杨柳
- 作品数：13 被引量：24H指数：3
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所更多>>
- 发文基金：中央级公益性科研院所基本科研业务费专项国家自然科学基金国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 原核系统表达的鸡白细胞介素-10的鼠抗血清体内研究的初步分析
- 2017年
- 目的获得鸡白介素-10(chIL-10)的原核表达产物,制备鼠抗血清,分析与真核系统表达的chIL-10的反应原性。方法采用RT-PCR从经脂多糖(LPS)体外刺激的鸡外周血淋巴细胞中扩增编码成熟IL-10的基因,克隆至原核表达载体pET-30a(+),成功构建原核重组质粒pET-chIL-10;转化至大肠杆菌DH5α中IPTG诱导表达,切下含有重组蛋白的SDS-PAGE胶条,免疫制备鼠抗血清;分别与包含信号肽和去除信号肽的chIL-10真核表达细胞系CHO-euchIL-10F和CHO-euchIL-10M进行间接免疫荧光抗体试验(IFA)和蛋白免疫印迹试验(Western blot),验证有无反应性。结果成功构建chIL-10的原核表达载体pET-chIL-10,获得了高效价的鼠抗血清,能与表达chIL-10的真核细胞系反应。结论原核表达的chIL-10特异性鼠抗血清将能用于体内研究的检测。
- 王丽廷王兴童杨柳彭蔚宇孟兴陈洪岩高文伟韩凌霞
- 关键词：原核表达
- 白细胞介素-10研究进展被引量：7
- 2012年
- 白细胞介素10(IL-10)是一种由多种细胞产生的免疫调节性细胞因子,主要生物学功能是限制和终止炎症反应,调控免疫细胞的分化和增殖。其对肿瘤的影响具有两面性,具较好的应用前景。论文就IL-10的生物学特性、在肿瘤模型中的作用研究进展做一综述。
- 杨柳李一经韩凌霞
- 关键词：细胞因子白细胞介素-10生物学特性肿瘤模型
- 实验用巴马小型猪的遗传多样性研究被引量：1
- 2013年
- 为了研究屏障环境下小规模保存实验用巴马小型猪的遗传学背景,试验运用19个微卫星基因座,对长期在屏障环境下封闭饲养的同世代、同父本但不同母本的3窝巴马小型猪(BM/HVRI猪)进行分子群体遗传学检测,计算平均等位基因数(Na)、平均观察杂合度(Ho)和平均期望杂合度(He),检验Hardy-Weinberg平衡并进行遗传分化分析。结果表明:该群体的Na、Ho和He分别为3.05±0.71,0.703 7±0.019 2和0.574 6±0.023 1,3窝仔猪的He分别为0.558 3±0.029 3,0.552 0±0.037 3和0.549 2±0.030 8,且差异不显著(P>0.05);经完全枚举法检验,A窝和C窝分别有3个和5个基因座偏离Hardy-Weinberg平衡;经U检验,A窝和C窝分别有4个和6个基因座存在杂合子过剩,仅C窝1个基因座表现出杂合子缺失现象。说明该猪群遗传多样性较低,处于低度杂合状态,窝系之间不存在遗传分化。
- 武永淑张海燕杨柳杨超李海超廉传江韩建林曲连东韩凌霞
- 关键词：屏障环境
- MHC-B单倍型BW/G系鸡群同种异型抗血清的制备及应用被引量：3
- 2013年
- BW/G(n)系鸡群是主要组织相容性复合体核心区纯合的SPF鸡群,包括BW/G1、BW/G2、BW/G3、BW/G5、BW/G6和BW/G76个亚系,分别属于B13、B15、B2、B5、B21、B19单倍型。本研究以BW/G(n)系鸡的外周血红细胞作为免疫原,静脉接种其它不同单倍型鸡,制备了同种异型高免抗血清。参照经典的鸡血型鉴定方法,初步建立了单倍型鸡血型鉴定红细胞凝集方法,B13、B15、B5、B21、B2和B19的同种异型抗血清血凝效价分别为1∶80、1∶80、1∶40、1∶20、1∶16和1∶32,利用PCR对24只鸡的BF基因外显子2和3进行测序,确定其中22只为B5/B15杂合、2只为B15/B15纯合。利用制备的B15和B5抗血清分别对这24只鸡进行血凝试验,结果表明:B15抗血清与B5/B15个体的血凝效价为0～1∶160,与B15/B15个体的血凝效价分别为1∶80和1∶160;B5抗血清与B5/B15个体的血凝效价为1∶40～1∶80,与B15/B15个体的血凝效价分别为1∶10和1∶20。本研究制备的6种MHC单倍型鸡同种异型抗血清,为鸡的血型鉴定及免疫遗传基因纯合个体的筛选提供了物质基础。
- 杨柳高彩霞武永淑李海超杨超廉传江韩凌霞
- 去除信号肽有利鸡白细胞介素-10在真核细胞胞浆的积聚
- 目的 分析鸡白细胞介素10(chicken interleukin-10,chIL-10)的信号肽对体外表达的影响,获得稳定表达chIL-10的细胞系.方法 采用RT-PCR方法从经脂多糖(LPS)体外刺激的鸡外周血淋巴...
- 韩凌霞杨柳彭蔚宇王丽廷王兴童陈洪岩
- 关键词：信号肽真核表达CHO-K1细胞
- 鸡MHC Ⅰ类分子的多抗制备及其在不同MD抗性MHC单倍型鸡脾脏中的差异表达被引量：3
- 2012年
- 目的制备能检测不同MHC-B单倍型MHC I类蛋白的多抗血清,并对马立克氏病(MD)抗性较强的BW/G3系鸡群(MHC B2单倍型)和敏感性较强的BW/G7系鸡群(B19单倍型)接种马立克氏病毒(MDV)后,利用Western blot技术半定量分析MHC I类蛋白表达量的差异。方法从BW/G3系鸡脾组织cDNA中PCR扩增BF基因的保守序列第4～8外显子,克隆入原核表达载体pET-30a,构建重组质粒。转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导获得表达,经SDS-PAGE初步纯化,免疫新西兰兔,制备兔抗血清。以高效价的兔抗血清为一抗,对BW/G3和BW/G7系健康鸡和MDV攻毒后11周的脾组织进行Western blot,利用ImageQuant 5.2软件半定量分析其中MHC Ⅰ类蛋白含量的变化。结果含BF部分基因的重组质粒在大肠杆菌中表达,其特异性兔抗血清能检测到不同MHC-B单倍型鸡的MHC Ⅰ类蛋白。BW/G3和BW/G7系鸡群感染MDV后,MHC Ⅰ类蛋白含量全部上调,正常组和攻毒组中BW/G7系的表达量均极显著高于BW/G3系(P≤0.01,P≤0.001)。结论成功制备了能检测MHC B2、B6和B19单倍型鸡的MHC I类蛋白特异性多抗血清;MDV攻毒后期,抗性鸡BW/G3和敏感鸡BW/G7脾组织中MHC I类蛋白的表达量都发生上调,且易感鸡中的表达量高于抗性鸡,为进一步揭示病毒性肿瘤病的致病机理提供了思路。
- 高彩霞李行杨柳武永淑蔡文博张伟韩建林韩凌霞
- 关键词：MHC
- 去除信号肽有利鸡白细胞介素-10 在真核细胞胞浆的积聚
- 目的分析鸡白细胞介素10(chicken interleukin-10,chIL-10)的信号肽对体外表达的影响,获得稳定表达chIL-10的细胞系。方法采用RT-PCR方法从经脂多糖(LPS)体外刺激的鸡外周血淋巴细胞...
- 韩凌霞杨柳彭蔚宇王丽廷王兴童陈洪岩
- 关键词：信号肽真核表达CHO-K1细胞
- 鸡BLB重组蛋白的原核表达及多抗制备被引量：1
- 2012年
- 为分析鸡主要组织相容性复合体(MHC)II类抗原β亚基BLB蛋白在鸡脾脏中的表达情况,本研究采用RT-PCR技术从鸡脾细胞中扩增了BLB基因的保守区第3外显子的部分序列,大小约为380 bp。将其克隆于表达载体pET-30a(+)中。在大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达,获得大小约为19 ku以包涵体形式存在的His-BLB重组蛋白。切取含有重组蛋白的SDS-PAGE胶免疫实验兔,获得抗血清。以制备的血清通过western blot在鸡脾脏中检测到MHC II类分子特异性条带,其大小约为28 ku,与BLB天然蛋白的大小相符合。本研究为进一步分析MHC-II类分子在鸡体内的蛋白表达水平提供了依据。
- 李行高彩霞蔡文博杨柳武永淑张伟韩凌霞
- 鸡IL-10原核表达抗血清用于体内实验的初步分析
- 目的 获得鸡白介素-10(chIL-10)的原核表达产物,制备鼠抗血清,分析与真核系统表达的chIL-10 的反应原性.方法 采用RT-PCR 从经脂多糖(LPS)体外刺激的鸡外周血淋巴细胞中扩增编码成熟IL-10 的基...
- 韩凌霞杨柳彭蔚宇王丽廷王兴童陈洪岩
- 关键词：原核表达
- Th1和Th2型细胞因子在不同MHC-B单倍型鸡群中的转录分析被引量：7
- 2011年
- 目的研究鸡体内细胞因子的基础转录水平。方法利用双重荧光定量RT-PCR(dqRT-PCR)技术,对70日龄的5种主要组织相容性复合体(Major histocompatablity complex,MHC)单倍型无特定病原体(special pathogen free,SPF)鸡群G1、G2、G3、G5和G7的肺组织(包括气管)、胸腺、法氏囊、脾脏和外周血淋巴细胞(PBL)中Th1型(IFN-γ、IL-18)和Th2型(IL-4、IL-10)细胞因子mRNA含量进行定量检测。结果 IFN-γ和IL-4在各鸡群的胸腺中转录水平最高,IL-18和IL-10在法氏囊中最高,Th2型细胞因子在脾脏中最低;初级免疫器官(胸腺、法氏囊)中IFN-γ和IL-10转录水平在G3鸡群中最高。结论 70日龄时Th1型和Th2型细胞因子在SPF鸡的初级免疫器官中转录水平较高,且为制衡状态,胸腺中表现为IFN-γ和IL-4相互制衡,法氏囊中为IL-18与IL-10;不同MHC单倍型鸡体内细胞因子转录水平有所差异,但未达到显著水平。
- 蔡文博李行高彩霞武永淑杨柳张伟韩凌霞
- 关键词：MHC细胞因子
