杨柳
- 作品数：29 被引量：34H指数：4
- 供职机构：江苏省农业科学院更多>>
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- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 江苏省葫芦科作物6种病毒的多重RT-PCR方法及应用被引量：5
- 2015年
- 江苏省葫芦科作物上的病毒主要有小西葫芦黄花叶病毒（ZYMV）、西瓜花叶病毒（WMV）、黄瓜花叶病毒（CMV）、黄瓜绿斑驳花叶病毒（CGMMV）、烟草花叶病毒（TMV）和番木瓜环斑病毒（PRSV），通常发生复合侵染。基于GenBank中这6种病毒的核苷酸序列保守区设计特异性引物，在单重RT-PCR技术的基础上，通过对影响2种多重RT-PCR扩增的DNA聚合酶浓度、dNTPs及镁离子浓度、退火温度、延伸时间、循环次数等因素进行优化，对检测灵敏度进行测定，建立了2种PCR反应同时检测葫芦科作物上6种病毒的多重RT-PCR方法。结果显示：2种多重RT-PCR体系均能同时扩增出各自特异性片段，测序分析结果表明序列同源性在97％以上：优化的2种多重RT-PC体系检测灵敏度为总RNA稀释10^2～10^3倍，应用于江苏省210份样品的检测结果与单重RT-PCR一致．体现了检测的可靠性；检测结果表明近年来江苏省葫芦科作物以种子传播的ZYMV和CGMMV侵染为主，病毒的复合侵染率达75．24％。
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- 关键词：葫芦科作物病毒多重RT-PCR
- 黄瓜绿斑驳花叶病毒CP基因克隆及亚细胞定位被引量：3
- 2018年
- 黄瓜绿斑驳花叶病毒(Cucumber green mottle mosaic virus,CGMMV)是瓜类作物上一种重要的病毒,近年来在中国多地陆续报道其危害,给西瓜、黄瓜等作物生产造成了惨重的损失。本研究选择2012年采自江苏洪泽的CGMMV西瓜分离物为研究对象,经克隆和序列测定显示其CP基因全长486 bp,编码一个17 500的蛋白质。为进一步研究其亚细胞定位特征,本研究构建了带有YFP荧光标签的重组表达载体CP-YFP,转化农杆菌后浸润接种本氏烟(Nicotiana benthamiana),激光共聚焦显微镜观察结果显示浸润处理后本氏烟叶片表皮细胞的细胞质及细胞核都有较强的绿色荧光信号,Western blot结果显示带荧光标签的CP在本氏烟叶片中表达正常。这些结果说明CGMMV编码的CP蛋白在细胞质和细胞核均有分布,为进一步研究其功能奠定基础。
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- 关键词：黄瓜绿斑驳花叶病毒外壳蛋白亚细胞定位
- 江苏省玉米小斑病菌的分离鉴定及致病力分析被引量：4
- 2020年
- 【目的】明确江苏省玉米小斑病菌的致病力水平,为玉米抗病品种选育及其田间合理布局提供指导,也为玉米小斑病的综合防治提供理论依据。【方法】采用常规组织分离法对采自江苏省东台、如东、丰县和东海4个市(县)的疑似小斑病玉米叶片进行单孢分离,显微镜下观察孢子形态;基于rDNA-ITS对分离菌株进行分子鉴定和系统进化分析;选用8个自交系玉米品种(Mo17、B73、丹340、罗31、掖478、齐319、昌7-2和掖107),采用喷雾接种法对分离菌株进行致病力测定。【结果】分别从江苏省东台、如东、丰县和东海4地各分离到1株菌株,依次标记为DT、RD、FX和DH,形态学观察发现分离菌株存在类似于玉米小斑病菌的孢子;以分离菌株的DNA为模板,PCR扩增得到550 bp左右的预期片段,测序分析发现其与玉米小斑病菌多个分离株序列的同源性达97%;结合分离菌株的形态学和分子鉴定,将分离菌株鉴定为玉米小斑病菌的江苏分离株。系统发育进化分析结果表明,东台分离株(DT)独立一枝,说明其来源较特殊。致病力分析结果显示,不同菌株间存在着明显的致病力分化,其中来自东台的菌株(DT)致病力最强;不同玉米品种在同一菌株上的抗感性差异较大,对玉米小斑病表现为抗病的有齐319和Mo17。【结论】可选用东台菌株(DT)作为江苏省玉米种质资源抗病性筛选的接种菌株,指导抗病品种的选育;可挖掘齐319和Mo17的抗病基因,为玉米小斑病抗病品种的选育提供材料。
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- 关键词：玉米小斑病菌单孢分离分子鉴定致病力
- 一种黄瓜绿斑驳花叶病毒双抗夹心ELISA检测试剂盒
- 本发明提供一种黄瓜绿斑驳花叶病毒的双抗夹心ELISA检测试剂盒。利用抗黄瓜绿斑驳花叶病毒单克隆抗体JSCG‑A3和抗黄瓜绿斑驳花叶病毒单克隆抗体JSCG‑A8‑H，经辣根过氧化物酶标记与配对，建立了检测该病毒的双抗夹心E...
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- 文献传递
- 一种高通量玉米粗缩病人工接种鉴定方法的建立及应用被引量：2
- 2018年
- 以独创的水稻黑条矮缩病毒室内活体保存技术为基础,研究玉米接种苗龄、接种时间、接种强度对人工接种鉴定效果的影响。结果表明,在接种苗龄芽鞘期,以0.1-0.9头/株接种强度、接种49-72 h的鉴定效果最佳,此条件下,感病品种苏951的病情指数为83.33-95.83,与田间鉴定效果无显著差异,表明鉴定结果可靠,以此建立一种高通量玉米粗缩病人工接种鉴定方法。应用该方法鉴定种衣剂对玉米粗缩病的防效、评价新育品种对玉米粗缩病的抗性,均得到较为准确结果。该方法克服了自然接种的不稳定性,在接种规模上实现突破,大大节约试验成本。
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- 关键词：玉米玉米粗缩病水稻黑条矮缩病毒人工接种鉴定
- 黄瓜绿斑驳花叶病毒的双抗夹心ELISA检测被引量：7
- 2018年
- 为建立快速、灵敏、准确且易操作的黄瓜绿斑驳花叶病毒(CGMMV)检测方法以实现早期诊断与控制病害,制备了8株效价大于1×10^(-7)的单克隆抗体,配对筛选结果表明经辣根过氧化物酶标记的A8H与单抗A3配对检测的灵敏度最高,并据此创制了双抗夹心ELISA试剂盒。该试剂盒对CGMMV具有特异反应,灵敏度达1∶12 800(g∶ml),准确度与RT-PCR结果吻合,检测周期小于5 h,可用于生产上病害发生初期的快速诊断与鉴定。
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- 关键词：单克隆抗体
- 江苏省主要葫芦科作物病毒种类及分布被引量：5
- 2022年
- 葫芦科作物在江苏省蔬菜作物生产中具有重要的地位。为明确江苏省葫芦科作物上主要病毒的种类和分布,本研究于2019年6月-2020年11月在江苏省内7个地区的7种葫芦科作物上共采集了693份样品,采用分子生物学方法对样品进行了检测鉴定。结果共检出9种病毒,以马铃薯Y病毒属病毒最为常见,其中小西葫芦黄花叶病毒(ZYMV)在各地区的检出率最高,在各个物种中的检出率也较高。检测结果还显示,在各个地区的各种作物上普遍存在复合侵染现象,复合侵染中病毒种类最多达4种,ZYMV和西瓜花叶病毒(WMV)的复合侵染率最高。本研究结果有助于了解江苏省内葫芦科作物病毒病的发生情况,为有效预防和控制病毒病害的发生和传播提供理论依据。
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- 关键词：葫芦科作物植物病毒
- 一种用于检测CGMMV的金标速测卡及其制备方法
- 本发明公开了一种用于检测CGMMV的金标速测卡及其制备方法，其中金标速测卡包括外壳以及检测卡；壳体上设置有观察窗以及加样孔；检测卡包括底板、样品垫、标记垫以及硝酸纤维素膜；标记垫上涂覆有探针一，探针一由胶体金标记；硝酸纤...
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- 文献传递
- 马铃薯miR482在响应黄萎病菌侵染中的作用机理
- 黄萎病( Verticillium wilt)是一种世界性的土传真菌性病害,在包括棉花、茄子、马铃薯等许多重要经济作物上均有发生,并且危害日益严重,但目前对该病的致病机理还不完全了解.在我国,黄萎病主要由大丽轮枝菌(Ve...
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- 关键词：NBS-LRRSRNA马铃薯大丽轮枝菌黄萎病
- ToMMV病残体中病毒存活力及其传病作用
- 2024年
- 因番茄斑驳花叶病毒(ToMMV)寄主范围广,传染性和致病力强,以ToMMV为对象,对其产生的植株病残体进行了病毒分布和存活时间检测、侵染活性分析以及传毒作用测试。结果表明:烟草植株病残体的叶、茎、根中均含有病毒,ToMMV可在病残体存活较长时间,病死枯叶室温存放90 d后病毒依然存在,且仍保持侵染活性,刀片刮划枯叶模拟农事操作接毒后发现病残体具有传毒作用;ToMMV可在病残体中长时间保持侵染活力,田间病残体很可能会成为下茬作物的初侵染源;土壤无直接传毒作用,但混有病残体的土壤也可成为初侵染源,且沾染在农具表面的离体病毒依然可以在一定时间内维持侵染活力,成为潜在的初侵染源。综上,清除植株病残体(减少初侵染源)是预防和控制ToMMV传播和扩散的重要环节,生产上应给予充分重视。
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- 关键词：病残体存活力
