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人IL-6/sIL-6R结合分子模型的建立及在药物筛选中的应用: 2009年; 目的:建立人IL-6/sIL-6R结合的分子模型,用于筛选IL-6/sIL-6R的抑制剂。方法:将人IL-6基因克隆至原核表达载体pET28a(+)中表达IL-6蛋白,Western blot及人IL-6检测试剂盒分析鉴定表达蛋白。同法将人sIL-6R在pET15b载体中表达,纯化并用Western blot检测目的蛋白。依据ELISA原理建立IL-6/sIL-6R结合的分子模型,并通过改变IL-6、sIL-6R及IL-6antibody的浓度来优化该模型,用于IL-6/sIL-6R拮抗药物的筛选。结果:人IL-6可在载体PET28a(+)中高效表达,且经Western blot鉴定正确,人IL-6检测试剂盒检测显示具有较高的免疫活性。sIL-6R在PET15b中表达,Western blot鉴定正确。通过对IL-6/sIL-6R结合的分子模型的优化,得到其最佳条件为:IL-6R1μg/well,IL-6500ng/well,IL-6antibody1μg/well。应用该模型筛选发现有些化合物可显著抑制IL-6与其受体的结合。结论:成功构建IL-6/sIL-6R结合的分子模型,为高通量筛选IL-6拮抗剂提供平台。; 史继静刘朝奇邹坤杨祖伟高明星杨凡; 关键词：IL-6 SIL-6R 蛋白表达 ELISA 药物筛选

在体外用ELISA方法建立的IL－6/sIL－6R结合的分子模型: 本发明涉及一种人白细胞介素－6(interluekin－6，IL－6)在原核细胞中的表达和采用ELISA方法建立的IL－6/sIL－6R(soluble interluekin－6receptor，sIL－6R)特异结合...; 刘朝奇王艳林邹坤柳长柏韩钰杨凡柳发勇高明星史继静杨祖伟; 文献传递

HIV-1 gp160多表位嵌合基因的构建及表达蛋白的免疫原性分析被引量：1: 2008年; HIV感染引起的AIDS已经成为严重影响人类健康和社会发展的全球性疾病。酶联免疫吸附试验和免疫印迹检验组合则被认为是HIV检测的"金标准"。构建了gp160的抗原多表位融合基因及在原核系统的高表达,为HIV抗体测定提供特异、价廉的抗原。选定HIV-1gp160基因中3个片段包含较多抗原表位的区域,设计带有酶切位点的引物,用PCR的方法从HIV-1HXB2全基因扩增编码这3个片段的基因序列,通过质粒提取、酶切、测序方法鉴定基因片段的正确性,SDS-PAGE和Western blot测定融合蛋白的抗原特异性。构建的HIV-1gp160多表位嵌合基因的原核表达质粒,酶切和测序结果表明基因序列正确,基因全长969bp。在大肠杆菌BL21(DE3)中高效表达的重组蛋白分子量为37kDa,以包涵体的形式存在。应用Western blot测定10例正常人和12例HIV/AIDS病人血浆显示HIV-1gp160多表位融合蛋白具有良好的抗原特异性。成功构建了高表达HIV-1gp160多表位蛋白的原核表达系统,纯化的融合蛋白有较强的抗原特异性。; 杨凡刘朝奇柳发勇余枫华杨春秀韩莉任东明张伟杨祖伟; 关键词：HIV-1 蛋白表达免疫原性免疫印迹

人IL-6基因的克隆及其在原核生物中表达及条件的优化被引量：6: 2010年; 构建人白细胞介素6(IL-6)的原核表达载体并优化其表达条件,为IL-6的高效表达提供试验依据。以人T细胞cDNA为模板通过PCR方法扩增IL-6基因,将其克隆到原核表达载体pET28a(+)中,酶切及测序鉴定重组体。将构建好的重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG进行诱导表达,产物用Western blotting及人IL-6检测试剂盒分析鉴定。在保持菌种不改变的前提下,分别改变IPTG的浓度、培养时间、卡那霉素浓度、培养温度等来优化IL-6表达条件。结果显示,原核表达载体pET28 a(+)-IL-6成功构建,可在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,得到相对分子质量约22 kD的IL-6蛋白,经Western blotting鉴定正确,经人IL-6试剂盒检测显示具有较高的免疫活性。在IPTG浓度400μmol/mL,卡那霉素浓度50μg/mL,40℃培养6 h的条件下,目的蛋白表达量最高,可占总蛋白表达量的40%。成功构建人IL-6原核表达载体且获高效表达,为研究IL-6生物学活性及产品开发提供了试验基础。; 史继静刘朝奇杨凡杨祖伟; 关键词：IL-6 原核表达

HIV-1 gp160多表位嵌合基因的构建及表达蛋白的免疫原性分析被引量：1: 2008年; 目的：HIV感染引起的AIDS已经成为严重影响人类健康和社会发展的全球性疾病。酶联免疫吸附试验和免疫印迹检验组合则被认为是HIV检测的“金标准”。因此本实验构建gp160的抗原多表位融合基因及在原核系统的高表达,为HIV抗体测定提供特异、价廉的抗原。方法：选定HIV-1 gp160基因中三个片段包含较多抗原表位的区域,设计带有酶切位点的引物,用PCR的方法从HIV-1HXB2全基因扩增编码这三个片段的基因序列,通过质粒提取、酶切、测序方法鉴定基因片段的正确性,SDS-PAGE和Western Blot测定融合蛋白的抗原特异性。结果：构建的HIV-1 gp160多表位嵌合基因的原核表达质粒,酶切和测序结果表明基因序列正确,基因全长969bp。在大肠杆菌BL21（DE3）中高效表达的重组蛋白分子量为37kDa,以包涵体的形式存在。结论：应用western blot测定10例正常人和12例HIV/AIDS病人血浆显示HIV-1 gp160多表位融合蛋白具有良好的抗原特异性。成功构建了高表达HIV-1 gp160多表位蛋白的原核表达系统,纯化的融合蛋白有较强的抗原特异性。; 杨凡刘朝奇柳发勇余枫华杨春秀韩莉任东明张伟杨祖伟; 关键词：HIV-1 蛋白表达免疫原性免疫印迹

在体外用ELISA方法建立的IL-6/sIL-6R结合的分子模型: 本发明涉及一种人白细胞介素-6(interluekin-6，IL-6)在原核细胞中的表达和采用ELISA方法建立的IL-6/sIL-6R(solubleinterluekin-6 receptor，sIL-6R)特异结合...; 刘朝奇王艳林邹坤柳长柏韩钰杨凡柳发勇高明星史继静杨祖伟; 文献传递

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杨祖伟