王玲
- 作品数：14 被引量：60H指数：5
- 供职机构：无锡市第三人民医院更多>>
- 发文基金：江苏省自然科学基金国家自然科学基金无锡市社会发展科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人脐血源性间充质干细胞的体外培养及生物学鉴定被引量：19
- 2005年
- 目的建立体外培养、扩增人脐带血间充质干细胞(MSCs)的方法,初步鉴定其生物学特性。方法无菌条件下取正常足月剖宫产的脐带血,用淋巴细胞分离液分离脐血的单个核细胞,以偏酸性的MesencultTM作为培养基进行培养和纯化获得贴壁细胞层,测定MSCs的生长曲线,用流式细胞技术分析细胞的表面抗原。结果来源于脐血的单个核细胞在体外用合适的培养基培养,细胞贴壁后出现破骨样及间充质样的细胞。间充质细胞为成纤维样的细胞形态,并表达MSCs相关的抗原CD29、CD44、CD105,但不表达CD34、CD45、CD106和HLADR。这与源于骨髓的MSCs一致。结论脐带血中含有的MSCs可在体外培养、扩增,能够为实验和临床的应用提供一种新的间充质干细胞来源。
- 陈镭苗宗宁张东强陆华王玲栾文忠惠国桢
- 关键词：间充质干细胞体外培养生物学鉴定血源性CD106
- 体外诱导胎盘间充质干细胞分化为内皮细胞的可能性被引量：5
- 2006年
- 目的:观察体外诱导胎盘间充质干细胞分化为血管内皮细胞的可行性。方法:实验于2004-05/-2005-10在无锡第三人民医院细胞实验室完成。①分离培养胎盘间充质干细胞,鉴定其表面抗原,分别加入CD34-FITC,CD45-PE,CD19-FITC,CD29-FITC,CD44-PE,CD105-FITC,CD106-FITC,HLA-DR-FITC鼠抗人单克隆抗体,进行流式细胞仪分析。②培养细胞诱导分化:取培养2代细胞,用培养基为DMEM/F12+体积分数为0.02的胎牛血清+50μg/L血管内皮细胞生长因子的条件培养基诱导。③诱导细胞免疫组织化学染色分析:诱导后细胞通过内皮细胞标志物KDR,FLT-1以及v-WF染色鉴定。结果:①胎盘间充质干细胞的原代培养结果:随着细胞密度的增加,胞体变得细长,形态类似成纤维细胞。原代细胞生长较慢,传代细胞在3～5d左右可增殖1倍。培养的细胞可以稳定生长传代。②胎盘间充质干细胞的表面抗原测定结果:胎盘间充质干细胞表面抗原CD29,CD44,CD105阳性;CD34,CD45,CD19,CD106以及HLA-DR阴性。③胎盘间充质干细胞的诱导分化及染色结果:诱导后细胞形态明显改变,胞体逐步回缩,立体感增强,内皮细胞标志物KDR,FLT-1以及v-WF染色结果阳性。结论:胎盘间充质干细胞在体外具有分化为血管内皮细胞的能力,可以作为干细胞研究的一种有效来源。
- 苗宗宁祝建中黄伟王新王玲
- 关键词：间质干细胞胎盘内皮细胞细胞分化
- 体外诱导胎盘来源间充质干细胞分化为神经元样细胞的实验研究被引量：3
- 2007年
- 目的:探索体外诱导胎盘间充质干细胞(PMSCs)分化为神经元样细胞的方法。方法:消化胎盘组织,贴壁培养细胞,观测形态并用流式细胞仪检测其细胞表面标志;用含叔丁对甲氧酚(BHA)、二甲基亚砜(DMSO)及碱性成纤维细胞因子(b-FGF)的条件培养基培养细胞,诱导分化为神经元样细胞,采用免疫细胞化学的方法对分化的细胞进行鉴定。结果:胎盘组织的贴壁细胞与骨髓间充质干细胞(BMSCs)有相似形态和细胞表面标志,诱导后细胞表达神经元和星形胶质细胞标志神经元特异性的烯醇化酶(NSE)、和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)。结论:胎盘组织中存在能分化为神经元样细胞的间充质干细胞。
- 徐秋岚王玲苗宗宁祝建忠朱明月
- 关键词：胎盘间充质干细胞神经细胞
- 人脐带血间充质干细胞的体外培养及其影响因素(英文)被引量：2
- 2007年
- 背景:多潜能间充质干细胞在特定的培养条件下可以分化为骨、脂肪、软骨、肌肉以及内皮细胞,是目前倍受关注的一类具有多向分化潜能的组织干细胞。目的:建立人脐带血来源的间充质干细胞体外培养、扩增的方法,并分析其影响因素。设计:随机对照实验。单位:无锡第三人民医院组织工程和细胞生物学研究室。材料:健康新生儿脐带血(来源于无锡第三人民医院妇产科临产室,均征得产妇及其家属同意)70例,每例40mL;低糖基本必需培养基(Gibco),胎牛血清(Gibco),青链霉素(Gibco),胰蛋白酶(Gibco),FITC标记的小鼠抗人CD29、CD105、CD106(Ancell)单克隆荧光抗体和PE标记的小鼠抗人CD34、CD44、CD45、CD19、HLA-DR(Immunotech)单克隆荧光抗体,Ficoll分离液(Pharmacia)。方法:实验于2005-02/2005-12在无锡第三人民医院组织工程和细胞生物学研究室完成。①脐血间充质细胞的分离培养:健康新生儿脐带血共70例肝素(25u/mL)抗凝,分离单个核细胞,其中60例沉淀细胞用细胞培养液(低糖基本必需培养基+50g/L胎牛血清+10g/L青链霉素)重悬,另10例用高糖基本必需培养基重悬(其余培养条件相同)。细胞长到80%融合时,以1.0×107个/L的密度接种于培养瓶中进行扩增培养。②胎牛血清包被对人脐血间充质干细胞贴壁率的影响:取生长状态良好、纯化后对数生长期的人脐血间充质干细胞,分为血清包被组和无血清包被组,分别观察其贴壁率。③间充质干细胞的形态学和生长曲线:在相差显微镜(OLYMPUS CK40)下观察细胞生长状况,数码成像系统(OLYMPUS DP50)摄像记录。④免疫表型:取扩增第5代的脐血间充质干细胞,用EPICS-ALTRA流式细胞仪进行检测。主要观察指标:①观察高糖组和低糖组细胞的生长状态。②观察不同时间点胎牛血清包被组与未包被组细胞的贴壁情况并分别计算贴壁率。结果:本实验总共培养和分析了70例脐血
- 黄伟祝建中苗宗宁王玲王新
- 关键词：胎血间质干细胞细胞学细胞培养技术
- 人羊膜细胞抑制异体淋巴细胞增殖的实验研究
- 2008年
- 人羊膜上皮细胞位于羊膜的最内层，是在受精后第8天从外胚叶发育而来，理论上可以分化成各种组织细胞。本实验探讨羊膜细胞分离和培养方法，并通过混合淋巴细胞反应体系观察其免疫调节特性，为将来的细胞移植应用提供实验依据。
- 苗宗宁祝建中潘宇红王玲张学光
- 关键词：人羊膜上皮细胞淋巴细胞增殖细胞抑制混合淋巴细胞细胞分离
- 正常成人脑脊液诱导人胚来源的神经干细胞分化的实验研究被引量：9
- 2003年
- 目的 观察人胚来源的神经干细胞在正常成人脑脊液中的分化情况并探讨其机制。方法 将原代培养的人胚来源的神经干细胞置入含有正常成人脑脊液培养基 (DMEM/F12 +B2 7+ 3 0 %脑脊液 )使其分化 ,在分化的不同时间对分化的细胞进行免疫细胞化学染色 ,计数产生的各类神经细胞的比例。结果 正常成人脑脊液能诱导人胚来源的神经干细胞分化成神经元、星型胶质细胞、少突胶质细胞 ,与其在胎牛血清中的分化相比星型胶质细胞比例增多 (P <0 0 5 ) ,而其他类型细胞比例无显著性差异。结论 正常成人脑脊液能诱导人胚来源的神经干细胞分化成神经元、星型胶质细胞、少突胶质细胞 ,神经干细胞在脑脊液中可以存活和分化 。
- 卞林惠国桢陆华蒋云召苗宗宁王玲蒋震伟
- 关键词：神经干细胞分化脑脊液神经移植
- 纳米材料复合人骨髓成骨细胞培养的研究被引量：5
- 2003年
- 目的 探讨纳米材料作为组织工程骨基质材料的可行性。方法 分离培养人骨髓间充质干细胞 ,诱导为成骨细胞后作为种子细胞 ,与纳米晶羟基磷灰石胶原材料体外联合培养 ,通过对复合物光镜及扫描电镜观察 ,了解细胞在材料中生长情况。结果 人骨髓间充质干细胞可以诱导为成骨细胞 ,体外复合培养 2周 ,分布于支架材料上的细胞大量分化增殖。
- 苗宗宁戴涟生祝建中王玲陆华惠国桢
- 关键词：纳米材料骨髓间充质干细胞成骨细胞
- 脊髓半切洞损伤后人胚嗅鞘细胞移植的时机选择被引量：3
- 2004年
- 目的 通过对脊髓损伤后不同时间进行嗅鞘细胞移植治疗产生的不同效果进行比较 ,从而选择细胞移植治疗脊髓损伤的最佳时机。方法 将 2 0只SD大鼠分成 3组 ,制成脊髓半切洞模型 ,第 1组予损伤后即刻移植细胞 ,其余 2组分别予伤后 2周和 4周移植等量的细胞 ,每组动物均饲养 1月后处死 ,观察比较治疗前后动物不同时间的神经功能评分 ,应用HRP TMB神经示踪计数伤侧中脑红核大细胞的数量 ,间接评价脊髓轴索再生的程度。结果 无论是神经功能评定还是中脑红核大细胞计数结果 ,伤后 2周和 4周组的动物均优于伤后即刻移植组 ,差异有显著性 ( P <0 0 5 ) ,伤后 4周组要优于 2周组 ,但 2组间差异无显著性。
- 吴卫江惠国帧吕然博苗宗宁王玲
- 关键词：脊髓损伤嗅鞘细胞
- 人胚骨髓基质干细胞的分离纯化及向神经样细胞的诱导分化被引量：2
- 2004年
- 目的 培养纯化人胚骨髓基质干细胞并向神经系统方向诱导。方法 提取人胚胎股骨、肱骨骨髓 ,Percoll分离液分离 ,将含有MSC的中间白膜层培养于DMEM +10 %的胎牛血清培养基中 ,并进行扩增。用 2 0 0 μm的BHA对其进行诱导分化 ,并用免疫组化染色检测特异性神经元烯醇化酶 (NSE)和胶质纤维酸性蛋白 (GFAP)。结果 成功进行了人胚骨髓基质干细胞原代和传代培养 ,并成功完成了向神经样细胞的诱导。结论 人胚骨髓基质干细胞可以比较容易的获得并能向神经样细胞分化 。
- 吴智远芦奕惠国桢苗宗宁王玲陆华陈镭
- 关键词：骨髓基质干细胞神经样细胞诱导分化
- 人脐血血清对人骨髓基质细胞增殖的实验研究被引量：1
- 2004年
- 目的 探究人脐血血清对人骨髓基质细胞增殖的作用。方法 无菌条件下抽取新鲜脐血 ,经肝素抗凝、离心分离血清、灭活补体、微孔滤膜过滤制备人脐血血清 ,细胞按照一定浓度接种于DMEM / 2 0 %人脐血血清培养基 ,定期观察细胞生长并更换培养基。结果 细胞接种 2 4h后有少量梭形细胞贴壁 ,2周时细胞基本长满瓶底 ,细胞呈漩涡状排列。
- 芦奕吴智远惠国桢陈镭苗宗宁王玲
- 关键词：胎血骨髓基质细胞增殖
