杨东
- 作品数：11 被引量：47H指数：4
- 供职机构：解放军第163医院更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划重庆市自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 小鼠肝脏细胞分离和原代培养技术研究进展被引量：3
- 2015年
- 肝脏是机体主要的消化、代谢器官,同时也是重要的免疫器官;获得肝脏细胞[肝细胞（hepatocytes,HCs）、肝血窦内皮细胞（liver sinusoidal endothelial cells,LSECs）、肝星形细胞（hepatic stellate cells,HSCs）和枯否细胞（kupffer cells,KCs）等]并进行成功的原代培养,将有助于为研究肝脏的生物学特性（药物代谢、免疫及生理功能等）和“人工肝”工程等提供实验工具和材料；故探索和研究肝脏细胞的分离和原代培养技术具有重要意义。
- 杨东刘鑫郑新川郑江
- 关键词：肝细胞细胞分离原代培养
- 白鲜皮生物碱抗内毒素活性的研究被引量：4
- 2012年
- 目的从中药白鲜皮中分离抗内毒素/脂多糖(endotoxin/lipopolysaccharide,LPS)的有效成分,对分离得到的成分进行定性鉴别和体内外抗LPS活性的研究。方法采用大孔吸附树脂、离子交换、聚酰胺和硅胶柱层析等方法从白鲜皮水煎液中分离有效成分,并以试管法进行定性鉴别;在体外,以动态浊度法检测该成分对LPS的中和作用;ELISA法检测其对LPS刺激RAW264.7细胞释放肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及白细胞介素-6(IL-6)的影响;在体内,观察该成分对热灭活大肠埃希菌攻击小鼠的保护实验。结果从白鲜皮中分离得到具有抗LPS作用的生物碱类成分BXP-A。体外实验结果显示,BXP-A(0.5～1.0 mg/L)可抑制LPS(0.2μg/L)介导的鲎试剂的凝结反应(P<0.05);BXP-A(100～200 mg/L)可显著抑制LPS(100μg/L)诱导RAW264.7细胞释放TNF-α及IL-6(P<0.05,P<0.01);BXP-A(40 mg/kg)可提高注射热灭活大肠埃希菌(1.3×1011CFU/kg)攻击小鼠存活率约40%。结论 BXP-A在体外能较好地中和LPS并抑制其诱导的炎症细胞因子释放,对热灭活大肠埃希菌攻击所致脓毒症模型小鼠具有保护作用。
- 杨东张瑛郑新川刘鑫鲁永玲郑江
- 关键词：白鲜皮内毒素细胞因子脓毒症
- 黄芩抗内毒素活性物质的分离提取与活性研究被引量：10
- 2008年
- 目的从黄芩中提取具有拮抗内毒素（LPS）活性的物质。方法采用大孔吸附树脂和高效液相色谱（HPLC）等技术将黄芩水提物分离成若干组分，应用生物传感器技术检测各组分与LPS的活性中心LipidA的结合活性，动态比浊法鲎试验检测各组分（2．0mg／L）对LPS（0．2μg／L）的中和作用，籍此筛选出活性组分；逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）检测所筛组分对LPS诱导的RAW264．7细胞的Toll样受体4（TLR4）mRNA表达的影响，ELISA法检测所筛组分对LPS（100μg／L）刺激的RAW264．7细胞释放肿瘤坏死因子α（TNF-α）的影响。结果获得5种HPLC产物S3K1-5，其中S3K1与LipidA结合活性最高，S3K1（2．0mg／L）可显著抑制LPS（0．2μg／L）介导的鲎试剂的凝结反应（P〈0．05）；以LPS（100μg／L）刺激RAW264．7细胞，其TLR4mRNA表达增强，给予40、80、160mg／L的S3K1预处理后能减弱LPS诱导RAW264．7细胞的TLR4mRNA表达（P〈0．05）；单纯LPS刺激RAW264．7细胞释放的TNF-α为（1757．61±207．25）ng／L（对照组），给予40、80、160mg／L的S3K1预处理后TNF-α浓度依次为（1324．53±149．73）、（893．87±140．77）、（799．97±124．21）ng／L，随S3K1剂量递增而减低，均显著低于对照组（P〈0．05）。结论从黄芩中提取到具有拮抗LPS活性的组分S3K1，S3K1在体外对LPS具有一定的中和作用，可抑制LPS诱导的RAW264．7细胞的TLR4mRNA表达，进而抑制LPS诱导的RAW264．7细胞活化。
- 伏建峰曹红卫王宁刘鑫杨东郑新川鲁永玲郑江
- 关键词：黄芩内毒素生物传感器大孔吸附树脂
- 栀子拮抗细菌脓毒症有效成分京尼平苷的研究被引量：10
- 2009年
- 目的：脓毒症是感染因素介导的全身炎症反应综合征，是烧伤、创伤和感染性疾病患者的常见并发症，其中内毒素（LPS）是介导细菌脓毒症的重要病原体相关分子模式。重组人活化蛋白C作为FDA批准的第一个用于治疗重度脓毒症的药物，经过6年的应用评估，其疗效已被否定，迄今脓毒症治疗仍缺乏有效药物。本文通过从中药栀子中提取分离具有中和LPS作用的有效成分京尼平苷，研究其拮抗细菌脓毒症的活性。方法：以LPS活性中心LipidA为靶点，采用生物传感器技术，从传统清热中药中筛选出具有LipidA结合活性的栀子，进而利用现代色谱技术分离出具有拮抗LPS活性的单体京尼平苷，通过鲎试剂法检测京尼平苷对LPS的体内外中和作用；RT-PCR法检测京尼平苷对LPS诱导巨噬细胞TLR4和TNF—αmRNA表达的影响；ELISA法检测京尼平苷对LPS刺激RAW264．7细胞产生细胞因子（TNF—α）的抑制作用；观察京尼平苷对脓毒症模型小鼠的保护作用。结果：京尼平苷在体外对LPS具有直接的中和作用，并呈现出较好的剂量效应关系：同时可剂量依赖的抑制LPS刺激引起的RAW264．7细胞的活化（TLR4和TNF-αmRNA的表达下调，细胞因子TNF-α的产生减少）；在体内可降低LPS血症模型动物血中的LPS水平；对致死剂量热灭活大肠埃希氏菌攻击的小鼠具有显著的保护作用。
- 郑新川杨东刘鑫王宁李斌曹红卫鲁永玲卫国周红郑江
- 关键词：细菌脓毒症京尼平苷TNF-ΑMRNARAW264.7细胞栀子重组人活化蛋白C
- 栀子拮抗细菌脓毒症有效成分京尼平苷的研究
- 目的:脓毒症是感染因素介导的全身炎症反应综合征,是烧伤、创伤和感染性疾病患者的常见并发症,其中内毒素(LPS)是介导细菌脓毒症的重要病原体相关分子模式。重组人活化蛋白C作为FDA批准的第一个用于治疗重度脓毒症的药物,经过...
- 郑新川杨东刘鑫王宁李斌曹红卫鲁永玲卫国周红郑江
- 文献传递
- 栀子拮抗细菌脓毒症有效成分京尼平苷的研究
- 郑新川郑江杨东刘鑫王宁李斌曹红卫鲁永玲卫国周红
- 栀子抗内毒素组分的制备及活性初步分析被引量：6
- 2008年
- 目的从中药栀子中提取抗内毒素（lipopolysaccharide，LPS）的有效成分并进行活性初步分析。方法运用大孔树脂AB-8、聚酰胺树脂、萃取技术及高效液相色谱分离技术对栀子水提物进行分离；通过测定他与lipid A的结合强弱对分离过程进行跟踪，获得粗组分D，经过HPLC技术进一步获得与lipid A有较强结合活性的组分CJ-1；动态比浊法鲎试验检测组分CJ-1在不同浓度（0．5、1、2mg／L）对LPS（0．2μg／L）的中和作用；ELISA法检测CJ-1组分对LPS（100μg／L）刺激RAW264．7细胞释放肿瘤坏死因子-α（TNF—α）的影响。结果从中药栀子中逐步分离出与lipid A结合活性较高的组分CJ-1，当CJ-1浓度为0．2g／L时，RU值为112arc／s；CJ-1浓度为0．5～2．0mg／L时，对0．2μg／L LPS介导的鲎试剂的凝结反应具有显著的抑制作用（P〈0．01，P〈0．05），并呈剂量效应关系；CJ-1浓度为50～200mg／L时，对100μg／L的LPS介导的RAW264．7细胞释放TNF—α具有显著的抑制作用（P〈0．01，P〈0．05），并呈剂量效应关系。结论依靠lipid A为靶点指导中药栀子水煎液分离，从中分离提取出与lipid A的结合作用较强的组分CJ-1，CJ-1在体外对LPS具有一定的中和作用。
- 杨东曹红卫伏建峰王宁刘鑫郑新川鲁永玲郑江
- 关键词：栀子生物传感器内毒素类鲎试验
- 地骨皮提取物CL-5拮抗内毒素的实验研究被引量：8
- 2008年
- 目的观察地骨皮提取物（CL-5）对内毒素（LPS）的体内外拮抗活性。方法应用生物传感器技术检测CL-5与LPS的活性中心类脂A（Lipid A）的结合活性,ELISA法检测不同浓度CL-5（50、100、200mg/L）对LPS（100μg/L）刺激RAW264.7细胞释放肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的影响,进一步观察不同剂量（30、60、90mg/kg）的CL-5对致死剂量热灭活大肠杆菌（E.coil）攻击小鼠的72小时存活率。结果10～640mg/L的CL-5,特异性结合值（RU）为36.5～481.2arc/s,随CL-5浓度递增而升高;单纯LPS刺激RAW264.7细胞（对照组）释放的TNF-α为（2 479.03±61.43）ng/L,给予50、100、200mg/L CL-5预处理后TNF-α浓度依次为（2 210.29±70.95）、（1 998.27±111.24）、（1 423.28±86.35）ng/L,随CL-5剂量递增而减少,均显著低于对照组（P〈0.05）;以1.30×1011CFU/kg热灭活E.coil攻击小鼠（对照组）72小时动物死亡率为100%,而以30、60、90mg/kg CL-5处理后,小鼠72小时存活率分别为50%、60%和80%,随CL-5注射剂量的增加而升高,均显著高于对照组（P〈0.05）。结论CL-5与Lipid A有一定的结合活性,可抑制LPS诱导的RAW264.7细胞活化,并对致死剂量热灭活E.coil攻击的小鼠具有保护作用。
- 伏建峰曹红卫龙宇鹏王宁刘鑫杨东鲁永玲郑江
- 关键词：内毒素地骨皮脓毒症
- 黄芩抗内毒素组分的制备及其生物学活性研究被引量：4
- 2008年
- 目的:研究从黄芩中分离提取拮抗内毒素(LPS)组分的制备方法及其生物学活性。方法:采用大孔吸附树脂AB-8将黄芩水提物分离成若干组分,应用生物传感器技术检测各组分与LPS的活性中心LipidA的结合活性,ELISA法检测各组分对LPS刺激RAW264.7细胞释放肿瘤坏死因子α(TNF-α)的影响;由此筛选出能与LipidA结合并对LPS刺激的RAW264.7细胞活化具有抑制作用的组分,进一步观察所得组分对脓毒血症模型动物的保护作用。结果:采用大孔吸附树脂AB-8从黄芩中共分离到5种组分(SbG-1～5),其中SbG-4、SbG-5与LipidA具有较高结合活性,特异性结合值(RU)分别为113.36arc/s、73.75arc/s;SbG-4、SbG-5(100mg/L)可显著抑制LPS(100μg/L)诱导的RAW264.7细胞释放TNF-α(P<0.05);SbG-4能显著提高热灭活大肠杆菌(1.33×1011CFU/Kg)所致脓毒血症小鼠的72h存活率(P<0.05),并呈剂量效应关系。结论:从黄芩中分离提取的具有拮抗LPS活性的SbG-4可抑制LPS刺激的RAW264.7细胞活化,并对脓毒血症模型动物具有显著的保护作用。
- 伏建峰曹红卫王宁刘鑫杨东鲁永玲郑江
- 关键词：抗内毒素生物学活性INFLAMMATORY全身性炎症反应综合征多器官功能障碍综合症黄芩
- 栀子拮抗细菌脓毒症有效成分的研究
- 目的探讨从中药栀子中提取分离具有中和LPS作用的有效成分,研究其拮抗细菌脓毒症的活性。方法以LPS活性中心lipidA为靶点,采用生物传感器技术,从传统中药中筛选出具有lipidA结合活性的栀子,采用现代色谱分离技术分离...
- 郑新川周红杨东刘鑫王宁曹红卫鲁永玲卫国郑江李斌
