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绵羊胚胎干细胞的分离与增殖培养: 2015年; 研究了囊胚(胚龄、处理方法)、传代方法(机械法和酶法)及培养液对绵羊类胚胎干细胞生长的影响,建立了绵羊类胚胎干细胞的分离培养体系.结果表明,实验获得的体外受精胚用于类胚胎干细胞的分离,具有较好的增殖及传代能力;囊胚的质量和胚龄影响绵羊类胚胎干细胞的贴壁及增殖;机械切割(半胚法)处理囊胚,可获得跟免疫法相近的内细胞团贴壁率(半胚法46%,免疫法53.6%);添加了一定浓度的胎牛血清、细胞生长因子、胰岛素及维生素C的DMEM高糖培养液可一定程度地促进类胚胎干细胞的增殖,适于绵羊类胚胎干细胞的培养.; 刘春霞赵瑞媛周欢敏; 关键词：绵羊内细胞团胚胎干细胞传代

蒙古绵羊原始生殖细胞(PGCs)的分离培养与鉴定: 2012年; 本试验从绵羊胎儿的生殖嵴中分离出原始生殖细胞,经体外培养后进行了初步鉴定。为建立绵羊原始生殖细胞(primordial germ cells,PGCs)的培养体系,试验对比了不同培养条件对蒙古绵羊PGCs生长的影响,将得到的胚胎生殖细胞(EG细胞)作形态学、酶学和免疫荧光鉴定。结果表明:绵羊EG细胞集落隆起,边缘整齐,呈鸟巢状,细胞排列紧密;AKP染色为弱阳性;免疫荧光检测特异标志物Oct3/4呈弱阳性,SSEA-1、SSEA-3、SSEA-4、TRA-1-61、TRA-1-80呈强阳性。; 刘春霞赵瑞媛李少伟周欢敏; 关键词：绵羊原始生殖细胞

饲养层细胞对绵羊胚胎干细胞体外培养的影响: 2015年; 家畜胚胎干细胞（embryonic stem cell,ES细胞）的研究进展缓慢,绵羊ES细胞的研究虽早有报道,但仍未建立可稳定传代的细胞系。在已建立的绵羊体外受精发育体系的基础上,摸索了饲养层（Feeder）细胞对绵羊ES细胞生长的影响,包括在一定的丝裂霉素浓度下处理Feeder的时间、细胞种类、代数、接种密度及新鲜制备和冷冻复苏后的Feeder细胞,通过试验比较研究,目的在于筛选合适的饲养层细胞,为建立绵羊ES细胞体外培养体系奠定基础。结果表明,10μg/ml丝裂霉素C处理2~2.5h获得的1~5代的SEF和1~3代的MEF及两者的1∶1混合细胞都能较好地支持绵羊ES细胞的生长。; 赵瑞媛刘春霞李慧鹏王申元周欢敏; 关键词：绵羊饲养层细胞胚胎干细胞体外培养

牛肌肉生长抑制素基因打靶载体的构建与鉴定被引量：2: 2014年; 本试验旨在构建用于牛肌肉生长抑制素(MSTN)基因敲除的置换型打靶载体。基于已发布的MSTN基因序列,选取第3外显子约600bp作为靶位点,在其上、下游设计2条同源臂,分别为4.4和1.4kb。以pPNTⅢ为骨架载体,在其2个多克隆位点处插入同源臂,构建出置换型打靶载体MSTN-KO-pPNTⅢ。结果显示,经DNA测序及酶切鉴定证实1.4kb同源短臂和4.4kb同源长臂均正确插入基础载体中。结果表明,成功构建出牛MSTN-KO-pPNTⅢ打靶载体。; 朱和平吴凯峰苏小虎王一超周欢敏赵瑞媛张焱如; 关键词：肌肉生长抑制素基因基因打靶

蒙古绵羊肌肉生长抑制素基因敲除载体的构建被引量：1: 2015年; 针对蒙古绵羊肌肉生长抑制素(myostatin,MSTN)基因序列的第3外显子,选择设计并合成了含有限制性内切酶酶切位点及含有与敲除载体同源20bp碱基的2种引物。以蒙古绵羊的血液DNA为模板,利用PCR分别扩增出2套用于敲除载体的同源长短臂。将这2套同源长短臂分别连接到2个不同的基础载体pPNTⅢ和pEGFP-N1中,构建2套用于蒙古绵羊MSTN基因敲除的置换型打靶载体pPNTⅢ-S21-L32和pEGFP-N1-S0-L0,其中pPNTⅢ-S21-L32为含有正负筛选标记基因的传统敲除载体,pEGFP-N1-S0-L0为优化后正筛选标记基因为绿色荧光加强的敲除载体。经PCR、T载体连接、酶切鉴定和DNA测序证实,2套同源臂分别被正确插入到基础载体中。本研究构建的2套用于蒙古绵羊肌肉生长抑制素基因敲除的置换型打靶载体,为改善家畜产肉性状,增加肌肉质量奠定了基础。; 赵瑞媛时培文刘春霞邢燕平苏小虎周欢敏; 关键词：蒙古绵羊 MSTN基因基因敲除

绵羊胚胎干细胞的分离与增殖培养: 研究了囊胚(胚龄、处理方法)、传代方法(机械法和酶法)及培养液对绵羊类胚胎干细胞生长的影响,建立了绵羊类胚胎干细胞的分离培养体系.结果表明,实验获得的体外受精胚用于类胚胎干细胞的分离,具有较好的增殖及传代能力;囊胚的质量...; 刘春霞赵瑞媛周欢敏; 关键词：胚胎干细胞体外培养细胞分离; 文献传递

绵羊卵母细胞体外受精培养体系的建立与优化被引量：1: 2014年; 本试验对影响绵羊体外成熟和受精的因素进行了比较分析，以期建立并优化这一培养发育体系。从呼市屠宰场采集绵羊卵巢，抽吸卵巢表面2～6mm的卵泡卵母细胞，在体外进行成熟培养；成熟后的卵母细胞，与处理后的附睾精子共同培养进行受精。结果表明，添加10％～15％ESS，10μg／mLFSH，20μg／mLLH，1．5μg／mL17-βE2，100IU青霉素，100IU链霹素的TCM-199成熟培养液能较好地促进绵羊卵母细胞体外成熟。绵羊卵母细胞体外成熟培养22-24h，用附睾精液进行体外受精，用Sofaa，10％FBSSofaa高糖组合或CM，BM组合的发育液培养，置于38．5℃、三气（5％CO2、5％02、90％N2）、饱和湿度的条件下，可获得较高的卵裂率76．0％和囊胚率（31．1％）。; 刘春霞赵瑞媛周欢敏; 关键词：绵羊卵母细胞体外成熟体外受精

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赵瑞媛