郝俊
- 作品数：3 被引量：4H指数：1
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- 雷帕霉素对人CD4^+CD25^+调节性T细胞体外扩增的影响被引量：2
- 2012年
- 探讨有效的体外扩增人CD4^+CD25^+调节性T细胞(Treg)的方法以及雷帕霉素(rapamycin,RAPA)对人CD4^+CD25^+Treg细胞体外扩增的影响。采用免疫磁珠分离人外周血的CD4^+CD25^+Treg,并将实验分为3组:第1组在CD4^+CD25^+Treg培养体系中加入200 U/ml IL-2和包被CD3/CD28单克隆抗体的磁珠;第2组培养体系中除加入100 nmol/LRAPA以外,其余与第1组相同;第3组是CD4^+CD25^+Treg培养第12天后,将细胞进一步分选获取CD4^+CD25^+CD127^- Treg再继续培养,培养体系与第2组相同。实验结果显示,加RAPA培养的CD4^+CD25^+Treg细胞扩增效率比不加RAPA的低,但细胞的纯度明显提高(92%vs 65%)。而加RAPA培养的第2、3组CD4^+CD25^+Treg细胞在纯度上没有明显的差异。加RAPA培养的CD4^+CD25^+Treg细胞扩增后保持其无能状态。体外抑制实验显示体外扩增的CD4^+CD25^+Treg细胞对CD4^+效应T细胞增殖均有明显的抑制作用,而且加RAPA扩增的Treg细胞表现出更强的抑制功能。另外,与第1组体外扩增的Treg细胞相比,加RAPA扩增的Treg细胞表达低水平的IL-2和IFN-γ。实验证明雷帕霉素抑制了CD4^+ CD25^+Treg细胞中混杂的CD4^+效应T细胞的扩增,使用雷帕霉素可以提高体外扩增CD4^+CD25^+Treg细胞的纯度及其免疫抑制功能。
- 郝俊曹国番杨洁杨懿铭李振华杨燕范华骅
- 关键词：体外扩增雷帕霉素
- 无关第三方耐受型树突细胞对小鼠异基因骨髓移植后急性移植物抗宿主病的预防作用被引量：1
- 2012年
- 目的探讨无关第三方耐受型树突细胞（tDC）的生物学特性及其对急性移植物抗宿主病（aGVHD）的预防作用。方法用GM—CSF、IL-10和TGF—B1诱导培养D1小鼠骨髓源tDC，用流式细胞术检测细胞表型，用RT—PCR方法检测细胞因子基因表达情况。采用混合淋巴细胞反应法检测其体外对异基因小鼠CD4＋T细胞增殖的影响；将D1小鼠骨髓源tDC按不同剂量分组输注给aGVHD小鼠模型（B6--D2），观察受鼠一般状况、生存率、临床GVHD评分、血清中Thl／Th2细胞因子水平的变化，并以单纯aGVHD模型为对照组进行比较。结果流式细胞术检测结果表明tDC表达低水平的MHCⅡ分子（I—A／I—E）和共刺激分子（CD80、CD86、CD40）。RT—PCR结果表明，tDC低水平表达炎性细胞因子IL-12p40，但高水平表达免疫抑制性因子IL-10、TGF—β、FasL、IDO和精氨酸酶。无关第三方tDC在体外能够有效抑制异基因CD4＋T细胞的增殖，并且这种抑制效应与tDC的剂量有关；小鼠体内实验显示，aGVHD对照组小鼠在移植后18d内全部死亡；而接受无关第三方tDC输注组小鼠aGVHD症状均有所改善，其中输注10。tDC的受鼠有60％能存活至60d以上，无明显的GVHD症状。而输注10^3 tDC的小鼠仅有20％能存活至移植后第60天，输注10^5 tDC的小鼠则在移植后37d内全部死亡。移植21d时，输注10^3、10^4、10^5无关第三方tDC的小鼠血清内IL-10水平分别为（114．23±7．78）、（646．18±212．02）、（121．97±10．47）ng／L，10^4 tDC组显著高于其他组（P〈0．05）。结论经IL—10和TGF-β1诱导的无关第三方tDC在体外能够抑制CD4＋T细胞的增殖，对aGVHD有显著的预防作用，这种作用与tDC剂量和IL-10的高表达有关。过继性输注一定量的无关第三方tDC能显著延长aGVHD小鼠的生存期，有效预防异基因骨髓移植小鼠aGVHD的发生。
- 李贵苹杨洁郝俊杨懿铭任亚娜谢如锋范华骅钱开诚
- 关键词：移植物抗宿主病
- 同种异基因抗原特异性调节性T细胞的体外扩增被引量：1
- 2012年
- 目的建立用人B淋巴细胞体外获得大量的同种异基因抗原特异性调节性T(Treg)细胞的方法,以此检测扩增细胞的表型及其免疫无能性和免疫抑制性。方法第1轮扩增将免疫磁珠分选的人CD4+CD25+T细胞和人B淋巴细胞按1∶4体外混合培养,并加入外源白介素-2(IL-2)和抗-CD28;将第1轮扩增得到的Treg细胞用抗-CD3/CD28包被的免疫磁珠和IL-2刺激,做第2轮扩增以获得更多数量的抗原特异性Treg细胞,分为添加和或未添加免疫抑制剂雷帕霉素(RAPA)2组(n=3)。结果经过2轮的扩增后,在第2轮扩增中未添加RAPA组扩增1×103倍,纯度>80%;添加RAPA组扩增0.8×103倍,纯度>90%。添加RAPA组得到的Treg细胞的Foxp3、CT-LA4、CD39表达水平高于未添加RAPA组,但是HLA-DR变化不大;未添加RAPA组扩增得到的Treg细胞分泌低水平的IL-2、IL-17、IL-4和IFN-γ,而添加RAPA组得到的Treg细胞几乎不分泌上述各种细胞因子,前者表现出部分免疫反应无能性,后者表现出完全的免疫反应无能性,两者都表现出免疫抑制性功能特征。人B淋巴细胞扩增得到的抗原特异性Treg细胞能够极大地抑制同源抗原引起的免疫反应,而对多克隆刺激的免疫反应抑制能力较弱。结论用人B细胞体外扩增抗原特异性Treg细胞,再通过抗-CD3/CD28包被的免疫磁珠进一步刺激可以体外获得大量的抗原特异性的Treg细胞,加入RAPA后可有效地提高Treg细胞的纯度和免疫抑制力且呈现抗原特异性。
- 曹国番郝俊李振华杨燕杨懿铭杨洁任亚娜谢如峰范华骅钱开诚
- 关键词：TREG细胞抗原特异性体外扩增免疫磁珠
