公共文化服务平台

共 5 条记录，以下是 1-5

全选清除导出

排序方式：

拟南芥阿拉伯糖-5-磷酸异构酶的原核表达、纯化及酶催化特性被引量：2: 2016年; 阿拉伯糖-5-磷酸异构酶(Kds D)是2-酮-3-脱氧辛糖酸(KDO)生物合成途径的第一个关键限速酶,通过无缝克隆技术将拟南芥Kds D基因构建至原核表达载体p ET-HTT,经过IPTG诱导,在大肠杆菌BL21(DE3)中获得了大量重组蛋白的可溶性表达;表达产物经Ni-NTA亲和层析和分子筛层析(SEC)方法进行酶蛋白的分离纯化步骤,得到纯度85%以上的高纯度酶;分子筛层析结果发现纯化后的目的蛋白Kds D在溶液中主要以多聚体、二聚体和单体形式存在,这同微生物来源Kds D酶在溶液中以四聚体形式存在很大差异;进一步使用Western blotting和MALDI-TOF MASS技术对纯化的蛋白进行鉴定;测定了拟南芥Kds D酶学性质,证明该酶催化反应的最适p H值为8.0,最适作用温度为37℃,各种金属离子在低浓度均对酶活性存在不同程度的抑制作用,其中以Co^(2+)、Cd^(2+)对酶活性的抑制作用最强,而5 mmol/L金属螯合剂EDTA对酶有激活作用。此外,以阿拉伯糖-5-磷酸(A5P)为底物时,拟南芥Kds D酶动力学常数Vmax和Km值分别为0.18 mmol/(L·min)、0.16 mmol/L,比较发现该酶与底物的亲和性高于大肠杆菌Kds D。以上研究结果为Kds D蛋白结构与功能及其在新型抗生素研制领域中的工业化应用奠定了基础。; 屈亚平张智俊王超莉王蕾吴林军; 关键词：拟南芥 MALDI-TOF MASS 酶学性质

毛竹阿拉伯糖-5-磷酸异构酶的基因克隆、原核表达及纯化被引量：1: 2016年; 毛竹Phyllostachys edulis阿拉伯糖-5-磷酸异构酶(Pe Kds D)是2-酮-3-脱氧辛糖酸(KDO)生物合成途径的第1个关键酶。采用逆转录实时聚合酶链式反应(q RT-PCR)克隆得到毛竹Kds D基因。该基因c DNA全长1 038 bp,编码346个氨基酸;对不同物种来源的Kds D氨基酸序列进行比对和系统进化树分析。结果表明:毛竹的Kds D与玉米Zea mays等植物来源的Kds D有很高的序列一致性,而与微生物来源的Kds D序列一致性较低。毛竹不同组织实时荧光定量聚合酶链式反应(q RT-PCR)结果表明:Pe Kds D基因在叶中表达量远远高于其他组织。在大肠埃希菌Escherichia coli原核表达系统中获得了Kds D的可溶性高表达蛋白,将大量表达的重组蛋白经过Ni-NTA亲和层析和分子筛层析(SEC)进行纯化,发现Kds D在溶液(30 mmol·L^(-1)三羟甲基氨基甲烷pH 8.0,200 mmol·L^(-1)氯化钠)中以多种聚体的形式存在;酶学性质测定的结果表明:毛竹Kds D酶最适pH值为pH 8.5,最适作用温度为37℃。此结果为后期研究植物Kds D蛋白的结构与功能奠定了基础。; 屈亚平张智俊王超莉王蕾吴林军; 关键词：林木育种学毛竹基因克隆原核表达蛋白纯化

毛竹KDO8PS的原核表达纯化及晶体生长被引量：1: 2014年; 3-deoxy-D-manno-octulosonate(KDO)8-phosphate synthase(KDO8PS)[EC 4.1.2.16]是KDO生物合成途径中的关键酶。采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法,以毛竹Phyllostachys edulis新鲜实生苗为材料,分离得到竹子KDO8PS基因。通过对不同物种来源的KDO8PS进行氨基酸序列比对分析和半定量RT-PCR技术对该基因进行组织特异性表达分析。将PeKDO8PS基因构建入原核表达载体pET-28a,并在大肠埃希菌Escherichia coli原核表达系统中获得了KDO8PS的可溶性高表达。经nickel亲和层析和分子筛纯化2种方法对表达蛋白进行纯化。结果分析表明:该基因编码区全长876 bp,可编码291个氨基酸。PeKDO8PS与拟南芥Arabidopsis thaliana等植物来源的KDSA2的基因有很高序列一致性,而与微生物来源的KDO8PS序列一致性较低。分析毛竹各组织中KDO8PS基因的表达结果表明,该基因在根、茎和叶片中均有表达,但在根中相对表达量较高,此表达模式亦同拟南芥AtKDSA2类似。另外,发现KDO8PS在溶液(30 mmol·L-1Tris-HCl pH 8.0,200 mmol·L-1氯化钠)中以二聚体的形式存在,并且初步筛选出该酶晶体生长条件。此结果为PeKDO8PS蛋白的最终结构分析奠定了基础。; 张凤雪徐英武张智俊肖冬长王超莉屈亚平; 关键词：林木育种学毛竹组织特异性表达原核表达

毛竹丙酮酸磷酸双激酶调节蛋白基因克隆、原核表达及纯化: 2015年; 丙酮酸磷酸双激酶调节蛋白(pyruvate,orthophosphate dikinase regulatory proteins,RP)是通过调控丙酮酸磷酸双激酶(pyruvate,orthophosphate dikinase,PPDK)参与C4途径光合碳循环途径。毛竹Phyllostachys edulis作为一种重要的经济竹种,分析克隆RP基因对于竹类植物光合作用的研究具有重大理论和应用价值。通过逆转录实时聚合酶链式反应(RT-PCR)成功克隆得到毛竹Pe RP1,该基因c DNA全长1 275 bp,编码425个氨基酸;经生物信息学预测,该蛋白属于kinase-PPPase超家族,主要含有UDF 299保守结构域;经多序列比对发现毛竹Pe RP1蛋白与C3植物中RP1亲缘关系较近,而与C4植物亲缘关系较远。为了研究Pe RP1的蛋白质结构,我们将Pe RP1蛋白进行原核表达,利用Ni-NTA树脂亲和层析结合分子筛(SEC)层析的方法纯化得到了Pe RP1重组蛋白。SEC纯化的结果表明:Pe RP1蛋白在溶液中主要以多聚体形式存在,二聚体及单体含量较少,推测Pe RP1蛋白可能以多聚体形式参与调控PPDK蛋白。这为今后研究该蛋白的结构与功能打下了良好基础。; 王超莉张智俊屈亚平王蕾; 关键词：毛竹基因克隆原核表达蛋白纯化

毛竹MYB转录因子PeMYB2的克隆与功能分析被引量：12: 2013年; MYB类转录因子在调控逆境应答基因的表达起着重要的作用,是最大的植物转录因子之一。文章通过同源基因克隆方法和RACE(Rapid-amplification of cDNA ends)技术,以毛竹幼苗为材料,获得一个MYB类转录因子,命名PeMYB2。氨基酸序列分析表明,PeMYB2具有典型的R2R3-MYB特征,N端含有两个串联重复保守结构域,C端含有一个膜蛋白DUF3651;进化树分析表明,PeMYB2与水稻OsMYB18序列相似性最高,达到85.98%;酵母单杂实验表明,PeMYB2具有转录激活功能。将PeMYB2转化拟南芥对其功能进行分析,获得7株转基因纯合体植株。比较转基因和野生型拟南芥表型发现,PeMYB2的过量表达使转基因拟南芥出现矮化、晚花的现象;非生物胁迫处理(盐胁迫、干旱胁迫、低温胁迫)结果表明,转基因拟南芥中PeMYB2的过量表达,导致转基因植株对盐胁迫和低温胁迫有更高的耐性,但是对低温胁迫的耐受性没有明显的变化;进一步通过盐胁迫信号通路相关Marker基因(NXH1、SOS1、RD29A、COR15A)的定量PCR实验验证,发现PeMYB2对下游这些抗逆基因的表达具有调控作用。上述实验结果表明,毛竹PeMYB2可参与非生物胁迫调控,对毛竹盐胁迫和低温胁迫的响应起着重要的作用。; 肖冬长张智俊徐英武杨丽张凤雪王超莉; 关键词：毛竹非生物胁迫转基因

全选清除导出

共1页<1>

王超莉

合作作者

文献类型

领域

主题

机构

作者

传媒

年份

用户反馈

王超莉

合作作者

文献类型

领域

主题

机构

作者

传媒

年份

用户登录

用户反馈