李明义
- 作品数：19 被引量：86H指数：6
- 供职机构：中国动物卫生与流行病学中心更多>>
- 发文基金：“十一五”国家科技支撑计划国家科技支撑计划四川省应用基础研究计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 中国大陆H9N2亚型禽流感病毒HA基因遗传分析及抗原相关性研究被引量：6
- 2010年
- 为研究我国大陆H9N2亚型禽流感病毒血凝素(HA)基因的分子进化及抗原相关性,本研究对来自15个省、市、自治区的34株H9N2亚型禽流感病毒的HA基因进行了测序及系统发育分析,并采用交叉血凝抑制试验及交叉攻毒保护试验对不同遗传分支下毒株间抗原相关性进行了分析.结果表明,所有34个毒株HA基因均符合低致病性禽流感病毒的特征,但毒株间变异程度增加.系统发育分析表明,我国大陆H9N2亚型禽流感病毒主要分为三个系列,各系列内毒株没有明显的地区及时间特征.抗原相关性研究表明,不同遗传系列下的毒株其抗原相关性明显低于同一系列内部毒株间的抗原相关性,说明我国H9N2亚型禽流感病毒抗原性差异较大.此外,本研究同时筛选得到了用于制备多价苗的代表毒株.
- 岳华汤承杨发龙李明义吴海燕宫晓
- 关键词：H9N2亚型禽流感病毒血凝素基因
- 荧光定量RT-PCR检测鸡α干扰素mRNA方法的建立被引量：5
- 2009年
- 根据鸡IFN-α基因序列设计引物,建立了定量检测鸡IFN-α基因表达水平的荧光定量RT-PCR（RRT-PCR）方法,并对新城疫病毒（NDV）感染的鸡法氏囊、胸腺中IFN-αmRNA表达水平进行了检测.结果表明,该方法对鸡IFN-αmRNA的扩增效率为103.99%,线性范围为10-2～10-9,相关系数为0.996,最低能检出73拷贝/反应;熔解曲线分析RRT-PCR产物在（88.6±0.2）℃出现单特异峰;特异性评价结果显示,本方法只扩增鸡IFN-αmRNA,不与常见禽源病原微生物发生交叉反应.对NDV感染鸡的法氏囊、胸腺中IFN-αmRNA表达水平的定量检测结果表明,IFN-αmRNA在感染后36,48 h显著升高.本研究建立的检测鸡IFN-αmRNA表达水平的RRT-PCR方法具有敏感性高、稳定性好和特异性强的特点,为鸡IFN-αmRNA的精确定量提供了新方法.
- 雷小文岳华李明义汤承
- 关键词：新城疫病毒干扰素Α荧光定量RT-PCR
- SYBR Green Ⅰ实时荧光PCR检测网状内皮增生症病毒方法的建立被引量：13
- 2008年
- 根据禽网状内皮组织增生症病毒(REV)长末端重复序列LTR基因保守区域设计并合成一对引物,建立基于SYBR GreenI模式的实时荧光PCR方法(Real-timePCR)。以常规PCR产物为标准品建立标准曲线,并对方法的特异性、敏感性、可重复性以及再现性、检出率进行评价。结果表明,该方法只从REV阳性样本检出扩增信号,不与其它病原出现交叉反应;熔解温度为86.8±0.5℃,无引物二聚体;扩增产物片段大小为270bp,与预期大小相符,测序结果证实为REV靶序列;在1.01×102～1.01×109拷贝之间呈现良好的线性关系,相关系数为0.999,扩增效率为99.7%,最低可检测101拷贝/反应阳性标准品,比常规PCR敏感103倍;组内变异系数、组间变异系数分别为4.80%～5.72%、0.75%～3.87%;对16例临床疑似病例进行检测,阳性率为81.25%(13/16),随机抽取7份阳性扩增产物进行测序,证实为REV序列。本研究建立的SYBR GreenI实时荧光PCR特异性强、通量高、灵敏度高、检测速度快,为REV的快速检测、分子流行病学调查以及监测REV污染疫苗情况提供新方法。
- 宋丽岳华李明义汤承
- 关键词：SYBR
- 禽流感等重大动物疫病快速检测试剂
- 陈义平李明义范根成冯秀丽刘拂晓白志娟王莉娟倪雪霞侯娟邓珣曹洪敬陆明哲蔡丽娟王永玲刘忠琛
- 该项目通过系统全面研究，研制了《禽流感病毒H9亚型血凝抑制试验抗原与阴、阳性血清》、《禽流感病毒H7亚型血凝抑制试验抗原与阴、阳性血清》、《猪伪狂犬抗体免疫金标检测试纸卡》、《口蹄疫3ABC抗体竞争ELISA检测试剂盒》...
- 关键词：
- 关键词：抗原快速检测试剂血清重大动物疫病禽流感
- TaqMan实时荧光RT-PCR快速检测H5亚型禽流感病毒
- 参考GenBank中100个H5亚型禽流感病毒分离株的HA基因核苷酸保守序列设计引物和TaqMan探针,对荧光定量RT-PCR反应体系和条件进行优化,并对该方法进行评价。结果表明:该方法对H5N1亚型和H5N2亚型禽流感...
- 马莉汤承李明义岳华张彬张兆敏
- 关键词：禽流感病毒H5亚型TAQMAN探针
- 文献传递
- 荧光定量RT-PCR检测禽白血病病毒方法的建立及应用被引量：11
- 2008年
- gag基因是禽白血病病毒(ALV)的群特异性基因,根据GenBank中登录的gag基因的保守序列(E46390),设计合成了1对引物,建立了基于SYBR GreenI模式的检测禽白血病病毒的实时荧光定量RT-PCR方法。该方法只对目的基因有扩增,对其它无关病毒核酸无特异性扩增;扩增效率为94.6%;在8.2×102～8.2×107拷贝的范围内有很好的线性关系(Y=3.46X+31.8,r=0.9995);最低可检测82个拷贝的病毒核酸,与普通PCR方法相比,灵敏度高出1000倍。组内CV为0.28%～1.45%;组间CV为2.13%～3.84%;对151例临床疑似样本的检出率为54.9%(83/151)。随机选择15份阳性样本PCR产物克隆测序,结果证明扩增片断为ALV的特异序列,与ALVgag基因核苷酸同源性为97.8～98.9%;对重庆14个县的14个健康商品蛋鸡群的134份粪便棉拭子进行检测,ALV的检出率为38.1%,鸡群的阳性率为14/14。同时用实时RT-PCR方法和ELISA方法对从种鸡场随机采集的30份100日龄蛋鸡的血清进行检测,实时RT-PCR检测率为5/30,ELISA方法检测率为4/30。本方法的建立为禽白血病的快速诊断、大规模检疫、监测、流行病学调查以及药物筛选等提供了新的检测方法。
- 李佳桃崔宝玉岳华李明义汤承
- 关键词：禽白血病病毒GAG基因实时荧光定量RT-PCR
- 氢氧化铝纳米颗粒对鸡新城疫抗原的免疫佐剂效应被引量：16
- 2008年
- 以新城疫病毒为抗原,制备纳米氢氧化铝和常规氢氧化铝佐剂灭活疫苗,分别免疫20日龄雏鸡,比较了免疫后2～24 d的抗体效价和外周血淋巴细胞CD4、CD8分子mRNA的表达水平。结果显示,纳米氢氧化铝佐剂组抗体效价在免疫后第10 d达到峰值,为6.67±0.58,免疫保护期超过9 d,常规氢氧化铝佐剂组抗体效价在免疫后第10 d达到峰值,为4.33±0.58,免疫保护期小于7 d;与常规氢氧化铝佐剂组相比,纳米氢氧化铝佐剂组免疫后4～17 d的CD4以及10～17 d的CD8分子mRNA的表达水平显著提高,在峰值时后者的表达量为前者的2.0和1.9倍。结果表明,纳米氢氧化铝佐剂能辅佐鸡体产生比常规氢氧化铝佐剂更强烈的体液免疫和细胞免疫。
- 汤承黄兴杨发龙李明义范根成岳华
- 关键词：氢氧化铝佐剂HI抗体CD4CD8
- 双重RT-PCR同时快速检测H5亚型禽流感病毒和新城疫病毒强毒株
- 2009年
- 本研究针对AIV H5的血凝素(HA)基因和vNDV的融合蛋白(F)基因设计两对引物,建立了单管同时检测AIVH5和vNDV的双重RT-PCR(dRT-PCR),该方法能在单一反应管内同时检测AIVH5和vNDV,不与其它亚型AIV、弱毒NDV毒株以及其它病原体发生非特异性扩增;对含有AIV H5 HA基因和vNDV F基因重组质粒DNA的最低检测限分别为20.6和406fg,敏感性与单项RT-PCR相同;从样本处理到报告结果仅需5h。对24份临床疑似样本进行检测,AIVH5均为阴性,vNDV阳性18份,PCR产物测序证明为靶基因序列,其具有vNDV F基因的特征性序列,随机选9份vNDV阳性样本接种SPF鸡胚,分离出6株vNDV,病毒分离率为6/9;对100 ELD50的AIV H5N1和100 ELD50的vNDV人工同时感染5日龄SPF鸡的脑、肝脏、肺脏和泄殖腔棉拭子进行dRT-PCR检测,AIV H5的检测率为4/5,3/5,5/5,4/5,vNDV的检测率为3/5,5/5,4/5,3/5,而对H9N2和LaSota毒株实验同时感染样本及阴性对照样本的检测均为阴性。可见本研究建立的dRT-PCR为AIV H5和vNDV诊断、监测、检疫及分子流行病学调查提供了特异性强、操作简单、检测速度快、成本低廉的新方法。
- 张斌汤承张兆敏马莉刘小银李明义岳华
- 关键词：禽流感H5亚型双重RT-PCR
- 禽流感、新城疫等重大禽病防治关键技术研究及产业化
- 岳华李明义江厚生汤承于学辉范根成马广鹏杨发龙王志亮索化夷王秀敏张焕容刘群孙健侯晓谯
- 1、课题来源与背景：本成果由1项国家“十五”科技攻关项目（2004BA519A58）、3项国家“十一五”科技支撑计划重大项目（2006BAD06A11）、（2006BAD06A08）、（2008BADB4B0204）、1...
- 关键词：
- 关键词：家禽疫病禽流感新城疫疫苗中兽药
- 2007-2009年部分猪群PRRSV ORF5和Nsp2基因的克隆与序列分析被引量：6
- 2010年
- 【目的】了解2007-2009年部分猪群中猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)株的遗传演化规律。【方法】按常规方法,从2007-2009年收集的疑似蓝耳病猪群组织样品中分离PRRSV,应用RT-PCR方法,对分离的10株PRRSV的ORF5和Nsp2基因进行扩增,测序后与19个PRRSV参考毒株的ORF5、Nsp2基因进行核苷酸、氨基酸序列比较及遗传进化分析。【结果】分离到的SDWF5、SDCX1、LN3、LN8、LN12、SD2、SD5、SD14、ZB1、ZB2共10株PRRSV均属于美洲型PRRSV变异株,其ORF5基因全长均为603bp,编码约200个氨基酸,其推导氨基酸序列变异主要发生在9～39位;SDWF5、SDCX1、LN3、LN12、SD2、SD5、SD14、ZB2等8个分离株的Nsp2基因全长为2845bp,编码950个氨基酸,与代表毒株VR-2332相比,8个分离株在Nsp2基因推导氨基酸序列的480和532～560位发生了不连续的30个氨基酸缺失。与19个PRRSV参考毒株的ORF5、Nsp2序列进行比较后发现,10个分离株的ORF5、Nsp2基因核苷酸序列及其推导氨基酸序列均发生了较大变异。遗传进化分析发现,10个分离株与以CH-1a为代表的国内流行毒株处于同一分支,与JXA1等变异毒株的遗传距离较近。【结论】来源于不同猪群的10个PRRSV分离株的遗传关系存在交叉,没有明显的地域特征,但可能具有相同的始祖Ch-1a。
- 邹敏吴发兴王福军李金积冯阳刘蕾李明义陈克正范根成李晓成
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒变异株ORF5基因NSP2基因
