赵莉霞
- 作品数：14 被引量：29H指数：4
- 供职机构：军事医学科学院生物工程研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金北京市自然科学基金国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 小鼠泛素结合酶UBE2W的抗体制备及组织表达谱分析被引量：6
- 2008年
- 泛素结合酶(E2)是蛋白泛素化修饰所需的第二个连接酶,在泛素转移和底物特异性识别过程中发挥着重要作用。UBE2W是一种新发现的E2酶,其果蝇属同源蛋白可能在光转导或视网膜变性过程中发挥作用,鼠和人同源蛋白功能未见报道。生物信息学分析UBE2W鼠源氨基酸序列,发现UBE2W具有典型的UBC结构域并在多种物种高度保守。通过构建UBE2W原核表达质粒,在大肠杆菌中表达并纯化了GST-UBE2W融合蛋白。以此纯化蛋白作为抗原免疫新西兰白兔制备抗UBE2W多抗血清,并利用制备的UBE2W抗原柱亲和纯化UBE2W多抗。为了检测纯化抗体特异性,在真核细胞中瞬时表达了myc-UBE2W融合蛋白,分别用myc单抗和UBE2W多抗进行Western blotting分析,结果表明获得了特异性的UBE2W抗体。利用此特异性抗体在小鼠脑、心脏、肾脏、肝脏、肺、肌肉、脾脏和睾丸等组织中均检测到了UBE2W的表达,且在小鼠睾丸中成年期表达最高。
- 张莹莹朱恒奇赵莉霞周晓巍黄培堂
- 关键词：泛素结合酶抗体组织表达谱
- Gas8蛋白的抗体制备及小鼠组织表达图谱分析
- 2009年
- 目的:制备Gas8抗体,并检测小鼠各组织中Gas8表达谱。方法:在大肠杆菌BL21(DE3)中表达His标签标记的Gas8融合蛋白,以纯化的Gas8重组融合蛋白为抗原制备兔Gas8多抗血清,进一步利用亲和纯化方法制备Gas8多克隆抗体;为确定Gas8抗体的特异性,通过免疫印迹方法检测瞬时表达的Flag-Gas8融合蛋白,同时以抗Flag单克隆抗体作为对照;利用制备的抗体通过Westernblot检测Gas8在小鼠各组织中的表达谱。结果:与Gas8特异性结合的抗体能够通过免疫法获得;利用制备的抗体检测到Gas8在小鼠心、肺、肾、脑、肝、脾、肌肉、睾丸各组织中均表达。结论:获得了特异性抗Gas8抗体,用该抗体可以检测到小鼠组织中Gas8的表达。
- 付宁赵莉霞朱恒奇周晓巍马学恩黄培堂
- 关键词：抗体组织表达谱
- 转铁蛋白受体单链抗体与链亲和素融合基因的克隆及其在大肠杆菌中的可溶性表达被引量：4
- 2006年
- 目的:转铁蛋白受体特异性富含于血脑屏障和肿瘤细胞的表面,是当前中枢神经系统疾病和肿瘤治疗中定向转运的重要靶标。拟获得在大肠杆菌中能高效可溶表达的转铁蛋白受体单链抗体与链亲和素(SA)的重组融合蛋白。方法:根据GenBank数据库报道的SA的核苷酸序列分段合成基因,连接后经PCR获得完整的基因片段,插入pGEM-T载体中测序。将序列正确的SA基因与大鼠转铁蛋白受体单链抗体基因ox26-scFv分别插入原核表达载体pTIG-Trx中,构建重组表达克隆pTIG-Trx/scFv-SA,并在大肠杆菌中诱导表达。ELISA检测融合蛋白的生物学活性。结果:对pGEM-T/SA克隆的测序结果显示,合成的SA基因与文献报道相符。重组融合蛋白在大肠杆菌中获得了可溶性表达,约占菌体上清总蛋白量的30%;ELISA结果表明该融合蛋白具备与转铁蛋白受体和生物素的结合的双重活性。结论:有活性的重组融合蛋白的获得为构建一个通用性的以转铁蛋白受体介导的血脑屏障和肿瘤转运靶向载体打下了基础。
- 颜冰赵莉霞黄培堂
- 关键词：转铁蛋白受体单链抗体链亲和素转运
- 抗转铁蛋白受体单链抗体的表达、纯化及活性测定被引量：4
- 2006年
- 根据转铁蛋白受体和转铁蛋白特异性结合的性质,利用亲和纯化的方法从胎盘中提取转铁蛋白受体。以转铁蛋白受体为抗原包被免疫管,从全合成人源噬菌体单链抗体库中筛选其抗体。对筛选到的抗体进行特异性鉴定后,将抗体基因插入表达载体pET22b(+),转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导后获得可溶性表达。HeLa细胞的免疫组化结果显示,表达的抗体可以与转铁蛋白受体结合。表达产物经Ni-NTA金属螯和层析柱纯化、脱咪唑后,从尾静脉注射小鼠。1h后,去除血液及毛细血管的干扰,在脑实质中检测到了抗体的存在,说明该抗体可以通过血脑屏障。
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- PARP10组织分布、相互作用蛋白及UV应激反应的分析
- 2009年
- 根据GenBank中公布的人多聚腺苷酸二磷酸核糖聚合酶10(PARP10)cDNA序列,设计并合成一对特异性引物,通过RT-PCR扩增293FT细胞mRNA,获得PARP10cDNA。将获得的cDNA克隆到pCMV-Myc和pEGFP-C1中,用免疫沉淀和激光共聚焦实验验证了PARP10和β-actin存在相互作用。然后,通过RT-PCR法发现该基因在小鼠体内表达的组织分布,组织表达谱显示该蛋白在各组织中均有表达;Westernblotting分析表明,UV造成的细胞损伤能够引起PARP10表达水平的增高。PARP10组织表达谱的确定,与β-actin相互作用的验证以及对UV的应激反应都为进一步研究PARP10的生物学功能奠定了基础。
- 于孟斌赵莉霞杨予涛杨志新张莹莹朱恒奇周晓巍黄培堂
- 关键词：UV组织表达谱免疫沉淀激光共聚焦
- 抗人转铁蛋白受体人源抗体及其应用
- 本发明涉及抗人转铁蛋白受体人源抗体及其应用，属于分子生物学领域。抗人转铁蛋白受体人源抗体，具有序列表SEQ ID No.1所示的单链抗体(scFv)氨基酸序列。本发明的优点是：人源抗体解决了靶向抗体的免疫原性问题，使其能...
- 颜冰黄培堂赵莉霞
- 文献传递
- NS1蛋白对宿主细胞的作用
- NS1为禽流感病毒中的非结构蛋白。在流感病毒复制的早期即有 NS1蛋白的大量表达,提示这种蛋白在流感病毒复制及与细胞蛋白的相互作用中发挥着重要作用。
- 赵莉霞周晓巍黄培堂
- 文献传递
- 抗人转铁蛋白受体人源抗体及其应用
- 本发明涉及抗人转铁蛋白受体人源抗体及其应用，属于分子生物学领域。抗人转铁蛋白受体人源抗体，具有序列表SEQ ID No.1所示的单链抗体(scFv)氨基酸序列。本发明的优点是：人源抗体解决了靶向抗体的免疫原性问题，使其能...
- 颜冰黄培堂赵莉霞
- 文献传递
- 抗转铁蛋白受体抗体的筛选和鉴定
- 2006年
- 目的:从全人源噬菌体抗体库中筛选抗转铁蛋白受体(TfR)的抗体。方法:从HeLa细胞中提取总RNA,分两段反转录TfR胞外区cDNA,经两轮PCR后,获得胞外区基因。测序正确后,将其插入表达载体pPROEXTMHTa中,并在E.coliBL21(DE3)中表达。目的蛋白通过NiNTA金属螯合层析柱进行纯化、复性。用复性的TfR包被免疫管,从库容为1013cfu/L的全合成人源噬菌体单链抗体库中,筛选抗TfR的抗体。结果:得到约1.9kb的TfR胞外区基因,该基因以包涵体的形式在大肠杆菌中表达;利用纯化、复性的TfR从抗体库中筛选到了8个可与人TfR特异性结合的单链抗体。结论:利用TfR在大肠杆菌表达的复性产物,可以筛选到与天然TfR特异性结合的单链抗体。
- 赵莉霞颜冰朱恒奇许龙黄培堂
- 关键词：噬菌体抗体库单链抗体
- 人转铁蛋白受体及其特异性抗体的制备
- 2006年
- 目的:从胎盘中提取转铁蛋白受体并获得抗转铁蛋白受体的抗体。方法:人新鲜胎盘组织被破碎后,用去污剂TritonX-100裂解细胞膜,释放膜蛋白。利用膜蛋白中的转铁蛋白受体能与铁-转铁蛋白复合物特异性结合的特性对其进行亲和纯化。对纯化得到的目的蛋白,经脱盐后进行ELISA及肽质量图谱分析,证明为所需的转铁蛋白受体后,以其包被免疫管,从全合成人源噬菌体抗体库中筛选抗体。结果:从人源噬菌体抗体库中筛选到5个能够与转铁蛋白受体特异性结合的噬菌体单链抗体。结论:以人源转铁蛋白受体为抗体,可从全人源噬菌体抗体库中筛选到其特异性的抗体。
- 赵莉霞颜冰朱恒奇许龙黄培堂
- 关键词：胎盘转铁蛋白受体噬菌体抗体库单链抗体
