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布鲁氏菌介导对细胞类泛素SUMO1表达影响的研究: 2013年; 为研究布鲁氏菌侵染细胞后对SUMO1表达的影响,本研究采用Ni柱亲和层析法纯化SUMO1蛋白,制备兔抗SUMO1多克隆抗体,布鲁氏菌M5-90和16M菌株分别侵染巨噬细胞后,通过免疫印迹方法和荧光实时定量方法分别检测细胞中类泛素SUMO1蛋白表达水平与mRNA转录水平。结果显示,表达并纯化了鼠源类泛素SUMO1蛋白,并制备了兔抗SUMO1多克隆抗体;布鲁氏菌M5-90和16M菌株侵染巨噬细胞后,SUMO1蛋白表达水平与mRNA转录水平在12 h内均呈现先上升后下降的趋势,M5-90菌株侵染4 h时SUMO1表达量最高(p<0.01),16M菌株侵染8 h时SUMO1表达量最高(p<0.01)。实验结果表明布鲁氏菌在侵染细胞时能够引起类泛素SUMO1表达的增强,对布鲁氏菌在宿主细胞中存活和细胞抗菌均起一定作用。; 监通陈创夫张辉张俊波张科李跃峰李蕊王讲德程婷婷; 关键词：多克隆抗体布鲁氏菌

脂多糖诱导绵羊肺泡巨噬细胞转录组分析和NK-Lysin、GM-CSF表达及生物学功能研究: 抗菌肽是一类含有半胱氨酸的阳离子肽,存在于多种生物中。能够抗革兰氏阴性菌、革兰氏阳性菌、真菌、原虫、病毒等多种微生物,是天然免疫反应的主要组成部分,是连接天然免疫和获得性免疫反应的纽带。　　抗菌肽能快速启动免疫系统,在机...; 李蕊; 关键词：脂多糖肺泡巨噬细胞 GM-CSF基因生物学功能; 文献传递

新疆部分地区鼠类无形体和埃立克体的调查及16srRNA序列分析被引量：15: 2013年; 目的调查新疆部分地区鼠类携带无形体和埃立克体的状况。方法对新疆博乐、石河子、乌鲁木齐3个地区捕获的鼠类(沙鼠、褐家鼠、田鼠)401份,采集肺脏、脾脏提取总DNA,通过巢式PCR扩增无形体和埃立克体16SrRNA片段并与GenBank中相应基因序列进行比对分析。结果在沙鼠样本中扩增到无形体和埃立克体16SrRNA片段,而在其它两种鼠类未扩增到目的片段,扩增片段经测序、比对后确定为Anaplasma phagocytophilum和Erhlichia chaffeenisis。在312份沙鼠检测样本中,检出无形体17份,占5.45%;埃立克体48份,占15.38%;无形体和埃立克体均检出12份,占3.84%。结论新疆地区存在无形体和埃立克体病原,其主要存在与荒漠和半荒漠地带生存的沙鼠中,新疆存在这两种病原的自然疫源地,而且两种病原可以共同存在于同一宿主动物。; 赵庆亮黄林杨霞孟庆龄李蕊陈鹏博段晓东盛金良; 关键词：无形体埃立克体鼠类

绵羊GM-CSF原核表达及蛋白功能检测: 2012年; 目的:构建GM-CSF原核表达载体,并诱导表达、纯化其蛋白。方法:将GM-CSF基因克隆至原核表达载体pET-32中,转化至BL21中,用智能蛋白质多维纯化系统(AKTAxpressTM)纯化目的蛋白,利用MTT法测定GM-CSF融合蛋白对绵羊外周血淋巴细胞的增殖活性。结果:成功获得了435bp的绵羊GM-CSF基因片段,诱导表达了35kDa融合蛋白GM-CSF,其纯度达95%以上,浓度达860mg/mL;通过MTT证明该融合蛋白对绵羊淋巴细胞具有增殖活性,其作用最明显的蛋白浓度是200μg/mL。结论:成功获得重组蛋白GM-CSF,该蛋白具有较好的生物活性,为免疫增强佐剂的开发奠定了基础。; 李蕊陈创夫盛金良张辉杨霞黄林刘志方王讲德监通李天森; 关键词：绵羊 GM-CSF 蛋白表达蛋白纯化

miRNA-125b在牛病毒性腹泻病毒感染MDBK细胞中诱导细胞凋亡的研究被引量：1: 2013年; 为研究miRNA-125b在致细胞病变牛病毒性腹泻病毒(cpBVDV)感染牛肾细胞(MDBK细胞)过程中诱导细胞凋亡的机制,本研究将cpBVDV感染MDBK细胞,并将构建的pcDNA-miR-125b转染MDBK细胞作为阳性对照。采用荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)检测细胞中miRNA-125b和B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)mRNA转录水平,通过流式细胞仪检测细胞凋亡率。检测结果显示,cpBVDV感染MDBK细胞12 h和24 h,细胞中miRNA-125b的转录水平分别为正常细胞对照组的2.01倍和3.85倍,Bcl-2 mRNA的转录水平分别为对照组的0.71倍和0.31倍;pcDNA-miR-125b转染MDBK细胞48 h后,Bcl-2 mRNA的转录水平为正常细胞对照组的0.42倍。细胞凋亡检测结果显示,cpBVDV感染MDBK细胞12 h和24 h,细胞的凋亡率分别为15.06%和36.43%;pcDNA3.1-miR-125b转染48 h,细胞的凋亡率为25.56%。结果表明miRNA-125b在cpBVDV感染MDBK细胞过程中能够通过抑制抗凋亡基因Bcl-2 mRNA转录水平从而诱导细胞产生凋亡。; 王讲德程婷婷陈创夫任艳张辉王远志李蕊李跃峰倪伟张俊波; 关键词：荧光定量RT-PCR 流式细胞仪

不同浓度脂多糖诱导绵羊免疫器官中NK-Lysin基因表达的研究被引量：5: 2014年; 为研究病原体侵染动物机体时抗菌肽NK-Lysin在机体反应过程中所起到的防御作用及作用机理,本研究通过实时荧光定量PCR检测NK-Lysin在脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)不同诱导条件下及不同免疫器官中的相对表达量,探讨绵羊抗菌肽NK-Lysin在免疫器官的生成和应答反应。构建目标基因NK-Lysin和内参基因GAPDH的克隆载体,绘制出标准曲线,检测NK-Lysin的表达量。结果显示,在LPS浓度为0.01、0.1、1、10μg/mL时,NK-Lysin mRNA表达量均在8h内达到最大值,NK-Lysin基因的表达量与LPS的浓度不存在正相关性;NK-Lysin mRNA在肩前淋巴结、脾脏及血液中均有不同程度的表达,脾脏中表达量与其他组织中的表达量相比差异极显著(P<0.01)。免疫器官能在较短时间内表达出抗菌肽NKLysin,使其参与机体先天性免疫应答反应。; 张殿卿李蕊陈鹏博赵庆亮张国奇李尤简盛金良; 关键词：实时荧光定量PCR 脂多糖免疫器官

新疆石河子地区绵羊嗜吞噬细胞无形体的检测和16S rRNA序列分析被引量：5: 2013年; 目的调查新疆石河子地区绵羊嗜吞噬细胞无形体感染状况以及分析其病原16S rRNA序列特征。方法在石河子地区采集羊血,提取DNA,巢式PCR扩增16S rRNA基因并与GenBank中相应基因序列进行比对分析。结果在109份羊血样本中,检测出阳性样本37份,阳性率为33.94%,检测出的16S rRNA(524bp)基因序列与部分GenBank中嗜吞噬细胞无形体16S rRNA基因序列同源性达99%。结论新疆石河子地区绵羊中存在嗜吞噬细胞无形体的感染。; 黄林段晓东孟庆龄李蕊赵庆亮盛金良; 关键词：绵羊 RRNA

新疆哈萨克绵羊MHCⅠ类基因第二、三外显子序列多态性分析被引量：3: 2013年; 为研究新疆中国哈萨克绵羊主要组织性抗原复合体Ⅰ类基因第二、三外显子的序列多态性,采用PCR和测序的方法对新疆伊犁地区36只哈萨克绵羊MHCⅠ类基因第二、三外显子进行了扩增和测序,并对序列进行了生物信息学分析。结果表明:哈萨克绵羊MHCⅠ类基因第二、三外显子序列具有丰富的多态性,碱基组成具有一定的不平衡性,并且经过了自然选择的作用,与数据库中牛的序列的进化分析显示了跨物种多态性。实验数据为深入研究绵羊MHCⅠ类基因的多态性及绵羊抗病新品种的选育提供理论依据。; 刘志方吴长新张辉李蕊郭吉星肖红冉陈创夫; 关键词：MHC 聚合酶链式反应基因多态性

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李蕊