杜斌
- 作品数：7 被引量：11H指数：2
- 供职机构：上海交通大学农业与生物学院上海市兽医生物技术重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金上海市科学技术委员会基础研究重点项目公益性行业(农业)科研专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学轻工技术与工程更多>>
- 环二腺苷酸(c-di-AMP)--细菌的一种新型第二信使被引量：4
- 2015年
- 环二腺苷酸(cyclic diadenosine monophosphate,c-di-AMP)是在细菌中新发现的一种第二信使分子,其参与调节多种生理功能,包括细菌的生长、细胞壁的代谢平衡以及细菌的致病力等。c-di-AMP除了在细菌中发挥作用外,它还可作为第二信使分子被真核宿主识别,激活先天性免疫应答。细菌细胞内c-di-AMP的代谢受二腺苷酸环化酶(diadenylate cyclase,DAC)和磷酸二酯酶(phosphodiesterase,PDE)的调控。本文综述了c-di-AMP的代谢途径、调控机制、受体蛋白、生物学功能以及未来的研究方向和应用前景。
- 杜斌孙建和
- 关键词：第二信使磷酸二酯酶
- 猪链球菌噬菌体SMP末端酶大亚基单位的活性研究被引量：1
- 2013年
- 末端酶(terminase)是dsDNA病毒包装过程中的必要功能蛋白,其大亚基单位在包装过程中往往行使全酶的作用,一般具有ATP酶活性和限制性内切酶活性。噬菌体SMP是猪链球菌2型的烈性噬菌体,本研究以SMP基因组为模板,扩增SMP末端酶大亚基单位基因(TlsSMP),构建pEASY-E1-Tls重组质粒,在大肠杆菌中诱导表达,并对TlsSMP融合蛋白进行活性检测。结果显示,末端酶大亚基单位在大肠杆菌中呈可溶性表达,具有ATP酶生物学活性,在pH7、23℃和Mg2+存在的条件下,其活性最强,其他金属离子如Ca2+、Mn2+和Co2+都对其有不同程度的抑制作用。本研究为进一步研究猪链球菌噬菌体的包装机制奠定基础。
- 毛紫微吉文汇杜斌邹绮严亚贤孙建和
- 关键词：猪链球菌噬菌体
- 猪链球菌2型噬菌体裂解酶的抗菌特性研究
- 猪链球菌2型是重要的人兽共患病原菌,临床菌株多呈严重耐药和多重耐药,应用抗生素治疗面临挑战.本研究基于生物信息学技术,在一株猪链球菌的基因组上发掘出原噬菌体编码的裂解酶基因,通过对该基因的扩增、克隆和原核表达,获得了具有...
- 吉文汇黄庆庆杜斌王恒安严亚贤孙建和
- 关键词：猪链球菌噬菌体裂解酶抗菌治疗
- 2种不同方法制备玉米赤霉烯酮单克隆抗体适配子的ssDNA文库的比较被引量：2
- 2013年
- 体外合成全长为71个碱基的随机ssDNA文库,采用SELEX技术,以玉米赤霉烯酮单克隆抗体为靶蛋白,微孔板为筛选介质进行筛选。通过对比不对称PCR法和生物素-链霉亲和素磁珠2种分离方法制备ssDNA文库的效果,确定了以生物素-链霉亲和素磁珠分离方法制备ssDNA为优选方法。ssDNA文库扩增为双链DNA(dsDNA)文库的PCR反应条件为:退火温度50℃,循环数20次。不对称PCR退火温度为50℃,最佳循环数为30次,引物Ⅰ与引物Ⅱ的比例为80∶1。此反应条件下,ssDNA文库PCR扩增的条带清晰、稳定、特异性高。生物素-链霉亲和素磁珠法为有效筛选特异性强的玉米赤霉烯酮单克隆抗体适配子的优选技术方案,为适配子SELEX筛选奠定基础。
- 邹绮王元凯毛紫微杜斌王恒安孙建和严亚贤
- 关键词：适配子SELEX
- 噬菌体在疾病治疗方面的应用及研究进展被引量：2
- 2011年
- 随着致病性细菌耐药性的加剧,以及患免疫抑制病的伴发症发生率增高,寻找有效的抗菌制剂已成为目前现代医学工程的紧急问题。在此背景下,关于噬菌体治疗的研究得到越来越广泛的关注。
- 杜斌
- 关键词：噬菌体疾病细菌耐药性免疫抑制病
- 猪链球菌2型c-di-AMP水解蛋白基因gdpP的表达与活性分析
- 2015年
- 为研究猪链球菌2型(Streptococcus suis serotype 2,SS2)环二腺苷酸(c-di-AMP)水解蛋白GdpP的生化特性,根据已公布的SS2中国强致病株98HAH33全基因组中的gdpP序列信息设计引物,以SS2强致病株HA9801基因组为模板,通过PCR方法克隆获得了SS2的c-di-AMP水解蛋白基因gdpP完整序列,其阅读框由1 965个核苷酸组成,编码654个氨基酸。应用大肠杆菌重组表达系统,表达、纯化了GdpP,进而分析了其体外生物活性,结果显示纯化的重组蛋白可以在体外水解c-di-AMP形成pApA。其水解酶活性在碱性环境条件下(pH 8.0)相对较强,而在酸性环境下(pH 6.0,6.5)未检测到活性;同时,水解酶活性还依赖于二价金属离子Mg2+、Mn2+以及Co2+的存在,且在Mn2+存在的条件下相对活性最强,而在Ca2+、Fe2+和Cu2+存在的条件下则均未表现出活性。上述结果为进一步深入研究c-di-AMP在猪链球菌2型中发挥的生物学功能奠定了基础。
- 杜斌孙建和
- 关键词：水解酶活性猪链球菌2型
- 高效广谱猪链球菌7型前噬菌体裂解酶的挖掘及活性研究被引量：2
- 2015年
- 【目的】噬菌体具有防控耐药性病原菌的抗菌应用潜力,但是有些病原菌噬菌体的获得非常困难,研究发现大多数病原菌存在前噬菌体(Prophage),且由前噬菌体编码的裂解酶(Endolysin)具有良好的抗菌应用前景,本研究将挖掘猪链球菌前噬菌体及其编码的裂解酶。【方法】通过对Gen Bank中登录的数株猪链球菌前噬菌体裂解酶的基因信息分析,挖掘出一株猪链球菌7型菌株前噬菌体编码的裂解酶,研究其生物学活性。以猪链球菌7型菌株7917的基因组为模板,采用PCR技术扩增获得裂解酶基因ly7917,将其克隆至质粒p ET28a(+)并转化大肠杆菌DH5α细胞,挑选基因序列正确的阳性克隆、抽提质粒、转化表达菌株大肠杆菌BL21,经IPTG诱导可高效表达裂解酶Ly7917。【结果】平板裂解试验结果显示Ly7917具有高效裂菌活性,能够裂解猪链球菌2型高致病力菌株HA9801;浊度递减试验结果显示该裂解酶能够高效裂解猪链球菌2型、7型、9型和马链球菌兽疫亚种参考株、金黄色葡萄球菌(包括耐甲氧西林金黄色葡萄球菌)等多种革兰氏阳性菌。【结论】基于前噬菌体挖掘的裂解酶Ly7917,具有高效广谱裂菌活性,为临床上利用裂解酶治疗耐药菌的混合感染提供了可能。
- 黄庆庆吉文汇杜斌程玉强孙建和
- 关键词：前噬菌体裂解酶猪链球菌金黄色葡萄球菌
