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番鸭TLR5基因的序列分析及其在组织中表达分布的检测: 2016年; 为了解番鸭TLR5的全基因序列和它在不同组织器官中的表达分布,采用PCR方法对番鸭TLR5全长O RF区进行扩增,并建立了SYBR GreenⅠ实时荧光定量RT-PCR方法,用该方法对番鸭TLR5 mRNA在组织器官中的分布进行了测定。结果显示,番鸭TLR5基因编码区序列全长2 580 bp,由跨膜区、11个富亮氨酸重复序列(LRR)、1个富亮氨酸重复C端结构域(LRR-CT)以及1个TIR区组成;番鸭与同属的翘鼻麻鸭、绿头鸭比对,TLR5基因序列的同源性分别为98.9%、99.9%,TLR5氨基酸序列的同源性分别为97.7%、99.7%。番鸭TLR5 mRNA在脾、肝、肺中表达量最高,肾、脑、直肠、空肠、十二指肠次之,心、回肠、盲肠最低。; 李定霏汪开毓汤承杨发龙侯薇; 关键词：TOLL样受体番鸭实时荧光定量RT-PCR

荧光定量PCR技术及其在动物病毒病定量检测中的应用被引量：2: 2005年; 荧光定量PCR技术是一种核酸定量技术,该技术在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号累积实时监测整个PCR进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法.该技术具有特异性强、灵敏度高、重复性好、定量准确、速度快、全封闭反应等特点,因此在动物病毒病的检测中,荧光定量PCR技术不但能定量检测病原体感染的强弱和在机体内的分布,还具有灵敏、快速、省力的特点.; 马莉岳华黄兴傅安静李定霏谢秀兰刘小银; 关键词：荧光定量PCR 动物病毒病

siRNA干涉禽流感病毒在鸡胚成纤维细胞中基因表达的影响: 本文根据GeneBank中禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)NP、PA和PB1基因保守区序列设计、合成3个小干扰RNA(Small interference RNA,siRNA)--siRN...; 马莉岳华李定霏; 关键词：RNAI 鸡胚成纤维细胞禽流感病毒基因表达; 文献传递

中药复方制剂防治鸡肾病变型传染性支气管炎的研究被引量：2: 2006年; 汤承岳华俞宁刘小银李定霏黄兴刘海燕傅安静马莉; 关键词：传染性支气管炎病毒感染中药复方制剂病毒病防治肾病变型养鸡业抗病毒作用

siRNA干涉禽流感病毒在鸡胚成纤维细胞中基因表达的影响: 根据GeneBank中禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)NP、PA和PB1基因保守区序列设计、合成3个小干扰RNA(Small interference RNA,siRNA)——siRNA-...; 马莉岳华李定霏; 关键词：RNAI 鸡胚成纤维细胞禽流感病毒基因表达

RNAiFect^(TM)和SuperFect转染试剂对4种细胞活性的影响被引量：2: 2005年; 在RNA干涉中,转染试剂的用量与siRNAs的量成正相关关系,但因转染试剂对细胞有一定的毒性作用,超过一定用量可以引起细胞形状改变、脱落、甚至死亡,直接影响着干涉的效率,所以确定转染试剂的优化用量,是RNA干涉试验中的重要环节.将不同用量的RNA iFectTM和SuperFect两种转染试剂分别加入鸡胚成纤维(CEF)细胞、293细胞、PK细胞和MDCK细胞中,在4h和24h后观察细胞的活力情况,比较了不同转染试剂对不同细胞的影响.结果表明:相同用量的两种转染试剂对293细胞、PK细胞和MDCK细胞的生长的影响远远小于对CEF细胞的影响;两种转染试剂用于外源小分子转染时,建议在293细胞、PK细胞和MDCK细胞上的用量不超过3u l;两种转染试剂对CEF细胞的毒性较大,不适合用于转染.; 李定霏岳华傅安静马莉黄兴; 关键词：鸡胚成纤维细胞 293细胞 MDCK细胞毒性

短发夹结构RNA干扰新城疫病毒的增殖被引量：9: 2007年; 以新城疫病毒(NDV)NP基因为标靶,构建3个细胞内表达发夹样结构小干扰RNA(shRNA)的质粒载体,在鸡胚成纤维细胞(CEF)和鸡胚上进行了RNAi试验,筛选出一个有效抑制病毒复制的小分子ndv1.用阳离子脂质体转染试剂Silent-fect将ndv1转染CEF,以不相关shRNA质粒载体HK为阴性对照,4h后接种NDV,与对照相比,干涉组在病毒感染后3hNP基因的表达量降低2.3倍,6h降低21.1倍,9h降低9.8倍;ndv1能在48h内完全阻断NDV在CEF中的增殖,延缓病变出现时间,减轻病变程度.将Silent-fect-ndv1混合物与NDV同时注入10日龄SPF鸡胚绒毛尿囊腔,能使105ELD50NDV感染后17h鸡胚尿囊液中病毒增殖量减少94.4%,使106ELD50 NDV感染后17h鸡胚尿囊液中病毒增殖量减少62.5%.实验结果证实,在CEF中存在RNAi机制,抑制ND VNP基因的表达能有效阻断该病毒增殖,说明NP基因在NDV复制过程中起重要作用.实验结果为进一步利用RNAi技术在CEF和鸡胚中研究病毒基因组功能及筛选抗病毒小分子奠定了基础.; 岳华汤承李定霏傅安静马丽; 关键词：RNA干涉新城疫病毒鸡胚成纤维细胞鸡胚

腺病毒载体介导的GFP在鸡胚成纤维细胞中的表达及RNA干涉被引量：3: 2008年; 鸡胚成纤维细胞(CEF)是多种动物及人类病毒的易感细胞;也是研究鸡的基因组功能的理想材料.本试验的目的是研究非复制型腺病毒载体对CEF的转染效率及安全性;并建立在CEF细胞中进行RNAi的技术平台.采用GFP重组非复制型腺病毒载体(Ade-GFP)转染CEF细胞;结果证明0.1-2000 MOI Adv-GFP均可转染CEF细胞并表达GFP;转染后16h开始出现GFP阳性细胞;胞核与胞浆可见明亮的荧光;荧光细胞数量及荧光强度在24～36h达到高峰;以后逐渐衰减;约180h全部消失;转染效率最高为22.3%;形态学观察及流式细胞仪测定结果显示;Adv-GFP转染的CEF细胞未见细胞病变;多数转染组细胞活力不受影响;说明用Adv-GFP携带外源转染CEF细胞是安全可行的;用脂质体转染试剂转染化学合成的GFP-siRNA;成功地干涉了腺病毒载体介导的GFP基因在鸡胚成纤维细胞的表达;干涉效率为85%;证明了鸡胚成纤维细胞中存在RNAi机制;为进一步利用非复制型腺病毒载体递送siRNA在CEF细胞内进行RNAi的研究奠定了基础.; 傅安静汤承李定霏谢青岳华; 关键词：RNA干涉腺病毒载体鸡胚成纤维细胞

siRNA干涉禽流感病毒PA基因在鸡胚成纤维细胞中的表达被引量：2: 2007年; 用阳离子脂体质转染试剂将人工合成的小干扰RNA(Small interference RNA,siRNA)转染鸡胚成纤维细胞(CEF).结果表明,针对禽流感病毒(AIV)H5N1亚型核蛋白(NP)基因的siRNA能在AIV感染后1,2,3 h显著抑制NP基因的表达,表达水平分别降低3,1.4和2.5倍.; 马莉朱金凤汤承李明义李定霏岳华; 关键词：RNA干涉 SIRNA 禽流感病毒实时荧光定量RT-PCR 鸡胚成纤维细胞

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李定霏