秦迎春
- 作品数：3 被引量：2H指数：1
- 供职机构：浙江大学化学工程与生物工程学系更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学化学工程更多>>
- S-2-氯丙酸脱卤酶在毕赤酵母中的重组表达被引量：1
- 2013年
- 根据S-2-氯丙酸脱卤酶的基因序列设计引物,克隆重组大肠杆菌中的S-2-氯丙酸脱卤酶基因。将目的基因片段构建到pPIC9K载体,经Sac I单酶切后转化到毕赤酵母GS115中,通过G418抗性YPD平板筛选高拷贝重组子,甲醇诱导成功实现胞外活性表达。重点考察了基因拷贝数和甲醇浓度的影响,结果表明重组子含有12个拷贝,甲醇浓度为1%时较佳,重组脱卤酶的酶活可达236U/L。重组毕赤酵母具有很好的遗传稳定性。对该酶最适反应温度及pH进行研究,表明其最适反应温度为50℃,最适pH为9.5。
- 秦迎春杨立荣徐刚吴坚平
- 关键词：毕赤酵母
- 氯丙酸脱卤酶的外分泌/可溶性表达体系的构建
- S-2-氯丙酸脱卤酶、R-2-氯丙酸脱卤酶和3-氯丙酸脱卤酶在生物制备重要化工中间体方面具有广泛的用途。因此构建这些脱卤酶的高效重组表达具有非常重要的意义。目前脱卤酶重组表达基本都选择大肠杆菌作为宿主,在原核体系中进行重...
- 秦迎春
- 关键词：2-氯丙酸3-羟基丙酸脱卤酶毕赤酵母
- 文献传递
- R-2-氯丙酸脱卤酶的定向进化被引量：1
- 2013年
- 通过易错PCR手段将R-2-氯丙酸脱卤酶定向进化,并使用基于Cl-浓度显色反应的高通量筛选得到有效突变子库,发现突变子DehDIV-G2和DehDIV-E7的酶比活力分别提高25.2%和38.7%。通过SYBYL对酶与底物进行分子对接显示,DehDIV-G2的活化能下降0.961 4 kJ/mol,DehDIV-E7的活化能下降2.549 8 kJ/mol。由于酶和底物R-2-氯丙酸的活化能下降,亲和能力提高,从而提高酶的比活力。
- 秦迎春刘鹏杨立荣徐刚吴坚平
- 关键词：2-氯丙酸脱卤酶定向进化分子对接
