程锐
- 作品数：12 被引量：34H指数：4
- 供职机构：中山大学中山医学院生物化学教研室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省自然科学基金广东省科技计划工业攻关项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学更多>>
- 交叉酶切联合MALDI-TOF/MS分析重组蛋白二硫键分布的方法建立被引量：2
- 2011年
- 以Kringle环为分子模型,应用MALDI-TOF/MS联合特异性蛋白酶酶切技术,探讨建立蛋白质二硫键分布和定位分析的研究方法。采用pET22b(+)原核表达体系诱导表达重组人纤溶酶原K5蛋白(rhK5),经Ni2+-NTA resin亲和层析纯化,并通过SDS-PAGE和Western-blot进行初步鉴定;采用MTT法分析rhK5对微血管内皮细胞的抑制活性;联合应用交叉酶切(Trypsin Gold单切或Trypsin Gold及Endoproteinase ASP-N双酶切)和基质辅助激光解析-飞行时间质谱(MALDI-TOF/MS)分析rhK5的二硫键分布;并应用生物信息学方法和圆二色谱法进一步验证rhK5二级结构。应用原核体系高效表达具有生物活性的rhK5蛋白,经交叉酶切联合MAL-DI-TOF/MS证实rhK5中的6个半胱氨酸正确配对形成了3对二硫键(Cys462:541,Cys483:524和Cys512:536),圆二色谱法测定发现rhK5为典型的β折叠型结构。上述研究结果为分析基因工程重组蛋白质中半胱氨酸配对及二硫键分布提供了方法学基础。
- 徐祖敏程锐杨霞杨中汉刘少军黎明涛蔡卫斌高国全
- 关键词：基因工程重组蛋白蛋白质结构二硫键
- 抗新生血管蛋白KBP多克隆抗体的制备及鉴定被引量：2
- 2011年
- 目的激肽释放酶结合蛋白(Kallikrein-binding protein,KBP)具有抑制血管新生的高活性,但目前尚无KBP的特异性抗体,限制其进一步研究。本研究拟制备高灵敏度和高特异性的KBP抗体并对其进行初步评估。方法构建含大鼠源性KBP序列的pET-28a重组载体的大肠杆菌BL21(DE3),在此基础上,扩增表达菌,经异丙基B.D一硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,Ni-NTA色谱柱亲和层析纯化获得KBP重组蛋白。利用SDS-PAGE和Western blot方法对KBP进行鉴定。以纯化产物为抗原免疫新西兰大白兔,获得兔抗KBP血清,亲和纯化获得多克隆抗体。应用Elisa和Western-blot方法检测纯化抗体的效价和特异性。结果 KBP融合蛋白得到高表达,且纯度大于85%。用该融合蛋白免疫大白兔后得到的抗KBP抗体,效价达1∶512 000,并特异性识别大鼠和人组织中天然的KBP蛋白。结论以纯化的KBP重组蛋白为抗原,获得KBP多克隆抗体,具有较好的效价和特异性,为KBP功能和作用机制的深入研究提供了必要的工具。
- 陈易斐黄莉钧李磊戴智育程锐杨霞高国全
- 关键词：多克隆抗体制备
- 一种高选择性、高效的牛视网膜微血管内皮细胞培养方法被引量：5
- 2012年
- 目的建立一种高效、可行、特异性高的牛视网膜微血管内皮细胞(BREC)培养方法。方法取新鲜牛眼,分离视网膜并用DMEM进行冲洗、匀浆剪碎,过75μm筛,将滤网上滤渣转移至50ml离心管,用Ⅰ型胶原酶、DNaseⅠ及蛋白酶等多种酶混合液消化20min,人血清中和后,过46μm网筛并冲洗,离心5min,将组织扣在培养皿中,转入15ml离心管,用10%人血清含生长因子ECGS的DMEM培养液培养于25cm2,选择性培养视网膜血管内皮细胞,接种于明胶包被培养瓶中,采用ECGS配合肝素培养液促进内皮细胞生长,观察细胞形状生长特性,并用免疫化学荧光方法进行鉴定。结果选择性培养视网膜微血管内皮细胞成单层、镶嵌铺路石状生长,Ⅷ因子相关抗原免疫荧光检测为阳性纯度均大于95%以上,将细胞种在凝固的基质胶表面,12～18h形成官腔结构。结论本方法过程简单、可靠,培养的内皮细胞纯度高,生长状态良好,稳定传代,为视网膜血管生成疾病研究建立了模型。
- 王征齐炜炜陈少波戴智育陈大伟程锐高国全杨霞
- 关键词：视网膜微血管内皮细胞细胞培养
- 人纤溶酶原K5体内抑制Lewis肺癌肿瘤生长与转移被引量：4
- 2008年
- 【目的】通过体内实验探讨人纤溶酶原Kringle 5(K5)对小鼠Lewis肺癌移植瘤生长与转移的抑制作用。【方法】采用腋下接种肿瘤细胞的方法建立Lewis肺癌细胞皮下种植瘤小鼠模型,分为PBS对照组和K5治疗组,观察各组肿瘤生长情况,测量肿瘤大小,制备小鼠体质量-时间曲线和肿瘤体积-时间曲线;采用皮下种植瘤剔除术建立Lewis肺癌自发性肺转移模型,术后分为PBS对照组和K5治疗组,观察各组小鼠肺组织转移瘤数量,取肺组织进行病理学分析。【结果】在皮下种植瘤模型中,与对照组相比,K5治疗组小鼠肿瘤体积-时间曲线变化平缓,肿块增长缓慢,肿瘤质量明显降低[分别为(4.57±0.79)g和(1.15±0.31)g,P=0.006];在Lewis肺癌转移瘤模型中,K5治疗组小鼠肺表面转移瘤结节数[分别为(15.75±9.79)个和(6.60±3.39)个,P=0.029]以及肺湿质量明显少于对照组,高倍镜下治疗组肺微转移灶数目亦较少。【结论】人纤溶酶原K5能显著抑制小鼠Lewis肺癌移植瘤的生长,并能明显抑制Lewis肺癌细胞转移。
- 蔡卫斌程锐徐祖敏杨霞杨中汉魏玲杨军高国全
- 关键词：肺癌肿瘤转移
- 突变型K5重组蛋白抑制小鼠肝癌血管生成和肿瘤生长的作用被引量：4
- 2008年
- 目的:体内实验观察人纤溶酶原K5缺失突变体Ⅰ(K5 mut1)对HepA小鼠肝癌血管生成和肿瘤生长的影响。方法:大肠杆菌中表达,组氨酸结合柱亲和层析、纯化获得K5 mut1蛋白,SDS-PAGE和Western blot-ting方法鉴定其表达;建立皮下种植肝癌小鼠模型,腹腔注射不同剂量K5 mut1重组蛋白,检测抑瘤率及肝癌组织微血管密度(MVD)。结果:SDS-PAGE及Western blotting鉴定获得K5 mut1纯化蛋白;K5 mut1剂量依赖性地抑制小鼠肝癌(HepA)实体瘤生长,不同剂量K5 mut1治疗组肝癌组织MVD低于对照组,并随K5 mut1用药剂量增加而降低。结论:K5 mut1具有抑制小鼠肝癌生长的作用,抑制肿瘤血管生成可能是K5 mut1抑制肿瘤生长的主要机制。结果提示K5 mut1具有治疗肝癌的潜在临床价值。
- 杨霞王青松程锐李朝阳蔡卫斌杨中汉李民友何光耀高国全
- 关键词：纤维蛋白溶酶原新生血管化病理性
- 具有抗角膜新生血管作用的滴眼液及其制备方法
- 本发明涉及一种以青蒿琥酯为原料的治疗眼角膜新生血管的滴眼液及其制备方法。青蒿琥酯滴眼液可由下列重量份的原料制成：青蒿琥酯0.0096－0.0384份；缓冲液中的酸性成分1.0032－12.028份；缓冲液中的碱性成分0....
- 高国全程锐
- 文献传递
- 青蒿琥酯、PEDF、K5抑制血管增生的作用及机制研究
- 主要研究内容和结果如下：
第一部分青蒿琥酯抑制角膜血管新生的作用及机制研究
1.青蒿琥酯抑制碱烧伤大鼠角膜血管新生的作用
构建大鼠碱烧伤角膜新生血管模型，于不同时间点测量各处理组角膜碱烧伤后角膜最长新生...
- 程锐
- 关键词：青蒿琥酯色素上皮衍生因子线粒体凋亡
- 文献传递
- '借脑'与'借手'——浅谈研究生与导师的互动学习
- 中国的研究生教育规模的逐年扩大给研究生教育的质量提出了挑战,保证并提高研究生教育质量成为了目前研究生教育的重点.而正确的研究生和导师的关系则是保证研究生教育质量的一个重要的条件.本文论述了一种适应当前社会发展的新的研究生...
- 杨霞程锐高国全
- 关键词：研究生教育师生关系互动学习高等医学教育教学质量
- 文献传递
- 海洋微生物次级代谢产物1403-B的抗胃癌活性被引量：1
- 2012年
- 目的筛选能被海洋微生物次级代谢产物1403-B显著抑制的肿瘤细胞,初步探讨其机制,为临床抗肿瘤提供候选药物。方法用2.5、5.0、10、20、40μmol/L 1403-B分别处理鼻咽癌细胞株(3种:HONE-1、CNE-2、5-8F),肝癌细胞株(2种:HepG2、Bel7402),胃癌细胞株(SGC7901)48 h后,MTT法检测细胞增殖的情况;荧光显微镜观察细胞形态学变化;用Annexin V/PI双染法分析其凋亡情况,Western印迹法检测caspase-3的切割。结果 MTT实验显示,1403-B呈浓度依赖性抑制多种肿瘤细胞的增殖(P<0.05),其中对胃癌细胞SGC7901的IC50最低,为(4.12±0.57)μmol/L。1403-B作用SGC7901细胞24 h后,出现细胞膜、细胞核皱缩,染色质浓集和形成包裹细胞核片段的凋亡小体等凋亡现象,且呈剂量依赖性增加。Annexin V/PI双染法显示,随着1403-B浓度增加,SGC7901凋亡率升高。1403-B促进SGC7901细胞caspase-3切割。结论海洋药物1403-B能够通过诱导SGC7901凋亡而显著抑制其增殖,有望成为一种抗胃癌的新药物。
- 叶芳段君婷程锐廖峭张洋杨霞高国全王继红
- 关键词：海洋微生物凋亡SGC7901CASPASE-3
- Lewis肺癌细胞趋化因子受体CXCR4表达的研究被引量：2
- 2008年
- 目的:观察趋化因子受体CXCR4在Lewis肺癌细胞和肿瘤组织中的表达,为探讨CXCR4与肿瘤转移的关系提供研究基础。方法:体外培养Lewis肺癌细胞,并建立Lewis肺癌细胞皮下种植瘤模型与自发性转移模型,采用RT-PCR和蛋白质印迹法分析培养细胞和肿瘤组织中CXCR4 mRNA及蛋白质表达水平;应用免疫组化方法分析Lewis肺癌原发瘤和转移瘤中CXCR4表达,并通过迁移实验观察CXCR4特异性配体SDF-1α对Lewis肺癌细胞的趋化作用。结果:培养Lewis肺癌细胞及肿瘤组织中均功能性地表达趋化因子受体CXCR4,且其表达水平与细胞所处氧环境有关;低氧能够促使Lewis肺癌细胞CXCR4蛋白表达增高,与对照组相比差异有统计学意义,t=4.051,P=0.009。12h细胞趋化运动实验显示,CXCR4特异性配体SDF-1α可剂量依赖性诱导Lewis肺癌细胞的趋化运动,在低氧条件下,同对照组相比SDF-1α质量浓度为25ng/mL时开始促进细胞迁移,t=3.053,P=0.031;SDF-1α质量浓度为50ng/mL时可明显提高细胞迁移率,t=4.521,P=0.004。结论:Lewis肺癌细胞功能性表达趋化因子受体CX-CR4,可能与肿瘤细胞迁移和转移有关。
- 蔡卫斌程锐徐祖敏杨霞杨中汉魏玲杨军高国全
- 关键词：受体趋化因子免疫组织化学
