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抗阴道毛滴虫AP33单克隆抗体的制备及其功能初探: 2007年; 目的制备阴道毛滴虫(T.υ317株)黏附蛋白抗原(AP33)单克隆抗体并初步分析鉴定其功能。方法将制备和纯化的融合黏附蛋白33(rAP33)为抗原,免疫BALB／c小鼠,共免疫3次(抗原含量分别为100、50和100μg),每次间隔2周,末次免疫后3 d取小鼠脾细胞及SP2／0骨髓瘤细胞在聚乙二醇(PEG1500)作用下进行细胞融合,筛选出高滴度分泌的McAb杂交瘤细胞株,测定其免疫球蛋白亚类及其效价,蛋白质印迹(Western blotting)分析其特异性,间接免疫荧光实验(IFAT)进行定位,并初步探讨其体外对阴道毛滴虫黏附HeLa细胞的抑制作用。结果经筛选获得能稳定分泌抗AP33单克隆抗体的5株(4A2,4F11,4F8,4E7和4H11)杂交瘤细胞株,经免疫球蛋白类型和亚型鉴定为IgG1; ELISA和Western blotting分析显示,5株单抗均能与重组阴道毛滴虫AP33发生特异性结合;IFAT显示其中4株(4F11, 4F8,4E7,4H11)可识别培养的阴道毛滴虫,体外滴虫黏附抑制实验显示终浓度分别为200、200、400和200μg/ml,该4株单抗体外对滴虫黏附HeLa细胞的抑制率分别为50．08％,65．03％、50．70％和49．08％。结论制备的抗重组AP33单克隆抗体,体外对阴道毛滴虫黏附有较好的抑制功能。; 黄慧聪俞石芳蔡敏谭峰郑晓云潘长旺; 关键词：阴道毛滴虫单克隆抗体

快速诊断滴虫性阴道炎免疫层析试纸条的初步研制被引量：3: 2008年; 目的用胶体金标记抗阴道毛滴虫重组AP33单克隆抗体制备金标AP33 mAb,研制开发出一种能快速、简便、有效检测阴道毛滴虫感染的免疫层析(GICA)试纸条。方法采用柠檬酸钠还原法制备胶体金颗粒,标记抗阴道毛滴虫重组AP33单克隆抗体,选择最佳反应模式组装试纸条。用该试纸条检测滴虫性阴道炎患者及非滴虫性阴道炎患者白带中的靶抗原,鉴定方法的敏感性和特异性。结果用制备的免疫层析试纸条检测重组AP33抗原的最低量为20 ng/ml,其中以单克隆抗体4A2为包被抗体、单克隆抗体4F8为金标抗体的试纸条检测效果最佳。以湿片法为标准,用该试纸条检测60例滴虫性阴道炎患者白带,敏感性为90.0%(54/60);检测60例非滴虫性阴道炎患者白带,特异性为95.0%(57/60)。两法的总符合率为92.5%。结论GICA检测阴道毛滴虫特异性强、灵敏度高、简便快速,无需特殊仪器设备,有广泛应用价值。; 王雪玲蔡敏俞石芳黄慧聪潘长旺; 关键词：阴道毛滴虫单克隆抗体

阴道毛滴虫黏附蛋白65基因的克隆、表达及免疫反应性鉴定被引量：2: 2008年; 目的通过构建原核表达载体,获得阴道毛滴虫黏附蛋白65基因重组融合蛋白。方法分离并纯化培养阴道毛滴虫临床分离株,提取其总RNA,经RT-PCR扩其全长序列基因,T-A克隆测序后,连接表达载体PET-28a(+)。在E.coli(DE3)Plyss宿主菌中用不同浓度IPTG诱导目的蛋白的表达,采用Ni-NTA亲和层析法提纯AP65,SDS-PAGE检测表达和提纯效果。采用兔抗阴道毛滴虫全虫多抗鉴定其免疫反应性。结果克隆ap65基因与GenBank公布基因同源性高,在1mmol/LIPTG诱导下,AP65产量可占细菌总蛋白量的23%,提纯后蛋白纯度达到90%以上,且重组蛋白AP65能与兔抗阴道毛滴虫全虫抗体发生特异性结合。结论成功地构建了阴道毛滴虫ap65基因的原核表达系统,重组蛋白且有良好的免疫反应性,可为疫苗抗原的筛选及单克隆抗体的制备奠定基础。; 蔡敏王雪玲黄慧聪梁韶晖潘长旺; 关键词：阴道毛滴虫疫苗

兔抗阴道毛滴虫重组蛋白AP65多克隆抗体的制备、纯化及鉴定: 2008年; 目的制备、纯化并鉴定兔抗阴道毛滴虫重组蛋白AP65的多克隆抗体。方法日本大耳兔多次免疫重组蛋白AP65,间接ELISA法检测抗体效价,用饱和硫酸铵法和n protein A sepharose 4FF柱纯化多克隆抗体,Western blot检测免疫反应性。结果第3次加强免疫后,间接ELISA法检测血清效价达到1∶25600,用硫酸铵法纯化多克隆抗体纯度为56%,而后采用亲合层析柱n protein A sepharose 4FF再次纯化,纯度达到80%。Western blot鉴定兔抗重组蛋白AP65多克隆抗体能识别重组蛋白AP65。结论成功制备了高效价、高纯度的抗阴道毛滴虫重组蛋白AP65多克隆抗体。; 蔡敏张琼俞石芳潘长旺黄慧聪; 关键词：阴道毛滴虫重组蛋白多克隆抗体

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蔡敏