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hepaCAM基因转染对肾癌786-0细胞增殖和侵袭活性的影响被引量：2: 2009年; 目的:肝细胞粘附分子(Hepatocyte cell adhesion molecule,hepaCAM)是近年来发现的一类免疫球蛋白超家族细胞黏附分子,具有抑癌基因特性。本文研究hepaCAM基因转染对肾癌(Renal cell carcinoma,RCC)细胞786-0增殖和侵袭能力的影响。方法:将携有hepaCAM基因的重组质粒hepaCAM-pEGFPN2转染786-0细胞(实验组)后用G418筛选形成阳性克隆并扩增培养,以转染了pEGFPN2(空载组)和未转染的786-0细胞(空白组)为对照,采用逆转录—聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测hepaCAMmRNA的表达,四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT法)检测786-0细胞增殖活性,Transwell小室法检测细胞体外侵袭能力。结果:稳定转染hepaCAM后786-0细胞的hepaCAMmRNA表达水平明显上调(P<0.01),MTT显示实验组与空载组相比hep-aCAM基因抑制细胞成活率在4、5、6d分别为26.5%、38.1%、35.7%(P<0.01);侵袭实验显示细胞穿透ECM膜的数目为24.6±5.3(实验组)、35.5±6.23(空载组)和37.1±7.0(空白组),实验组细胞明显少于2对照组(P<0.01)。结论:抑癌基因hepaCAM转染能降低肾癌细胞786-0的增殖和侵袭活性。; 荀春华罗春丽吴小候谢建红杨淑哲潘翠翠; 关键词：转染肾癌细胞

shRNA沉默PLCε基因对肾癌786-0细胞增殖的影响: 第一部分 shRNA沉默PLCε基因对肾癌786-0细胞增殖的抑制作用目的：探讨经短发夹RNA(short hairpin RNA，shRNA)干扰技术沉默磷脂酶Cε(phosphol ipase C eps...; 谢建红; 关键词：肾癌 786-0细胞细胞增殖 SHRNA; 文献传递

RNAi沉默PLCε基因对膀胱癌BIU-87细胞株的增殖调控作用被引量：2: 2010年; 目的探讨RNA干扰技术沉默PLCε基因表达对膀胱癌BIU-87细胞株增殖的抑制作用.方法构建靶向PLCε基因特异性shRNA重组质粒pGenesil-PLCE,经脂质体介导转染BIU-87细胞株,蛋白质印迹法、RT-PCR方法检测PLCε在癌细胞蛋白及mRNA水平的表达,噻唑盐法观察重组质粒对BIU-87细胞增殖的抑制作用,免疫细胞化学染色分析增殖细胞核抗原（PCNA）含量改变,流式细胞仪检测细胞周期分布.结果构建的重组质粒pGenesil-PLCε能明显抑制PLCE基因表达,且能明显抑制BIU-87细胞增殖;转染重组质粒0、24、48和72 h后细胞增殖抑制率分别为2.01%、32.85%、39.78%、37.19%,重组质粒组与对照组、阴性质粒组比较,差异有统计学意义（P〈0.01）.细胞内PCNA表达下调了33.08%;G0/G1期细胞（71.50±4.48）%与空白对照组（40.75±2.30）%、阴性质粒组（40.00±1.76）%比较明显增多,G2/M期细胞（8.16±0.51）%与空白对照组（31.20±1.76）%、阴性质粒组（35.94±1.58）%相比减少.差异均有统计学意义（P〈0.01）,细胞阻滞于G0/G1期,细胞增殖状态受到明显抑制.结论 PLCε基因在促进膀胱癌细胞增殖中发挥莺要作用,可能成为膀胱癌生物学治疗潜在的分子靶点.; 郭永灿罗春丽蔡晓钟谢建红欧俐苹赵懿吕纯芳冀慧莹吴小候; 关键词：膀胱肿瘤 RNA干扰

shRNA沉默PLCε基因表达对肾癌细胞增殖的抑制及作用机制: 2008年; 目的:探讨经短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)干扰技术沉默磷脂酶Cε(phospholipase C epsilon,PLCε)基因表达后对肾癌786-0细胞增殖的抑制及其作用机制。方法:脂质体介导重组质粒(pGenesil-PLCε)和空质粒(pGenesil-NP)转染786-0细胞48 h后,RT-PCR检测PLCεmRNA的表达;MTT法检测转染24、48和72 h后细胞增殖的抑制率;转染48 h后采用FCM方法分析细胞周期;RT-PCR和免疫细胞化学法分析转染48 h后p27和Ki67的表达情况。结果:转染重组质粒后可明显抑制PLCεmRNA的表达,其抑制率为69.7%;转染24、48和72 h后细胞增殖抑制率分别为21.2%,31.6%和32.7%;FCM结果显示转染重组质粒后细胞周期的分布发生了改变,G0/G1期细胞增多,S期和G2/M期细胞减少,细胞阻滞于G0/G1期,并出现了亚二倍体"凋亡峰"。RT-PCR和免疫细胞化学结果均表明p27表达上调,而Ki67表达下调。结论:RNA干扰技术阻断PLCε基因表达后可抑制肾癌786-0细胞增殖,其作用机制可能是诱导p27表达上调和Ki67表达下调。; 谢建红罗春丽郭永灿冀慧莹吕纯芳荀春华; 关键词：肾细胞基因沉默磷脂酶C 细胞增殖

实时荧光定量PCR检测尿液CK20方法的建立: 2009年; 目的:建立一种简便、快速、灵敏度和特异性较好的定量检测尿液CK20方法,用于膀胱移行细胞癌(Transitional cell car-cinoma of the bladder,TCCB)早期诊断、预后及复发的评估。方法:培养膀胱癌T24细胞,针对CK20基因保守序列设计合成两对引物和Taqman探针,将PCR扩增产物片段克隆,作为定量检测的标准品,优化反应条件,建立快速检测CK20mRNA的实时荧光定量PCR方法,并进行方法学评价。结果:荧光定量PCR检测尿液CK20方法能较好的定量检出尿液CK20mRNA,检测范围为102～109copies/μl,灵敏度为102copies/μl,特异性好,批内、天间重复性(Coefficientofvariation,CV)分别为0.89%和2.45%。结论:成功建立了快速检测尿液CK20的荧光定量PCR方法,为进一步开发出用于TCCB早期诊断、预后及复发评估的定量检测试剂盒奠定了基础。; 郭斌罗春丽荀春华谢建红吴小候蒲军; 关键词：膀胱移行细胞癌 CK20 实时荧光定量PCR

HepaCAM基因转染对肾癌细胞侵袭活性的影响被引量：4: 2008年; 目的:研究肝细胞黏附分子(hepatocyte cell adhesion molecule,hepaCAM)基因转染对肾细胞癌(renal cell carcinoma,RCC)细胞株786-0侵袭能力的影响,并探讨其作用机制。方法:将携带hepaCAM基因的重组质粒hepaCAM-pEGFPN2转染786-0细胞后,用G418筛选形成阳性克隆并扩增培养,以转染了pEGFPN2和未转染的786-0细胞作为对照。采用RT-PCR和实时荧光定量PCR法检测hepaCAM和基质金属蛋白酶(matrixmetalloproteinase,MMP)-2和MMP-9 mRNA的表达,明胶酶谱法检测MMP-2和MMP-9的活性变化,Transwell小室法检测786-0细胞的体外侵袭能力。结果:稳定转染hepaCAM基因后,786-0细胞的hepaCAM mRNA表达水平明显上调(P<0.01),而MMP-2和MMP-9 mRNA的表达和酶活性明显受抑(P<0.05),hepaCAM基因的导入显著削弱了RCC细胞的跨膜侵袭能力(P<0.01)。结论:hepaCAM可能通过下调MMP-2和MMP-9的表达以及抑制明胶酶的活性,进而抑制肾癌细胞786-0的侵袭力。; 荀春华罗春丽吴小候谢建红杨淑哲潘翠翠; 关键词：肾肿瘤细胞黏附分子转染肿瘤侵袭基因

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谢建红