王维锋
- 作品数：7 被引量：20H指数：3
- 供职机构：第二军医大学东方肝胆外科医院更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划上海市卫生系统百名跨世纪优秀学科带头人培养计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 小鼠MIP1-α重组腺病毒载体的构建及其在肝癌细胞中的表达被引量：3
- 2002年
- 目的 :构建小鼠趋化因子 MIP1-α(m MIP1-α)的重组腺病毒载体并在小鼠肝癌细胞中表达 ,为肝癌基因治疗提供实验基础。 方法 :PCR扩增含有 m MIP1-α的质粒 ,将腺病毒骨架质粒 p Ad Easy- 1以及线性化的重组穿梭质粒 p Track- CMV-m MIP1-α共转化 BJ5 183受体菌并在其中发生同源重组 ,利用重组前后抗性的改变筛选出重组子 ,重组腺病毒质粒经过 2 93细胞的包装、扩增和纯化后 ,感染小鼠肝癌细胞株 Hepa1- 6 ,一步法提取细胞总 RNA,RT- PCR检测 m MIP1-α的 m RNA。琼脂糖凝胶打孔法体外观察感染上清中 m MIP1-α对小鼠脾细胞的趋化活性。 结果 :得到了携带 m MIP1-α的重组腺病毒 ,纯化后滴度为 4× 10 1 1 efu/ ml,在感染后的 Hepa1- 6细胞中检测到 m MIP1-α的表达 ,上清中 m MIP1-α的趋化指数为 6 .3。结论 :成功地构建了携带 m MIP1-α的重组腺病毒载体 ,为下一步应用于肝癌的基因治疗提供了基础。
- 贾凤岐王维锋江小玲杨庆卫立辛杨广顺吴孟超
- 关键词：肝肿瘤腺病毒载体基因治疗动物实验
- 银染端粒重复序列扩增法检测肝癌模拟肝穿组织端粒酶活性的研究被引量：2
- 2002年
- 目的:探讨细针穿刺肝活检组织行端粒酶活性检测用于肝细胞癌(HCC)诊断的可行性。方法:HCC共28例,每例HCC肿瘤切除后立即行肝肿瘤模拟细针穿刺。应用非放射性同位素银染的端粒重复序列扩增法(TRAP),分别对28例模拟肝穿组织和28例肿瘤切取组织行端粒酶活性检测。结果:模拟肝穿组织与肿瘤切取组织的端粒酶检测结果完全一致,阳性率均为82%(23/28)。结论:模拟肝穿组织与肿瘤切取组织在HCC端粒酶活性检测方面具有同等的效果。该结果提示,B超引导下经皮肝穿刺活检行端粒酶活性检测在HCC的诊断、治疗效果评价和预后的判断方面具有一定的应用前景。
- 卫立辛范瑞芳杨庆贾凤岐王维锋郭亚军吴孟超
- 关键词：肝细胞癌活组织检查针吸端粒酶HCC
- 腺病毒介导的siRNA抑制hTERT增强肝癌化疗敏感性的实验研究
- 肝癌是全球常见10种恶性肿瘤之一，全球每年约有25万人死于肝癌，我国约占其中40％，还呈逐年上升之势。在以手术切除为主的肝癌综合治疗方案中，化疗是不可缺少的一环。因为肝癌较其他实体肿瘤对化疗更不敏感，所以化疗总体效果不明...
- 王维锋
- 文献传递
- 表达趋化因子MIP-1α的小鼠肝癌疫苗抗肿瘤活性的研究被引量：3
- 2002年
- 目的 探讨小鼠趋化因子 (mMIP 1α)的重组腺病毒载体 (AdmMIP 1α)体外感染肝癌细胞株Hepa1 6后 ,其体内抗肿瘤活性及其成为肝癌疫苗的可能性。 方法 腺病毒载体体外感染Hepa1 6细胞 ,通过绿色荧光蛋白 (GFP)的表达检测感染效率 ;每天细胞计数 (连续 14d)观察细胞的体外生长曲线 ;取 5× 10 6个修饰后的Hepa1 6细胞接种C5 7BL/ 6小鼠 ,4周后在AdmMIP 1α组未荷瘤小鼠原接种部位的对侧再接种 2× 10 6个野生型Hepa1 6或EL4细胞 ,观察肿瘤大小并作统计学处理。结果 AdmMIP 1α能有效感染靶细胞Hepa1 6 ,感染前、后Hepa1 6的体外生长无明显改变 ;修饰后Hepa1 6细胞的体内成瘤性下降 ;4周后再接种Hepa1 6细胞 ,肿瘤生长速度显著降低 ;而再接种的EL4细胞呈渐进性生长 ,与对照组差异无显著意义。 结论 表达mMIP 1α基因的肝癌细胞的体内成瘤性下降 ,能激发特异性免疫保护反应 ,有可能成为有效的肝癌疫苗。
- 杨庆杨广顺卫立辛贾凤歧王维锋吴孟超郭亚军
- 关键词：趋化因子MIP-1Α小鼠肝癌疫苗抗肿瘤活性
- 端粒酶活性及hTERT mRNA表达在鉴别肝脏良恶性病变中的意义被引量：6
- 2004年
- 目的:研究端粒酶活性及人端粒酶逆转录酶(hTERT)mRNA表达在鉴别肝脏良、恶性病变中的意义。方法:采用ELISA-TRAP法检测了130份外科切除肝脏样本及58个肝脏可疑结节的端粒酶活性,RT-PCR法检测hTERTmRNA表达。所有样本均经病理学证实。结果:外科切除的肝细胞癌、肝硬变及慢性肝炎组织端粒酶阳性率分别为85.9%(55/64)、25.0%(8/32)及8.3%(2/24),hTERTmRNA阳性率分别为89.1%(57/64)、25.0%(8/32)及8.3%(2/24),10份正常肝脏组织端粒酶及hTERTmRNA表达阴性。经皮肝穿刺活检的肝细胞癌、胆管细胞癌、局灶性结节性增生、炎性假瘤及腺瘤样增生组织的端粒酶阳性率分别为85.7%(30/35)、100%(4/4)、33.3%(4/12)、25.0%(1/4)及33.3%(1/3),hTERTmRNA阳性率分别为88.6%(31/35)、100%(4/4)、33.3%(4/12)、25.0%(1/4)及33.3%(1/3)。肝脏恶性肿瘤端粒酶及hTERTmRNA阳性率明显高于肝脏良性病变(P<0.01)。结论:经皮肝穿刺活检端粒酶活性及hTERTmRNA检测有助于肝脏良、恶性病变的鉴别诊断。
- 范瑞芳卫立辛吴孟超沈锋王维锋贾凤岐卜欣欣郭献灵尤天庚杨家和郭亚军
- 关键词：肝脏肿瘤端粒酶人端粒酶逆转录酶
- 原发性肝癌细针活检端粒酶活性检测的临床意义被引量：7
- 2004年
- 目的:探讨原发性肝癌(HCC)经皮肝穿刺细针活检端粒酶活性检测的临床意义。方法:25例直径1.2～3cm的HCC进行了无水酒精注射治疗(PEIT)。PEIT治疗前及PEIT治疗后1周在B超引导下经皮肝穿刺细针活检,所得微量肝癌组织采用非放射性同位素银染端粒重复序列扩增法(TRAP)行端粒酶活性检测及病理学检查。3例正常肝脏组织及5例肝硬变组织作为对照研究。结果:PEIT治疗前,病理学检查诊断率为80%(20/25),端粒酶活性阳性率为84%(21/25);PEIT治疗后1周,病理学检查未发现肿瘤细胞,3例端粒酶活性阳性(12%),其中1例经手术治疗后临床治愈,2例未手术治疗者1年内复发。其余22例端粒酶转阴的患者1年内未复发。3例正常肝脏组织及5例肝硬变组织端粒酶活性检测均阴性。结论:经皮肝穿刺活检微量肝脏组织端粒酶活性检测可应用于小肝癌的辅助诊断,在原发性肝癌PEIT治疗的疗效评价及预后判断方面具有一定的应用价值。
- 范瑞芳卫立辛王维锋尤天庚杨家和杨庆贾凤岐江小玲郭亚军吴孟超
- 关键词：肝细胞癌活组织检查端粒酶无水酒精
- Flt3配体修饰小鼠肝癌疫苗的制备及其体内抗肿瘤活性观察被引量：3
- 2002年
- 目的 :以小鼠 Flt3配体 (murine flt3ligand,m FL )的重组腺病毒载体 (Adm FL )体外感染小鼠肝癌细胞株 Hepa1- 6制备肝癌疫苗 ,并观察其体内抗肿瘤活性。方法 :腺病毒载体体外感染 Hepa1- 6细胞 ,48h后通过载体所携带的绿色荧光蛋白(GFP)的表达检测感染的效率 ;并用 EL ISA方法检测第 0、2、4、6、8天培养上清中 m FL的表达量 ;每天进行细胞计数 (连续 14d) ,观察细胞的体外生长曲线 ;取 5× 10 6个修饰后的 Hepa1- 6细胞接种 C5 7BL / 6小鼠 ,4周后于原接种部位的对侧再接种 2× 10 6个野生型 Hepa1- 6或 EL 4细胞。结果 :Adm FL能有效感染靶细胞 Hepa1- 6 ,培养上清中 m FL表达量在第 2天最高 ,达到 (71.1± 6 .3) ng/ ml,感染后 Hepa1- 6的体外生长未受到明显抑制 ;修饰后 Hepa1- 6细胞的体内成瘤性下降 ;4周后再接种Hepa1- 6细胞 ,肿瘤生长速度明显降低 ;而再接种的 EL4细胞呈渐进性生长 ,与对照组相比无显著差异。 结论 :腺病毒介导的Flt3配体基因修饰后的肝癌细胞的体内成瘤性下降 ,并能激发特异性免疫保护反应 ,是有效的肝癌疫苗。
- 杨庆贾凤歧王维锋卫立辛杨广顺郭亚军吴孟超
- 关键词：FLT3配体腺病毒科
