汤承李定霏傅安静马丽
- 关键词：RNA干涉新城疫病毒鸡胚成纤维细胞鸡胚
