王宏俊 作品数:104 被引量:290 H指数:10 供职机构: 北京市农林科学院畜牧兽医研究所 更多>> 发文基金: 国家高技术研究发展计划 国家自然科学基金 公益性行业(农业)科研专项 更多>> 相关领域: 农业科学 生物学 医药卫生 更多>>
副猪嗜血杆菌外膜蛋白TbpB基因的克隆和表达 2011年 为了克隆和表达副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,HPS)外膜蛋白TbpB基因,试验采用基因工程的方法对已发布的HPS外膜蛋白P5序列进行相关序列分析,设计并合成引物,以HPS血清5型基因组为模板,通过PCR扩增HPS外膜蛋白P5编码基因,获得长为1 116 bp的预期基因片段。该基因编码372个氨基酸的蛋白质,预测分子质量约为41 ku,将该基因片段定向克隆至表达载体pGE X-6p-1中。结果表明:诱导表达后分子质量约为67 ku,与副猪嗜血杆菌阳性血清发生了特异性反应。说明该蛋白与抗体发生了反应,有一定免疫原性。 叶飞 张培君 田德雨 孙慧玲 王宏俊 龚玉梅 贺云霞关键词:副猪嗜血杆菌 克隆 一株B型副鸡禽杆菌的分离与鉴定 2012年12月,安徽某些蛋鸡养殖场出现大量鼻炎症状的病鸡,主要表现为眼结膜发炎,眼睑肿胀、流泪。一侧或两侧颜面肿胀。产蛋鸡产蛋量明显下降等临床症状的疾病。为探索该病病因及制定有效防治措施,笔者对病鸡样品进行了细菌学检验... 路迎迎 路明华 陈小玲 张培君 龚玉梅 王宏俊关键词:蛋鸡 鼻炎 副鸡禽杆菌 文献传递 副猪嗜血杆菌HigB和HigA基因的原核表达及功能分析 2016年 副猪嗜血杆菌属于条件性致病菌,可引起猪的格拉泽病,表现为多发性浆膜炎和关节炎。毒素抗毒素系统(TA)广泛存在于细菌中,其参与各种应激状态下的生理调节,利于机体适应复杂环境。克隆编码副猪嗜血杆菌的HigBA毒素抗毒素蛋白的基因,并对其进行原核表达和分析鉴定。结果发现,HigB对生长有抑制作用,而HigA可以中和这种作用,HigBA构成一对毒素抗毒素系统。HigB在高温和高密度时,表达量显著增加,显示其参与逆境环境下的生理调控。 徐玉智 李淑芳 张培君 龚玉梅 王宏俊关键词:副猪嗜血杆菌 实时荧光定量PCR 副鸡禽杆菌外膜蛋白GcbG的表达及免疫效果研究 被引量:6 2016年 为研究副鸡禽杆菌外膜蛋白GcbG的免疫原性,克隆了副鸡禽杆菌荚膜蛋白合成相关的编码基因gcbG,成功构建了原核表达质粒pGEX-5X-gcbG,并将其转化到大肠杆菌BL21(DE3)菌株中进行诱导表达。结果表明,重组菌在28℃培养条件下经1mmol/L的IPTG诱导6h可分泌表达GcbG蛋白,且其表达量最高。Western-blot分析表明,所表达的蛋白能与副鸡禽杆菌阳性血清发生特异性免疫印迹反应,说明所表达的蛋白具有较好的反应原性。动物试验表明,所表达的蛋白能为鸡提供较好的保护力。上述试验结果为进一步研究荚膜蛋白的生物学特性及亚单位疫苗的开发奠定了基础。 赵成全 路明华 李淑芳 张培君 龚玉梅 王宏俊关键词:副鸡禽杆菌 原核表达 动物试验 副猪嗜血杆菌15个血清型标准分离株对小鼠毒力的研究 被引量:10 2011年 为了确定Balb/c小鼠是否适合作为副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,HPS)的试验动物模型,试验用1~15血清型HPS标准菌株感染Balb/c小鼠,每只小鼠接种量为1.0×109 cfu。结果表明:用血清型1,2,5,10,12,13,14接种的5只小鼠均死亡4只,用血清型4,15接种的5只小鼠分别死亡2,3只,用血清型3,6,7,8,9,11接种的5只小鼠均没有死亡;各血清型的毒力与猪体试验的结果基本相符。说明Balb/c小鼠适合作为副猪嗜血杆菌的试验动物模型。 贺云霞 徐慧 叶飞 孙慧玲 王宏俊 龚玉梅 张莉 黄秀芬 张培君关键词:副猪嗜血杆菌 标准菌株 小鼠 毒力 鸡新城疫、禽流感(H9亚型)二联油乳剂灭活疫苗最小免疫剂量试验 本文将ND-AI(H9亚型)二联苗以1.0ml、0.5ml、0.2ml、0.1ml、0.05ml、0.02ml6个不同剂量免疫5周龄SPF鸡,免疫后3周采血测ND及AI的HI抗体,并用H9亚型AIV及NDVF48株攻击,... 王宏俊 姜北宇 校海霞关键词:禽流感 油乳剂 灭活疫苗 免疫效力 文献传递 副鸡禽杆菌LAMP检测方法的建立 被引量:2 2018年 应用环介导等温扩增(LAMP)技术建立了快速特异的检测副鸡禽杆菌的方法。利用在线引物设计软件Primer Explorer Version 4.0,针对副鸡禽杆菌16SRNA基因序列设计两组LAMP引物,并对副鸡禽杆菌特异性DNA的扩增条件进行优化,评价所建立LAMP的特异性和灵敏性。结果显示,优化后的反应条件为65℃恒温反应60min,内引物1.60pmol/μL、外引物0.20pmol/μL。该LAMP对13株副鸡禽杆菌均发生了扩增反应,而对大肠埃希菌、禽多杀性巴氏杆菌、空肠弯曲杆菌等14株其他病原微生物没有扩增反应;该LAMP最低检出量为0.17pg/反应,敏感性远高于常规PCR的56pg/反应。结果表明,所建立的副鸡禽杆菌LAMP具有快速、高效、方便操作等特点,适用于基层兽医部门进行副鸡禽杆菌的快速检测。 梅晨 李淑芳 徐玉智 张培君 龚玉梅 王宏俊关键词:副鸡禽杆菌 RRNA 环介导等温扩增 IBV抗原模拟表位在大肠杆菌鞭毛上的展示 目的为进一步验证通过噬菌体肽库筛选得到的2个IBV抗原模拟表位在脱离噬菌体后仍具有与IBV抗体结合的生物学活性。方法应用基因工程技术,合成这2个IBV抗原模拟表位:KSPKIHSSSALHF和SIIQMNLHRPTS的编... 安烨 王宏俊 徐慧 龚玉梅 张培君关键词:IBV 抗原表位 大肠杆菌 文献传递 溶血性曼氏杆菌PCR检测试剂盒的研制及初步应用 被引量:9 2009年 在溶血性曼氏杆菌PCR检测方法研究的基础上,进行溶血性曼氏杆菌PCR检测试剂盒的研究及初步应用。结果表明,试剂盒特异性好,批内和批间的试剂盒无差异;试剂盒在-20℃可保存30个月,4℃可保存12个月;应用试剂盒从1 000多份临床样品中筛选分离到6株溶血性曼氏杆菌。 徐慧 韦莉 佟瑞平 龚玉梅 王宏俊 孙惠玲 张培君关键词:PCR 试剂盒 一株B型副鸡禽杆菌的分离与鉴定 2012年12月,安徽某些蛋鸡养殖场出现大量鼻炎症状的病鸡,主要表现为眼结膜发炎,眼睑肿胀、流泪。一侧或两则颜面肿胀。产蛋鸡产蛋量明显下降等临床症状的疾病。为探索该病病因及制定有效防治措施,笔者对病鸡样品进行了细菌学检验... 路迎迎 路明华 陈小玲 张培君 龚玉梅 王宏俊关键词:副鸡禽杆菌 文献传递