肖志壮
- 作品数：6 被引量：84H指数：5
- 供职机构：山东大学生命科学学院微生物技术国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 过量DMSO显著降低低模板浓度PCR扩增的特异性被引量：10
- 2001年
- DMSO通常经验性地用于提高PCR扩增的效率 ,但是过量的DMSO可以显著降低特异序列的扩增效率 ,尤其是导致非特异性扩增的现象却被忽视。在 6 %的DMSO存在时 ,开始出现非特异条带 ,同时特异扩增产物减少。本文首次报道DMSO对PCR产物特异性的影响并确定了克服上述现象产生的途径 ,即通过增加模板 -引物的比例消除非特异条带。而通常提高复性温度只能部分减少非特异产物 ,不能避免非特异扩增。本文结果有助于提高常规PCR ,尤其是分子遗传学分析中经常使用的随机扩增多态性DNA (randomamplifiedpolymorphicDNA ,RAPD)检测的准确度。
- 肖志壮曲音波汪天虹高培基刘梦海
- 关键词：DMSOPCR特异性基因扩增
- 瑞氏木霉EGⅠ3′-UTR对基因在酿酒酵母中表达的影响被引量：12
- 2001年
- 将纤维素降解菌丝状真菌瑞氏木霉内切葡聚糖酶Ⅰ (EGⅠ )全长cDNA克隆于酿酒酵母H1 58中得到表达。重组酿酒酵母产生的EGⅠ的最适pH值为 5 0 ,最适作用温度为 50℃～ 60℃。EGⅠcDNA中的 3′ 非翻译区 (3′ UTR)序列的删除导致EGI基因在酵母菌中没有活性产物表达。通过RT PCR技术检测EGⅠmRNA转录水平的结果表明 ,带有 3′ UTR的EGⅠcDNA在酿酒酵母中具有明显的转录产物生成 ,但删除 3′ UTR之后的EGⅠcDNA却检测不到转录产物。这说明EGⅠ的 3′ UTR对基因在酵母菌中的表达具有重要作用。
- 肖志壮吴志红王婷曲音波高培基汪天虹
- 关键词：瑞氏木霉酿酒酵母
- 瑞氏木霉内切葡聚糖酶基因的克隆、表达及分子改造
- 该文首先采用刚果红染色从瑞氏木霉cDNA文库中分离得到一株具有CMCase活性阳性克隆,测序结果显示该基因所编码的蛋白质为瑞氏木霉内切葡聚糖酶Ⅲ(EndoglucanaseⅢ,EGⅢ).然后利用PCR方法从瑞氏木霉cDN...
- 肖志壮
- 关键词：瑞氏木霉随机突变
- 文献传递
- 蛋白质定向进化的研究进展被引量：10
- 2001年
- 定向进化是改造蛋白质分子的一种有效的新策略。主要是在实验室里模拟自然进化过程 ,通过由易错PCR、致突变菌株诱变等方法对编码蛋白质的基因进行随机诱变 ,由DNA改组、随机引导重组和交错延伸等方法进行突变基因体外重组 ,设计高通量筛选方法来选出需要的突变株。它不仅可快速产生工业上有用的新酶 ,而且对研究蛋白质的结构与功能的关系具有非常重要的意义。
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- 关键词：定向进化DNA改组蛋白质
- 筛选在非生长条件下突变体酶的新方法被引量：6
- 2001年
- 利用双层平板筛选由定向进化方法产生的瑞氏木霉内切葡聚糖酶III (EGIII)突变体文库 ,根据水解圈在平板上形成的速度判断酶活高低。采用这种方法在不同的筛选条件下分别筛选得到了几株在低温或碱性条件下高活性的EGIII突变体。比色法测定的酶活性与平板筛选结果一致。该方法的建立将使通过定向进化方法改造现有蛋白质 。
- 肖志壮王婷王攀曲音波高培基
- 关键词：瑞氏木霉
- 瑞氏木霉内切葡聚糖酶Ⅲ基因的克隆及在酿酒酵母中的表达被引量：48
- 2001年
- 采用刚果红染色法从瑞氏木霉cDNA文库中分离到一株具有CMCase活性的阳性克隆 ,测序结果显示该基因所编码的蛋白质为瑞氏木霉内切葡聚糖酶Ⅲ (EGⅢ )。对重组酿酒酵母所产生的EGⅢ进行了酶学性质分析 ,其最适pH为 5 0 ,最适温度为 60℃。检测了酿酒酵母蛋白质分泌系统组分SSO2和SEB1对EGⅢ分泌的影响。结果表明 ,在可过量表达蛋白质分泌系统组分SSO2的酿酒酵母H837中 ,EGⅢ的分泌量最高。由此分析 ,酿酒酵母SSO2蛋白可能在EGⅢ的分泌中 ,是一个限速步骤。通过PCR方法删除EGⅢ基因 5′端非翻译区的 98bp核苷酸序列使EGⅢ表达量提高了 5 3倍。这提示我们 ,瑞氏木霉的EGⅢ基因在酿酒酵母细胞中表达时 ,其mRNA 5′端先导序列中可能存在影响该基因表达水平的调控序列。
- 肖志壮王婷汪天虹曲音波高培基
- 关键词：瑞氏木霉酿酒酵母基因表达蛋白质分泌
