李定霏 作品数:12 被引量:17 H指数:2 供职机构: 四川农业大学动物医学院 更多>> 发文基金: 四川省应用基础研究计划项目 国家科技重大专项 “十一五”国家科技支撑计划 更多>> 相关领域: 农业科学 生物学 更多>>
番鸭TLR5基因的序列分析及其在组织中表达分布的检测 2016年 为了解番鸭TLR5的全基因序列和它在不同组织器官中的表达分布,采用PCR方法对番鸭TLR5全长O RF区进行扩增,并建立了SYBR GreenⅠ实时荧光定量RT-PCR方法,用该方法对番鸭TLR5 mRNA在组织器官中的分布进行了测定。结果显示,番鸭TLR5基因编码区序列全长2 580 bp,由跨膜区、11个富亮氨酸重复序列(LRR)、1个富亮氨酸重复C端结构域(LRR-CT)以及1个TIR区组成;番鸭与同属的翘鼻麻鸭、绿头鸭比对,TLR5基因序列的同源性分别为98.9%、99.9%,TLR5氨基酸序列的同源性分别为97.7%、99.7%。番鸭TLR5 mRNA在脾、肝、肺中表达量最高,肾、脑、直肠、空肠、十二指肠次之,心、回肠、盲肠最低。 李定霏 汪开毓 汤承 杨发龙 侯薇关键词:TOLL样受体 番鸭 实时荧光定量RT-PCR 荧光定量PCR技术及其在动物病毒病定量检测中的应用 被引量:2 2005年 荧光定量PCR技术是一种核酸定量技术,该技术在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号累积实时监测整个PCR进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法.该技术具有特异性强、灵敏度高、重复性好、定量准确、速度快、全封闭反应等特点,因此在动物病毒病的检测中,荧光定量PCR技术不但能定量检测病原体感染的强弱和在机体内的分布,还具有灵敏、快速、省力的特点. 马莉 岳华 黄兴 傅安静 李定霏 谢秀兰 刘小银关键词:荧光定量PCR 动物病毒病 siRNA干涉禽流感病毒在鸡胚成纤维细胞中基因表达的影响 本文根据GeneBank中禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)NP、PA和PB1基因保守区序列设计、合成3个小干扰RNA(Small interference RNA,siRNA)--siRN... 马莉 岳华 李定霏关键词:RNAI 鸡胚成纤维细胞 禽流感病毒 基因表达 文献传递 中药复方制剂防治鸡肾病变型传染性支气管炎的研究 被引量:2 2006年 汤承 岳华 俞宁 刘小银 李定霏 黄兴 刘海燕 傅安静 马莉关键词:传染性支气管炎病毒感染 中药复方制剂 病毒病防治 肾病变型 养鸡业 抗病毒作用 波尔山羊产气荚膜梭菌病诊断 2006年 黄兴 岳华 马莉 李定霏关键词:波尔山羊 产气荚膜梭菌病 种羊场 圈舍 病羊 抽搐 siRNA干涉禽流感病毒在鸡胚成纤维细胞中基因表达的影响 根据GeneBank中禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)NP、PA和PB1基因保守区序列设计、合成3个小干扰RNA(Small interference RNA,siRNA)——siRNA-... 马莉 岳华 李定霏关键词:RNAI 鸡胚成纤维细胞 禽流感病毒 基因表达 RNAiFect^(TM)和SuperFect转染试剂对4种细胞活性的影响 被引量:2 2005年 在RNA干涉中,转染试剂的用量与siRNAs的量成正相关关系,但因转染试剂对细胞有一定的毒性作用,超过一定用量可以引起细胞形状改变、脱落、甚至死亡,直接影响着干涉的效率,所以确定转染试剂的优化用量,是RNA干涉试验中的重要环节.将不同用量的RNA iFectTM和SuperFect两种转染试剂分别加入鸡胚成纤维(CEF)细胞、293细胞、PK细胞和MDCK细胞中,在4h和24h后观察细胞的活力情况,比较了不同转染试剂对不同细胞的影响.结果表明:相同用量的两种转染试剂对293细胞、PK细胞和MDCK细胞的生长的影响远远小于对CEF细胞的影响;两种转染试剂用于外源小分子转染时,建议在293细胞、PK细胞和MDCK细胞上的用量不超过3u l;两种转染试剂对CEF细胞的毒性较大,不适合用于转染. 李定霏 岳华 傅安静 马莉 黄兴关键词:鸡胚成纤维细胞 293细胞 MDCK细胞 毒性 短发夹结构RNA干扰新城疫病毒的增殖 被引量:9 2007年 以新城疫病毒(NDV)NP基因为标靶,构建3个细胞内表达发夹样结构小干扰RNA(shRNA)的质粒载体,在鸡胚成纤维细胞(CEF)和鸡胚上进行了RNAi试验,筛选出一个有效抑制病毒复制的小分子ndv1.用阳离子脂质体转染试剂Silent-fect将ndv1转染CEF,以不相关shRNA质粒载体HK为阴性对照,4h后接种NDV,与对照相比,干涉组在病毒感染后3hNP基因的表达量降低2.3倍,6h降低21.1倍,9h降低9.8倍;ndv1能在48h内完全阻断NDV在CEF中的增殖,延缓病变出现时间,减轻病变程度.将Silent-fect-ndv1混合物与NDV同时注入10日龄SPF鸡胚绒毛尿囊腔,能使105ELD50NDV感染后17h鸡胚尿囊液中病毒增殖量减少94.4%,使106ELD50 NDV感染后17h鸡胚尿囊液中病毒增殖量减少62.5%.实验结果证实,在CEF中存在RNAi机制,抑制ND VNP基因的表达能有效阻断该病毒增殖,说明NP基因在NDV复制过程中起重要作用.实验结果为进一步利用RNAi技术在CEF和鸡胚中研究病毒基因组功能及筛选抗病毒小分子奠定了基础. 岳华 汤承 李定霏 傅安静 马丽关键词:RNA干涉 新城疫病毒 鸡胚成纤维细胞 鸡胚 腺病毒载体介导的GFP在鸡胚成纤维细胞中的表达及RNA干涉 被引量:3 2008年 鸡胚成纤维细胞(CEF)是多种动物及人类病毒的易感细胞;也是研究鸡的基因组功能的理想材料.本试验的目的是研究非复制型腺病毒载体对CEF的转染效率及安全性;并建立在CEF细胞中进行RNAi的技术平台.采用GFP重组非复制型腺病毒载体(Ade-GFP)转染CEF细胞;结果证明0.1-2000 MOI Adv-GFP均可转染CEF细胞并表达GFP;转染后16h开始出现GFP阳性细胞;胞核与胞浆可见明亮的荧光;荧光细胞数量及荧光强度在24~36h达到高峰;以后逐渐衰减;约180h全部消失;转染效率最高为22.3%;形态学观察及流式细胞仪测定结果显示;Adv-GFP转染的CEF细胞未见细胞病变;多数转染组细胞活力不受影响;说明用Adv-GFP携带外源转染CEF细胞是安全可行的;用脂质体转染试剂转染化学合成的GFP-siRNA;成功地干涉了腺病毒载体介导的GFP基因在鸡胚成纤维细胞的表达;干涉效率为85%;证明了鸡胚成纤维细胞中存在RNAi机制;为进一步利用非复制型腺病毒载体递送siRNA在CEF细胞内进行RNAi的研究奠定了基础. 傅安静 汤承 李定霏 谢青 岳华关键词:RNA干涉 腺病毒载体 鸡胚成纤维细胞 siRNA干涉禽流感病毒PA基因在鸡胚成纤维细胞中的表达 被引量:2 2007年 用阳离子脂体质转染试剂将人工合成的小干扰RNA(Small interference RNA,siRNA)转染鸡胚成纤维细胞(CEF).结果表明,针对禽流感病毒(AIV)H5N1亚型核蛋白(NP)基因的siRNA能在AIV感染后1,2,3 h显著抑制NP基因的表达,表达水平分别降低3,1.4和2.5倍. 马莉 朱金凤 汤承 李明义 李定霏 岳华关键词:RNA干涉 SIRNA 禽流感病毒 实时荧光定量RT-PCR 鸡胚成纤维细胞