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2型猪链球菌srtBCD菌毛岛SSU2100基因的克隆表达与免疫学特性被引量：3: 2012年; 【目的】研究2型猪链球菌(Streptococcus suis serotype 2,S.suis 2)野毒株05ZYH33的srtBCD菌毛岛菌毛亚蛋白SSU2100的免疫保护性作用。【方法】通过PCR扩增出SSU2100基因片段,将目的基因克隆到表达载体pET28a上,转化入E.coli BL21感受态中表达,亲和层析法纯化目的蛋白;Western blot检测SSU2100蛋白的免疫原性,重组蛋白免疫BALB/c小鼠,ELISA法检测多抗血清的效价及IgG亚型,研究重组蛋白的免疫保护作用。【结果】在原核系统成功表达出了SSU2100蛋白;ELISA结果显示重组蛋白能够刺激小鼠产生高效价的免疫抗体;动物实验表明该蛋白具有良好的免疫保护作用。【结论】菌毛亚蛋白SSU2100可以作为S.suis 2亚单位疫苗的候选分子,为系统地阐释srtBCD菌毛岛在S.suis 2致病机制中的作用奠定基础。; 张先云王长军石洁朱静潘秀珍; 关键词：2型猪链球菌原核表达免疫保护

病原菌逃避宿主细胞防御的策略被引量：4: 2012年; 病原菌对宿主致病是病原菌与宿主复杂相互作用的结果。病原菌与宿主相互作用可造成宿主在细胞、组织及器官不同水平的损伤。病原菌对宿主的致病性及毒力,一方面在于病原菌,另一方面在于宿主因素以及宿主与病原菌的相互作用。病原菌-宿主在细胞水平的相互作用是病原菌感染致病的重要环节。结合本课题组对猪链球菌的研究,从黏附与定殖、侵袭、逃避与扩散等方面概述病原菌逃避宿主细胞防御的机制。; 石洁王长军; 关键词：病原菌猪链球菌宿主细胞防御逃避

猪链球菌2型荚膜唾液酸对细菌毒力和宿主炎症反应的影响被引量：4: 2012年; 【目的】阐明猪链球菌2型荚膜唾液酸是否影响细菌毒力以及宿主对其炎症反应应答,为研究猪链球菌2型的致病机制奠定基础。【方法】比较实验菌株对BLAB/c小鼠模型的致病性;通过涂板计数的方法检测实验菌株在小鼠体内的分布;观察小鼠脑组织病理改变,分析实验菌株感染小鼠后中枢神经系统的病变差异;从小鼠体外全血细胞水平,运用ELISA法检测实验菌株感染后细胞炎性因子的分泌水平。【结果】荚膜唾液酸合成基因neuB缺失突变株ΔneuB相比野生株05ZYH33株,对小鼠毒力显著降低,回复突变株cΔneuB毒力回复至野生株水平;野生株和突变株在血液及脑组织中分布具有显著差异,均可致BLAB/c小鼠脑组织不同程度的损伤;与野生株组相比较,细菌/细胞相互作用不同时间点后,突变株组体外刺激小鼠全血细胞分泌MCP-1、IL-6的水平显著提高;【结论】荚膜唾液酸影响细菌的毒力及宿主细胞对其的炎症反应应答,它是猪链球菌2型穿透血脑屏障导致脑膜炎的重要毒力因子。; 石洁胡丹朱静张先云侯田青郭静静潘秀珍李先富王长军; 关键词：猪链球菌2型荚膜唾液酸毒力

荚膜唾液酸缺失对2型猪链球菌引起脑膜炎的影响: 目的：阐明英膜唾液酸缺失对2型猪链球菌引起脑膜炎的影响,为研究2型猪链球菌致脑膜炎机制奠定基础。方法：以HBME为宿主靶细胞,通过涂板计数的方法检测野生株和突变株对HBMEC的黏附、入侵;从HBMEC细胞系系统、小鼠及人...; 石洁潘秀珍李先富王长军; 关键词：猪链球菌荚膜唾液酸脑膜炎; 文献传递

高致病性猪链球菌2型多重实时荧光定量PCR检测方法的建立被引量：9: 2012年; 目的建立对高致病性猪链球菌2型毒力基因SalK、virB4-89K、cps2J同步检测的多重实时荧光定量PCR检测方法。方法根据SalK、virB4-89K、cps2J基因保守区域设计并合成3对引物及其探针;通过反应体系和扩增条件优化,建立快速鉴定高致病性猪链球菌2型的方法,并对方法的特异性、敏感性、重复性指标进行评估。结果反应体系具有良好的扩增效率,全部扩增检测可在60min内完成。SalK、virB4-89K、cps2J基因检测灵敏度分别为19cfu/ml、27cfu/ml和32cfu/ml。重复性试验中变异系数均小于3%。用该方法考核33株猪链球菌,包括1/2型、1型、3型至33型,以及9株常见对照菌株,仅猪链球菌1/2型检测到cps2J基因荧光信号增强。对疫情现场获得的SS2感染者血液进行检测,3个基因均阳性。结论建立的多重实时荧光定量PCR方法可快速检测高致病性猪链球菌2型,并能鉴定是否含有89K毒力岛基因SalK、virB4-89K,具有敏感、特异、重复性好的特点。; 朱静张锦海胡丹石洁张先云李先富潘秀珍王长军; 关键词：猪链球菌2型

荚膜唾液酸缺失对猪链球菌2型与宿主相互作用影响的研究: 猪链球菌(Streptococcus suis，S.suis)是一种重要的人兽共患病病原菌,根据其表面荚膜多糖(Capsular polysaccharide，CPS)的抗原性，可以分为1/2、1-31和33共33个血清...; 石洁; 关键词：猪链球菌2型荚膜唾液酸生物学性状; 文献传递

猪链球菌2型BALB/c小鼠动物感染模型的建立被引量：11: 2012年; 目的研究猪链球菌2型(SS2)中国高致病株05ZYH33株对BALB/c小鼠的致病性,探讨其作为SS2动物感染模型的可行性。方法用猪链球菌活菌经腹腔注射感染小白鼠,并做阴性对照。通过LD50测定、临床症状观察、病理剖检、病原分离鉴定、菌株在各脏器内定植分布检测、细胞因子测定,观察和分析小鼠感染SS2后机体的一系列改变。结果 BALB/c小鼠对05ZYH33株易感,其LD50为4×107 CFU/ml,并可区分强毒株和无毒株毒力差异;病原分离鉴定证实各脏器感染菌株均为SS2;涂板计数表明野生株05ZYH33在小鼠各脏器定植量显著高于无毒株Δcps2B;病死鼠的特征性组织病理学变化表现为典型的弥漫性血管内凝血和微血栓形成;野生株及无毒株均可引起炎症因子IL-6及趋化因子MCP-1的释放,但无毒株△cps2B诱导细胞因子水平显著低于野生株(P<0.05)。结论 BALB/c小鼠可被SS2感染并引发炎症反应。适龄SPF BALB/c小鼠是中国SS2强致病株良好的动物感染模型。; 胡丹石洁朱静李先富潘秀珍王长军; 关键词：猪链球菌2型动物模型 BALB/C小鼠

荚膜唾液酸缺失对2型猪链球菌与人单核细胞相互作用的影响被引量：3: 2011年; 目的本研究以人单核细胞THP-1为靶细胞,研究荚膜唾液酸成分对2型猪链球菌与人单核细胞相互作用的影响。方法透射电镜定性比较野生株及敲除株与人单核细胞相互作用并观察细菌的超微结构;通过涂板计数定量测定比较细胞对细菌的内吞及细菌在细胞内的存活情况;ELISA法检测野生株及敲除株刺激人单核细胞分泌炎症因子的水平。结果猪链球菌唾液酸突变株与人单核细胞间相互作用,在黏附、内吞及胞内存活方面与野生株相比均有显著的差异;野生株对人单核细胞杀伤的抵御能力显著强于唾液酸缺失突变株;唾液酸突变株能更加快速的刺激人单核细胞分泌IL-8,且分泌水平要高于野生株,但对IL-6的分泌无影响。结论荚膜唾液酸在2型猪链球菌致病过程中发挥着重要作用,为进一步探讨荚膜唾液酸参与2型猪链球菌强致病性调控奠定了基础。; 石洁李先富张先云朱静潘秀珍王长军; 关键词：2型猪链球菌人单核细胞

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石洁