李盈盈
- 作品数：5 被引量：103H指数：4
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- 汉滩病毒A9株强毒和弱毒克隆M基因片段G1糖蛋白编码区核苷酸序列的分析比较被引量：2
- 1996年
- 采用逆转录－ＰＣＲ方法，用３对引物分３个片段扩增强毒克隆（Ａ９ｖ）及弱毒克隆（Ａ３％）的Ｍ基因片段ｃＤＮＡ，并克隆入ｐＧＥＭ－Ｔ载体中。采用Ｓａｎｇｅｒ双脱氧法测定了Ａ３９ｓ、Ａ９ｖ病毒Ｇ１糖蛋白编码区的全序列，发现二者均由１９７８个核苷酸组成，比７６／１１８株少６个核苷酸，并发现Ａ３９ｓ在Ｇ１编码区有３３个碱基及８个氨基酸与Ａ９ｖ不同。进一步与７６／１１８、ＨＶ１１４的相关序列比较，发现Ｇ１编码区的第６０６、６１４位氨基酸的变异同Ａ３９ｓ病毒的减毒有一定相关。从Ａ３９ｓ、Ａ９ｖ、７６／１１８及ＨＶ１１４４株病毒Ｇ１糖蛋白编码区推导的氨基酸序列亲疏水性资料显示，在位于Ｇ１糖蛋白Ｃ末端的最大亲水区域的６００～６２０位氨基酸区域，弱毒株Ａ３９ｓ同强毒株Ａ９ｖ、７６／１１８、ＨＶ１１４的亲水性有明显不同，而这一差异又主要由第６１４位氨基酸的变异所引起。因此推测，Ｇ１糖蛋白Ｃ端亲水区域同汉滩病毒毒力相关，而第６１４位的精氨酸被谷氨酰胺取代，同Ａ３９ｓ病毒毒力的减弱可能有关。
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- 关键词：汉坦病毒CDNA克隆
- 用单克隆抗体分析流行性出血热病毒的核蛋白抗原位点被引量：32
- 1989年
- 17株针对流行性出血热病毒(EHFV)L99株和C4株核蛋白(50kd)的单克隆抗体(McAb),根据抗原性分析可分为组特异性、型特异性(野鼠型或家鼠型),以及反应谱不全的亚组特异性McAb。这表明,在EHFV核蛋白上不仅有组特异性抗原决定簇,而且有型特异性抗原决定簇,采用竞争性酶联免疫吸附试验,以亲和层析纯化的核蛋白傲为抗原,用这些McAb分析L99株和C4株核蛋白的抗原位点,在两株病毒核蛋白上各发现了至少7个共有的位点,3个野鼠型和两个家鼠型病毒特有的位点,组特异性抗原位点至少分布在两个独立的区域,其构象和分布在不同毒株表现不尽相同,无论野鼠型或家鼠型病毒,其型特异性抗原位点均较集中在一个独立区域内。
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- 关键词：出血热病毒位点分析
- 肾综合征出血热病毒核蛋白在大肠杆菌中表达及其产物的初步应用被引量：20
- 1996年
- 为了高效表达肾综合征出血热病毒核蛋白，并将其应用于该病的血清学诊断中，利用聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增了７６－ｌｌ８株病毒核蛋白编码基因并除去了非编码区基因，将编码基因正确插入表达载体ＰＢＶ２２０，经ＥＬＩＳＡ检测和蛋白免疫印迹分析，结果核蛋白得到了有效表达，表达的核蛋白占菌体总蛋白的７．５％。利用尿素变性的表达核蛋白做包被抗原，建立了检测患者血清中抗ＨＦＲＳＶ核蛋白抗体ＩｇＧ和ＩｇＭ的间接ＥＬＩＳＡ方法，提示该方法特异、稳定且敏感性较好，其优点在于简便、快速，适合于基层应用。
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- 关键词：肾综合征出血热病毒核蛋白大肠杆菌ELISA
- 聚合酶链式反应技术在肾综合征出血热病毒基因分型中的应用被引量：42
- 1994年
- 用聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法对２５株国内外病毒进行分型。病毒ＲＮＡ逆转录成ｃＤＮＡ后，用Ⅰ型（ＨＡＮ）和Ⅱ型（Ｒ２２）两种分型引物进行体外扩增。产物经凝胶电泳、核苷酸序列分析和打点杂交等技术证实其特异性。结果表明，Ⅰ型引物仅扩增野鼠型病毒ｃＤＮＡ；Ⅱ型引物也只扩增家鼠型病毒，无交叉反应。扩增片段的大小与预计一致。两种引物和探针可将２５株病毒明确地分为两种基因型，与血清学分型结果完全吻合。
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- 关键词：肾综合征出血热病毒PCR基因
- 汉坦病毒抗原性差异及其基因分型被引量：11
- 1995年
- 用抗汉坦病毒单克隆抗体（ＭｃＡｂ）对汉坦病毒Ｂ７８株（来自病人血）和Ｒ１７８株（分离自褐家鼠）进行间接免疫荧光试验，以分析病毒的单克隆抗体反应谱，又用病毒免疫血清进行交叉中和试验，结果表明，两株病毒均具有双型（Ⅰ型／ＨＴＮ型和Ⅱ型／ＳＥＯ型）反应特征，但Ｒ１７８株基本上属于Ⅰ型。用汉坦病毒Ⅰ－Ⅳ型型特异性引物进行ＰＣＲ扩增，Ｂ７８株用Ⅰ型和Ⅱ型引物均得到特异性扩增，而Ｒ１７８株虽经重复扩增均未见特异性扩增片段。初步认为，Ｂ７８株和Ｒ１７８株可能是发生在宿主转换（野鼠→家鼠）过程中介于Ⅰ型和Ⅱ型之间的过渡型变异株，而这类双型病毒在自然界中可能比较常见。这对阐明汉坦病毒的变异规律及广谱抗原性毒株的研制具有一定的理论和实际意义。
- 柯正宋干杭长寿霍子威李盈盈
- 关键词：汉坦病毒抗原性变异基因分型
