李志英
- 作品数：18 被引量：60H指数：5
- 供职机构：暨南大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划广东省自然科学基金国家科技攻关计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生化学工程农业科学更多>>
- hEGF和hbFGF的C端(78-154aa)融合蛋白的表达、纯化及活性测定被引量：3
- 2002年
- 目的 :将人表皮生长因子 (hEGF)与人碱性成纤维细胞生长因子 (hbFGF)的C端连接 ,构建出既可与肝素结合 ,又具有促进细胞生长活性的融合蛋白 ,并在大肠杆菌中高效表达。方法 :将PCR扩增hEGF全基因与PCR扩增hbFGF 5 端的 2 31bp的片段连接 ,克隆到表达载体pJN ,构建出含融合基因的表达质粒pJRH。将pJRH转化BL2 1(DE3)表达菌株 ,获得融合蛋白的表达菌株pJRH(BL)。Westernblot检测表达产物免疫学活性。表达产物上肝素亲和柱和分子筛进行纯化。结果 :融合蛋白表达产量为 30 % ,融合蛋白不仅能与肝素结合 ,而且具有促细胞增殖的活性。Westernblot检测结果显示融合蛋白有EGF的免疫活性。融合蛋白的等电点为 5 2。结论 :本研究构建了一个hEGF和hbFGF的C端的融合蛋白 ,该蛋白基本保持了两者原有的生物活性。作为一个新的活性因子 ,本研究为探讨活性因子蛋白结构与功能的关系奠定基础。
- 余榕捷张玲林剑谢秋玲孙奋勇蒲含林李志英
- 关键词：尿抑胃素成纤维细胞生长因子HEGF
- 两种类型人碱性成纤维生长因子的体外稳定性研究被引量：4
- 2005年
- 目的:通过野生型bFGF和改构型bFGF蛋白溶液中的聚集过程的比较,初步探讨bFGF在水 溶液中发生聚集的机理。方法:在选择合适溶液体系后,采用蛋白溶解度和促有丝分裂活性能力为 指标,表征野生型bFGF和突变型bFGF聚合程度,分析共价聚合和非共价聚合所起的作用。结果: 在相同的溶液体系中,野生型bFGF的聚集程度高于突变型bFGF。bFGF聚合程度与浓度有依赖性。 沉淀结果分析非共价聚合占主要作用。结论:野生型bFGF在溶液中共价聚和和非共价聚合同时发 生,两种bFGF聚合过程中非共价聚合占较大比例。突变半胱氨酸可以减少聚合发生。
- 李国辉张玲谢秋玲李志英洪岸
- 关键词：碱性成纤维生长因子体外蛋白溶解度蛋白溶液有丝分裂突变型
- 成纤维细胞生长因子－2结构类似物,其生产方法及应用
- 本发明提供了成纤维细胞生长因子-2的结构类似物及其生产方法，含有这些类似物及医药上可接受的载体或赋形剂的药物组合物，以及该组合物在治疗组织损伤中的应用。本发明的FGF-2结构类似物与天然的人FGF-2相比具有较好的储存稳...
- 林剑刘小青洪岸李校堃陈小佳李志英
- 文献传递
- pET3c衍生载体的构建及应用研究被引量：5
- 2001年
- 对原核表达载体 pET3c进行改建 ,消去载体上非必需的EcoRⅠ、HindⅢ限制酶位点 ,然后在克隆位点BamHⅠ处引入LacZ片段 ,经此二步改建后的载体命名为 pJN982。该载体保留了 pET3c高效表达外源基因的能力 ,同时 ,其融合克隆位点由 1个增至 7个 ,并获得以目视法筛选重组子的能力。应用该载体在E coliBL2 1(DE3)pLysS中融合表达牛碱性成纤维细胞生长因子 ,表达量占菌体总蛋白 30 0 4%。破碎菌体上清经阳离子交换和肝素亲和两步层析 ,得纯度为 95 %的重组蛋白 ,活性检测显示 ,重组蛋白具有与参照品一致的促有丝分裂活性。
- 熊盛林剑洪岸刘杰森张玲李志英姚汝华
- 关键词：多克隆位点
- 重组类胰岛素样生长因子-Ⅰ的纯化与复性被引量：16
- 2006年
- 目的:获得高纯度和高活性的胰岛素样生长因子(insulin-like growth factor,IGF-1);方法:构建好的BL21大肠杆菌工程菌经IPTG诱导,以融合一段截短型半乳糖苷酶及His-tag形式表达IGF-1融合蛋白(约15kDa),超声破碎,提取包涵体经镍柱亲和层析后,用羟氨切割纯化的融合蛋白,纯化后的蛋白质在小分子保护剂及GSH/GSSG的存在下复性。结果:经Ni2+柱亲和层析,IGF-1纯度达90%以上,复性后得到有较高生物活性的IGF-1。结论:IGF-1发酵及纯化和复性方法的建立为大量生产IGF-1打下了基础。
- 刘侃汪炬谢秋玲李志英洪岸
- 利用基因芯片研究六味地黄丸对老年大鼠基因表达的影响被引量：17
- 2004年
- 目的 :利用基因芯片研究六味地黄丸对老年大鼠基因表达的影响。方法 :将 4 0只 2 0月龄SD雄性大鼠分成不用药与用六味地黄丸两组 ,用药 5周后 ,通过检测相关生化指标 ,确定用药组与对照组之间具显著差异。提取 2 0只 4月龄SD雄性大鼠脾脏mRNA ,平均分成两组 ,分别与老年用药组脾脏mRNA和老年对照组脾脏mRNA配对进行逆转录和芯片杂交实验 ,获得老年对照组和老年用药组分别和青年组相比 ,相关基因表达水平的差异 ,通过比较两组数据 ,评价六味地黄丸对与衰老相关的基因表达的调节作用。结果 :芯片结果显示老年对照组与青年组相比有 13个基因表达显著下调 ,1个基因表达显著上调。而在老年用药组中 ,14个相关基因的表达水平没有明显变化 ;而另有 2序列与青年组相比表达显著上调。结论 :通过基因芯片技术 ,发现 16个基因的表达水平可受六味地黄丸用药的影响。通过深入研究对我们深入理解六味地黄丸抗衰老的分子机制可能有帮助。
- 余榕捷蒲含林周天鸿李志英林剑
- 关键词：六味地黄丸寡核苷酸序列分析基因表达衰老
- 碱性成纤维细胞生长因子培养条件下的三维组织培养被引量：5
- 2002年
- 目的 :在含重组人碱性成纤维细胞生长因子 (rhbFGF)的细胞培养基条件下 ,研究巨噬细胞和成纤维细胞以血纤维蛋白凝块或脂肪组织为支架 ,构建三维组织模型的可能性。方法 :采用相差显微镜观察、吉姆萨 (Giem sa)染色和扫描电子显微镜观察巨噬细胞和成纤维细胞在血纤维蛋白凝块或脂肪组织支架上生长情况。结果 :巨噬细胞和成纤维细胞在血纤维蛋白凝块和脂肪组织支架上均生长良好 ,细胞间无排斥现象 ,部分细胞间建立了细胞桥连接。结论 :血纤维蛋白凝块和脂肪组织支架对两种细胞都表现出无免疫原性和很好的组织相溶性 ,细胞间不仅能够共存 。
- 王一飞戴云林剑李志英吕冀张美英李久香
- 关键词：碱性成纤维细胞生长因子纤维蛋白脂肪组织巨噬细胞
- 一种重组人碱性成纤维细胞生长因子基因及其非融合表达产物、生产方法和应用
- 本发明属于基因工程应用领域。本发明涉及一种非融合重组人碱性成纤维细胞生长因子的基因，该基因的翻译起始区经过修改后有较高的密码子偏好性和较低的G+C含量。本发明还提供含有该基因的载体和原核表达系统。该基因在本发明提供的原核...
- 陈小佳孙奋勇林剑洪岸谢秋玲张玲汪炬李志英
- 文献传递
- 3T3成纤维细胞和巨噬细胞在含rhbFGF培养基血纤维上的共培养
- 2000年
- 目的 :了解 3T3成纤维细胞和巨噬细胞在含重组人碱性成纤维细胞生长因子 (rhbFGF)培养基血纤维上的生长行为 .方法 :采用四甲基偶氮唑盐 (MTT)比色法、相差显微镜观察、吉姆萨染色和扫描电子显微镜观察方法 .结果 :在低血清含rhbFGF的培养条件下 ,3T3成纤维细胞和巨噬细胞在血纤维上能够良好生长 .结论 :本研究揭示 ,血纤维不仅可以作为一种低免疫原性或无抗原性的生物支持材料用于三维组织培养 。
- 王一飞戴云李志英张玲林剑
- 关键词：巨噬细胞3T3成纤维细胞共培养
- MTT法检测Rh-bFGF提高Balb/c3T3细胞酶活性及促细胞增殖作用被引量：8
- 1998年
- 以Ｂａｌｂ／ｃ３Ｔ３细胞为靶细胞，采用体外细胞培养方法，观察重组人碱性成纤维细胞生长因子的促分裂和提高酶活性作用。结果发现：重组人碱性成纤维细胞生长因子提高Ｂａｌｂ／ｃ３Ｔ３细胞酶活性的最佳作用浓度为６．２５ｎｇ／ｍＬ（μｇ／Ｌ），而促分裂增殖的最佳作用浓度为１００ｎｇ／ｍＬ（μｇ／Ｌ）。两者分别与应的对照组比较Ｐ＜０．０１，具有统计学意义。从而证实了重组人碱性成纤维细胞生长因子具有促分裂和增强酶活性的作用。
- 刘小青李志英林剑
- 关键词：基因工程RH-BFGFMTT法酶活性
