谢娜
- 作品数：14 被引量：42H指数：4
- 供职机构：华中科技大学同济医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生化学工程更多>>
- 融合自杀基因FCU1真核表达载体的构建与表达
- 2004年
- 目的 构建含有融合自杀基因FCU1的真核细胞表达载体 pEGFP FCU1,并转染肝癌细胞SMMC772 1,初步探讨FCU1/ 5 氟胞嘧啶 (5 FC)系统对体外培养细胞的生长抑制作用。方法 用SmaⅠ ,XhoⅠ两种限制性内切酶分别切割质粒 pEGFP C1和 pCIneoFCU1,所得载体片断和目的基因片断连接后转化 ,阳性重组子转染肝癌细胞SMMC772 1,以绿色荧光蛋白基因为报告基因 ,用G4 18筛选出阳性细胞克隆后 ,进行体外药物敏感实验。结果 酶切鉴定重组子阳性克隆率约为 6 0 % ,转染成功的细胞在荧光显微镜下可见绿色荧光 ;转染的细胞在 5 FC作用下其生长抑制率明显高于未转染细胞的生长抑制率 ,且旁观者效应显著。结论 自杀基因FCU1真核表达载体构建正确 ,转染细胞成功并获稳定表达 ,FCU1/ 5 FC系统对肝癌细胞SMCC772 1具有实验性的基因治疗作用。
- 谢娜林菊生吴斌文黎培员孔心涓宋东坡
- 关键词：融合自杀基因真核表达基因表达耐药性
- 新的核苷类化合物β-L-D4A的化学合成及体外抗HBV作用被引量：3
- 2005年
- 目的以D型谷氨酸为原料,通过一系列化学转化,合成了新的核苷类化合物βLD4A,并初步探索其体外抗HBV作用。方法合成βLD4A,用红外光谱、核磁共振氢谱和质谱确证目标化合物的结构,以2.2.15细胞(HepG2细胞进行HBV基因组转染后所得)培养为基础,Southern印迹法检测不同浓度化合物体外抑制HNVDNA复制作用,并求出50%抑制的药物浓度,即EC50。以四噻唑蓝(MTT)比色分析法检测不同浓度药物的细胞毒性,求出IC50。结果化合物βLD4A经红外光谱、核磁共振氢谱和质谱确证;2.2.15细胞培养上清液病毒DNA的Southern印迹、自显影结果显示病毒的抑制呈明显的浓度依赖性,计算出EC50为0.2μmol·L-1,胞内DNA的Southern印迹、自显影显示类似的结果;细胞毒性实验显示IC50为200μmol·L-1。结论体外实验显示βLD4A具有明显的抑制病毒DNA复制作用,且无明显的细胞毒性,TI值为1000,高于临床用Lamivudine(750),有望开发为临床抗HBV用药。
- 吴金明林菊生谢娜邱国福胡先明
- 关键词：Β-L-D4A化学合成乙肝病毒
- HBV RNA上La Protein结合位点的缺失对自身稳定性的影响
- 目的 研究乙型肝炎病毒(HBV)DNA上的突变所造成HBV RNA上La protein结合位点的缺失对HBV RNA在宿主细胞内稳定性的影响,评价HBV DNA上这个位点对HBV生命周期的重要性,从而寻找新的抗HBV靶...
- 林园园林菊生王晓燕谢娜周秀敏宋宇虎
- 关键词：乙型肝炎病毒DNA突变结合位点
- HBV RNA上La protein结合位点的缺失对自身稳定性的影响
- 目的:研究乙型肝炎病毒(HBV)DNA上的突变所造成HBVRNA上Laprotein结合位点的缺失对HBVRNA在宿主细胞内稳定性的影响,评价HBVDNA上这个位点对HBV生命周期的重要性,从而寻找新的抗HBV靶点.方法...
- 林园园林菊生王晓燕谢娜周秀敏宋宇虎
- 关键词：肝炎病毒突变
- 文献传递
- β-L-D4A体外抗乙型肝炎病毒作用及其机制被引量：7
- 2003年
- 目的 探索β-L-D4A体外抗乙型肝炎病毒(HBV)作用及其靶点,以明确其抗HBV复制作用的机制。 方法 β-L-D4A干预培养2.2.15细胞后,检测其抗HBV作用;提取细胞内复制核心颗粒,通过内源性聚合酶反应和活性胶实验检测聚合酶和逆转录酶的活性。 结果 β-L-D4A体外明显抑制HBV DNA的复制,并呈现浓度依赖性;内源性聚合酶反应显示β-L-D4A对聚合酶和逆转录酶活性均存在抑制作用,其IC50分别为0.51 μmol/L和0.5 5 μmol/L;外源性核酸为模板的活性胶实验显示聚合酶和逆转录酶活性无变化。 结论 β-L-D4A体外抗HBV作用环节可能在于其代谢物对HBV DNA复制的始动或DNA链延伸过程的不可逆抑制。需行引物结合实验进一步验证。
- 吴金明林菊生谢娜姜风超梁扩寰
- 关键词：Β-L-D4A体外抗乙型肝炎病毒作用
- 乙型肝炎病毒RNA上La蛋白结合位点缺失对S基因mRNA稳定性的影响被引量：4
- 2006年
- 目的研究乙型肝炎病毒(HBV):RNA上La蛋白结合位点的缺失对S基因mRNA在细胞内稳定性的影响,评价HBV RNA上这个位点对HBV生命周期的重要性,从而寻找新的抗HBV靶点。方法构建HBV突变载体, 使其转录出来的HBV RNA缺失La蛋白结合位点;计算机预测突变后这个位点所在的HBV RNA片段的二级结构;将未突变的HBV载体和HBV突变载体分别瞬时转染HepG2细胞;半定量逆转录聚合酶链反应法检测HBV S基因的 mRNA,酶联免疫吸附法检测乙型肝炎表面抗原。结果酶切鉴定和测序证明,成功构建了La蛋白结合相关位点部分碱基缺失的HBV突变载体——pHBV—mLa;突变后的HBV RNA二级结构同突变前的比较,完全改变;转染细胞后半定量逆转录聚合酶链反应法检测发现,突变后HBV S基因的mRNA水平显著降低(t'=12．703,P<0．05);酶联免疫吸附法检测发现突变引起乙型肝炎表面抗原表达明显下调(f=4_4．648,P<0．01)。结论HBV RNA上La蛋白的结合位点以及局部特殊二级结构的形成,影响着自身转录后的稳定性,对于HBV的生命周期至关重要。
- 林园园林菊生谢娜周秀敏宋宇虎
- 关键词：LA蛋白
- 两种甲胎蛋白启动子调控下PNP基因载体的克隆和表达差异性分析
- 2005年
- 目的:分别构建甲胎蛋白(α- fetoprotein,AFP)启动子AF 0 3和AFP杂合启动子[HRE]AF调控的 PNP基因表达载体,检测并分析两者的表达差异性。方法: 将AF 0 3和[HRE]AF启动子插入载体 pcDNA- 3 .0 中,构建肝癌特异表达载体pAF- 0. 3 和 p[HRE]AF;将 PNP基因分别插入 pAF -0 .3 和 p[HRE] AF中,构建两启动子调控的 PNP基因表达载体;通过酶切、PCR及测序鉴定各重组体。用脂质体介导法将两重组体转染不同细胞株,RT PCR检测 PNP基因在各细胞株中表达,分析两者表达的特点。结果: 两目的片段均正确插入相应载体,pAF- 0 3/PNP中的 PNP基因在 AFP阳性肝癌细胞中实现了靶向性表达,而p[HRE] AF/PNP 中的 PNP 基因则在AFP阳性和阴性肝癌细胞中实现了靶向性表达。结论: 两种 PNP基因表达载体是肝癌基因治疗中新型、高效、特异性的治疗载体。两者的成功构建为利用PNP/Mep -dR系统进行肝癌的靶向性基因治疗奠定了坚实的基础。
- 蔡晓坤林菊生刘址忠谢娜梁扩寰
- 关键词：甲胎蛋白类基因疗法
- 人遗传印记基因PEG10重组真核表达质粒的构建及其在转染细胞株中的表达被引量：5
- 2007年
- 目的构建人遗传印记基因PEG10的全长表达基因质粒,观察PEG10的过表达对人正常肝细胞及其非肝脏来源的对照细胞的作用。方法将PEG10基因全长cDNA直接连入真核细胞表达质粒pcDNA3．1hisC中,以脂质体介导的方法将该表达质粒pcDNA3．1hisC-PEG10转染入人正常肝细胞及其对照细胞,采用RT-PCR、Western blot、MTT、TUNEL等方法分析PEG10基因在正常人肝细胞及其对照细胞中的表达和功能。结果限制性酶切及DNA测序结果均说明所构建质粒为PEG 10全长表达质粒。该质粒经过稳定筛选后稳定表达于细胞内,促进人肝细胞的生长,抑制其凋亡,但对非肝脏来源的对照组细胞没有明显影响。结论PEG10全长表达质粒的构建为进一步研究PEG10基因的效应和机制提供了有利的工具,研究结果显示PEG10基因可以促进人正常胚肝细胞增殖并抑制其凋亡,但对非肝脏来源的对照组细胞人胚肾细胞株293细胞没有明显效应。
- 张琼谢娜王晓燕常莹林园园林菊生
- 关键词：转染质粒
- PEG10基因在不同转移潜能肝癌细胞中表达的定量分析被引量：12
- 2006年
- 目的通过对不同转移潜能的肝癌细胞株中PEG10基因(parternal express gene 10)表达水平的定量分析,探讨其作为肝癌转移基因的可能性。方法提取肝癌细胞株HepG2、MHCC-97L、MHCC-97H的RNA,反转录合成第一链cDNA,对反转录产物进行荧光定量PCR。用管家基因-βactin的cDNA起始浓度作为参照标化PEG10的cDNA起始浓度,对标化结果进行方差分析。结果HepG2、MHCC-97L、MHCC-97H标化后的PEG10 cDNA相对起始浓度分别为(3.15±0.05)×10-3(、5.06±0.03)×10-3(、6.14±0.09)×10-3,各肝癌细胞系之间PEG10表达量差异也存在极显著性意义(P<0.01)。结论PEG10基因表达水平与肝癌细胞的转移潜能呈正相关,可以推测PEG10基因可能是促使肝癌转移的癌基因。
- 张琼叶达伟常莹宋宇虎谢娜王晓燕林菊生
- 关键词：肝癌肿瘤转移荧光定量PCR
- 酶法水解在消旋体拆分中的应用被引量：1
- 2003年
- 目的 用特定的酶的不对称水解作用制备洛尔类 β 受体阻滞剂合成的重要中间体原料—S (- ) 2 ,3 二溴丙醇醋酸酯。方法 采用生物有机合成方法 ,应用手性试剂胰酶 ,对消旋体 (± ) 2 ,3 二溴丙醇醋酸酯进行拆分。结果 水解得到了S (- ) 2 ,3 二溴丙醇醋酸酯。结论 酶法水解用于消旋体的拆分为制备洛尔类 β
- 谢娜罗智项光亚林菊生
- 关键词：中间体酶法水解
