林洁
- 作品数：12 被引量：15H指数：2
- 供职机构：云南大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金云南省教育厅科学研究基金云南省自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生自动化与计算机技术农业科学更多>>
- 人CD24分子成熟多肽的原核表达及抗体制备
- 2011年
- 目的:为获得抗人CD24分子成熟多肽核心蛋白(hCD24N)的多克隆抗体。方法:制备CD24表达阳性的人肿瘤细胞cDNA,采用PCR法扩增hCD24N的编码基因,构建pGEX-KGV-hCD24N原核表达质粒;转化大肠杆菌BL21(DE3),乳糖诱导表达;经GST亲和柱层析、SDS-PAGE和Western blotting制备并鉴定纯化的GST-StraptagII-hCD24N融合蛋白;免疫新西兰大白兔制备抗血清并用rProtein A亲和柱层析纯化多克隆IgG抗体;用间接ELISA法测定抗体效价,Western blotting鉴定抗体特异性,同时采用细胞免疫荧光检测技术对抗体的特异性和应用可行性作进一步评价。结果:实现了hCD24N基因的克隆以及在原核细胞中的可溶性重组融合表达,得到了纯化后的目的融合蛋白,并以其为免疫原获得了效价高于1∶100 000的抗hCD24N多克隆抗体,Western blotting及细胞免疫荧光检测证明该抗体与当前市售的抗人CD24抗体具有相似的免疫反应特异性,并且能够与CD24阳性人肿瘤细胞表达并加工的高度糖基化CD24天然分子发生特异性抗原-抗体反应。结论:抗hCD24N多克隆抗体的成功制备为进一步以CD24分子为靶点的肿瘤生物学基础研究以及相关癌症的诊断试剂开发奠定基础。
- 林洁马岚张士煜管常东李旋吕琦
- 关键词：CD24基因克隆融合蛋白多克隆抗体
- 一种图像特征色提取方法及软件实现被引量：4
- 2007年
- 根据现场采集图像的特点,提出了一种图像特征色提取方法,设计和实现了特征色提取应用软件系统.讨论了色卡变形校正、颜色聚类、特征色提取等关键技术.对带有同步拍摄的专用色卡的数码相片进行处理,在综合考虑颜色面积、Lab均值和适当的阈值情况下实现图像中主要特征颜色的提取,给出了系统实现方案及实际效果.
- 陈天云余江赵东风林洁
- 关键词：色卡颜色聚类图像处理
- 噬菌体肽库筛选隐丹参酮高亲和性结合肽被引量：1
- 2013年
- 通过噬菌体十二肽库,以隐丹参酮为靶分子,筛选与隐丹参酮具有高亲和性的结合短肽。经过噬菌体十二肽库的3轮淘选,获得阳性噬菌体克隆,挑选结合力强的克隆进行测序,得到隐丹参酮的高亲和性结合短肽序列,并进行生物信息学分析。本试验共筛选到10个隐丹参酮的高亲和性结合短肽序列,有614种蛋白质与其结构相匹配。多肽序列的核心序列为VILDFGEI。本研究获得了与隐丹参酮结合的高亲和性多肽,为深入研究隐丹参酮的作用靶点以及分子作用机制提供了实验依据和结构基础。
- 龙军袁冬平陆茵林洁
- 关键词：隐丹参酮噬菌体肽库生物信息学
- 融合蛋白及其在制备人白血病抑制因子中的应用
- 本发明公开了一种融合蛋白及其在制备人白血病抑制因子中的应用。所述融合蛋白自氮端至碳端依次包括序列1自N端第1至110位氨基酸残基所示Trx蛋白、序列1自氮端第152至156位氨基酸残基所示肠激酶特异识别位点和序列1自氮端...
- 马岚林洁
- 文献传递
- 58型HPV E6蛋白的原核表达与分离纯化
- 2012年
- 宫颈癌是一种在女性人群中的常见肿瘤,严重威胁着女性的生理和心理健康;而人类乳头瘤状病毒(HPV)的长期感染是宫颈癌发生的主要诱因.因此,HPV病毒的研究对于我们了解和防治宫颈癌有着十分积极的意义.目前,国外的研究比较多的针对于16型和18型的HPV病毒;但是对于我国比较常见的58型HPV病毒却研究甚少.所以,本试验依据实验室现有的表达纯化平台和噬菌体展示多肽筛选平台,设计并构建了HPV58 E6蛋白的原核表达体系,并对E6重组融合蛋白进行了诱导表达.通过对表达获得的包涵体蛋白进行反复的洗涤、亲和层析以及复性等纯化步骤,得到了纯度较高的E6融合蛋白.
- 黄成铖林洁马岚
- 关键词：宫颈癌E6蛋白
- 一种基于均匀颜色空间的色彩量化聚类算法被引量：4
- 2007年
- 主要研究了将彩色图像重新量化为仅有几种颜色的色彩量化问题.将RGB非均匀颜色空间变换到CIE1976L*a*b*均匀颜色空间,并根据图像在L*a*b*颜色空间中的a*,b*取值范围来自动选取最初始的聚类中心,再通过K均值动态聚类算法和最近临准则得到最终的量化结果.实验结果表明,算法具有一定的实用性,量化效果也较为理想.
- 林洁余江陈天云
- 关键词：聚类分析
- 表达肿瘤抗原HPV-58E7的HLA-A^＊0201阳性宫颈癌细胞模型的构建和鉴定
- 2015年
- 为建立内源性表达58型人乳头瘤病毒(Huamn papillomavirus type 58,HPV-58)重要癌抗原E7蛋白的HLA-A*0201阳性人宫颈癌细胞模型.以HPV-58全基因组为模板,采用PCR法扩增E7蛋白的编码基因,构建真核表达载体p EGFP-N2-HPV58E7;转化大肠杆菌DH5α,通过DNA测序鉴定质粒载体;经除内毒素纯化后,将大量制备的重组质粒瞬时转染293T细胞,采用RT-PCR和细胞免疫荧光方法研究重组质粒在人源细胞中的表达情况;最后,选择HPV检出阴性的HLA-A*0201阳性人宫颈癌C33A细胞株为宿主细胞,采用脂质体转染、G418抗性加压筛选和细胞克隆化培养技术,建立能够稳定表达HPV-58 E7的恒定转染细胞株.采用RT-PCR、Western-blot和细胞增殖测定等方法从转录、翻译和表型等3个层次对所建细胞株进行鉴定研究.研究结果显示:克隆制备了HPV-58 E7蛋白的编码基因;构建获得了能够在人源细胞中表达HPV58E7-EGFP融合蛋白的真核表达质粒;并成功建立了能够稳定表达HPV-58 E7的HLA-A*0201阳性人宫颈癌细胞模型;核酸和蛋白水平的鉴定结果表明所建模型细胞能够表达HPV-58 E7癌抗原,宿主细胞本身表达的Ⅰ类组织相容性抗原HLA-A*0201有望通过内源性抗原加工途径将E7抗原的细胞毒性T细胞(Cytotoxic lyphocyte,CTL)表位提呈到细胞表面;另外,细胞增殖试验结果亦表明该细胞模型体现出E7蛋白显著的诱导细胞增殖的生物学特征.总之,能够稳定表达HPV-58 E7癌蛋白的HLA-A*0201阳性人宫颈癌细胞模型的建立为后续即将展开的以HPV-58 E7为靶标的宫颈癌治疗性疫苗和药物的寻找和研究奠定基础.
- 林洁李旋吕琦童亮张士煜邓双胜
- 烟草花叶病毒单克隆抗体的制备和鉴定被引量：1
- 2013年
- 经工程菌表达与纯化,得到了纯度95%以上的TMV-CP-F重组蛋白,配合提取的TMV天然病毒颗粒作为免疫原.通过杂交瘤技术获得了14株能分泌特异针对TMV外壳蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞株.经鉴定14株细胞所分泌的抗体亚类为IgG1型,抗体轻链均为κ型.经ProteinA一步法亲和层析纯化所得抗体经鉴定相对分子质量在149.36～157.23 ku之间,抗体纯度在80%以上.经间接ELISA测定,14株抗体均与TMV-CP重组蛋白和TMV病毒有良好特异性反应.所制备的抗TMV抗体的特异性高,可用于与其相关的免疫检测研究和应用.
- 吕琦吴峰林洁谭仲夏秦西云夏振远莫笑晗马岚
- 关键词：烟草花叶病毒单克隆抗体
- 58型人乳头瘤病毒E7蛋白单克隆抗体的制备及鉴定被引量：1
- 2012年
- 为获得抗58型人乳头瘤病毒(HPV58)E7蛋白的单克隆抗体,乳糖诱导重组工程菌表达HPV58 E7融合蛋白,以纯化后的该重组蛋白为免疫原,经细胞融合和有限稀释后,得到6株分泌抗HPV58 E7单克隆抗体(McAb)的工程细胞株,并采用体内接种方法及亲和柱层析纯化技术制备6株抗体.酶联免疫吸附测定(ELISA)、Western-blot实验和细胞免疫荧光检测结果表明,所得抗体均为IgG2a类,κ型,抗体效价均可达10-5,并且能够与原核及真核系统表达的HPV58 E7蛋白发生特异性抗原-抗体反应.该抗体的成功制备为后续HPV58 E7致癌生物学研究及相关肿瘤诊断试剂的开发奠定基础.
- 林洁张士煜吕琦赵洪彬李旋童亮马岚
- 关键词：单克隆抗体
- 58型人乳头瘤病毒L2蛋白的原核表达、纯化及单克隆抗体的制备被引量：2
- 2011年
- 目的原核表达并纯化我国高发的致宫颈癌58型人乳头瘤病毒(Human papillomavirus,HPV)次要衣壳蛋白L2,并制备其单克隆抗体。方法从含有HPV-58基因组的质粒pHPV58中扩增L2基因,插入改构的原核表达载体pGEX-KGV中,转化大肠杆菌BL21(DE3),乳糖诱导表达,透析复性并亲和层析纯化重组蛋白,采用杂交瘤技术制备单克隆抗体,并对其进行鉴定。结果重组表达质粒pGEX-KGV-HPV58 L2经双酶切和测序证明构建正确;表达的重组蛋白主要以包涵体形式存在,表达量可占菌体总蛋白的15.5%;纯化的重组蛋白纯度可达95%;共获得10株抗HPV-58 L2的高效价单克隆抗体。结论已成功原核表达、纯化了HPV-58 L2重组蛋白,并制备了单克隆抗体,为下一步HPV-58 L2蛋白抗原表位的研究以及相关预防性抗体药物和广谱重组疫苗的开发奠定了基础。
- 林洁吕琦童亮刘芳马岚
- 关键词：原核细胞基因表达蛋白质复性
