郭晓彤
- 作品数：15 被引量：60H指数：3
- 供职机构：广州军区广州总医院更多>>
- 发文基金：陕西省科技攻关计划国家自然科学基金教育部“优秀青年教师资助计划”更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 构建携带hTERT I540-PTD融合基因表达框的穿梭质粒被引量：3
- 2005年
- 目的: 设计hTERTI540 PTD融合基因表达框并构建携带该表达框的穿梭质粒.方法: 根据hTERTI540表位、HIV 1TAT PTD和PTD4的氨基酸序列设计融合疫苗,然后根据哺乳动物偏爱密码子反翻译成基因序列.分段合成寡聚脱氧核糖核酸,磷酸化、退火后先后克隆至pSP72的BamHI EcoRI和XbaI BanHI之间.将经双酶切鉴定获得的阳性重组子进行基因测序.然后将hTERTI540 PTD融合基因表达框亚克隆至pDC315.结果: 测序结果表明hTERTI540 PTD和hTERTI540 PTD融合表达框的基因序列与设计完全一致.穿梭质粒pDC315 I540 PTD和pDC315 I540 PTD4经EcoRI酶切后均清晰可见 112bp电泳条带,与预测相符.结论: 成功获得了携带hTERTI540 PTD和hTERTI540 PTD4表达框的穿梭质粒pDC315 I540 PTD和pDC315 I540 PTD4,为制备以重组腺病毒为载体的I540 PTD基因疫苗、比较蛋白转导能力的强弱对基因疫苗免疫效能的影响奠定了基础.
- 郭晓彤张积仁刘文超任军李立文
- 关键词：癌症疫苗端粒酶逆转录酶肿瘤免疫疗法
- 使用hTERT启动子实现肿瘤特异性RNA干扰
- 2005年
- 目的:修饰hTERT核心启动子,构建shRNA表达载体,实现肿瘤特异性RNA干扰。方法:使用人工TATA盒修饰hTERT核心启动子,重建转录起点。将含有修饰后hTERT启动子的MluI/XhoI片段克隆至pGL3-OCP-shLuc的相应酶切位点,获得pGL3-mhTERT-shLuc。设计针对p53的shRNA编码序列,并以XhoI/XbaI克隆至pGL3-mhTERT-shLuc的相应酶切位点之间,获得pGL3-mhTERT-shp53。使用pGL3-mhTERT-shLuc与pGL3-control共转染人骨肉瘤细胞U2OS、MG-63和HOS,48h后测定虫荧光素酶活性,计算相对活性。使用pGL3-mhTERT-shp53不同的人骨肉瘤细胞,利用Western Blot分析转染前后p53的表达水平。结果:双酶切鉴定和DNA测序证实pGL3-mhTERT-shLuc和pGL3-mhTERT-shp53的序列与设计完全一致。pGL3-mhTERT-shLuc与pGL3-control共转染实验发现,在hTERT-U2OS细胞虫荧光素酶相对活性与对照组相比没有明显差异,而在hTERT+的MG-63和HOS细胞在转染后虫荧光素酶相对活性显著降低,与对照组相比抑制效率可分别达到69.7%和71.0%。Western Blot分析表明,与转染pGL3-mhTERT相比,使用pGL3-mhTERT-shP53转染MG-63和HOS后可显著抑制p53的表达,而U2OS的p53的表达水平与对照组没有明显改变。结论:我们成功使用TATA盒对hTERT核心启动子进行了修饰,利用其构建了shRNA表达?
- 李立文胡蕴玉舒茂国王臻郭树忠郭晓彤
- 关键词：RNA干扰荧光素酶骨肉瘤
- 人ALK-1近端启动子的生物信息学分析被引量：1
- 2005年
- 目的:对人ALK-1启动子进行生物信息学分析。方法:从Genebank获取人类基因组序列和人ALK-1 mRNA序列,使用FirstEF程序分析并获得ALK-1近端启动子序列,并使用MatInspector程序对启动子序列中的转录因子结合位点进行预测。结果:使用FirstEF程序成功获得了长度为1Kb的人ALK-1近端启动子序列。MatInspector程序分析该启动子中共含有136个顺式转录调控元件,包括多种早期生长反应基因家族成员、Myc相关锌指蛋白家族成员和Ets家族成员等。值得注意的是在ALK-1启动子中含有6个KLF6结合元件,提示ALK-1参与创面愈合和组织重建过程。结论:获得了人ALK-1近端启动子的转录调控信息,推测KLF6可强烈诱导ALK-1基因表达。
- 舒茂国郭树忠郭晓彤王昕红李立文
- 关键词：启动子生物信息学
- Ki67,VEGF和EGFR的表达与鼻咽癌临床分期及分化程度的关系被引量：15
- 2009年
- 目的研究Ki67,VEGR及EGFR的表达与鼻咽癌(NPC)临床分期、分化程度之间的关系。方法应用免疫组化分析32例NPC Ki67、VEGF及EGFR的表达。结果(1)Ki67、VEGF及EGFR在32例NPC中的阳性表达率分别为84.4%(27/32),84.4%(27/32),78.1%(25/32)。(2)晚期(Ⅲ,Ⅳ期)鼻咽癌患者Ki67、VEGF及EGFR阳性表达率分别为100%(20/20)、100%(20/20)及95%(19/20)均明显高于早期(Ⅰ,Ⅱ期)患者的表达率,分别为58.3%(7/12)、58.3%(7/12)及50%(6/12),差异均有显著性(P<0.05);有颈部淋巴转移患者的Ki67、VEGF及EGFR阳性表达率分别为96.1%(25/26)、92.3%(24/26)及88.5%(23/26),均明显高于无颈部淋巴转移患者的表达率,分别为33.3%(2/6)、50%(3/6)及33.3%(2/6),差异均有显著性(P<0.05);未分化癌Ki67、VEGF及EGFR阳性表达率分别为100%(10/10)、90%(9/10)及80%(8/10),均高于低分化癌患者的表达率77.2%(17/22)、81.8%(18/22)、77.3%(17/22),但差异均无显著性(P>0.05)。结论(1)鼻咽癌中存在着Ki67、VEGF及EGFR的高表达;(2)Ki67、VEGF及EGFR均与鼻咽癌的临床分期及有无颈部淋巴转移有相关性,均与病理分化程度无相关性。
- 潘艳东黎静李志强郭晓彤宣敏陈娜李陆振陈晓东王卓才陈炳旭张伟陈敬文
- 关键词：鼻咽肿瘤KI67VEGFEGFR
- 干细胞动员时提前应用粒系集落刺激因子对患者发热及感染的影响被引量：3
- 2007年
- 背景与目的：造血干细胞移植一直被广泛应用于恶性肿瘤和恶性血液系统疾病的治疗,甚至在一些良性疾患中也有应用,如再生障碍性贫血等。造血干细胞的动员也同样被广泛应用。由于移植过程中的高风险,任何能够增加造血干细胞的回收率和简化造血干细胞采集的方法都有望提高造血干细胞移植的成功率。因此本文研究旨在观察提前给予粒系集落刺激因子（在白细胞介于1×10^9-2×10^9/L时）,是否影响干细胞采集的数量和患者感染、发热的发生率。方法：对70例恶性肿瘤患者按随机单双号顺序进入A组和B组。全部患者给予环磷酰胺4 g/m2化疗,分别在白细胞≤1×10^9/L后（A组）和介于1×10^9-2×10^9/L（B组）时,皮下注射粒系集落刺激因子（惠尔血）5μg/kg。在白细胞回升至2×10^9/L以上时,分2-3次采集外周血造血干细胞,同时计数单个核细胞和CD34＋细胞数量。结果：A组采集单个核细胞数量平均为4.34×10^8/kg;B组为3.8×10^8/kg（P〉0.75）。CD34＋细胞A组为2.62×10^6/kg;B组为2.97×10^6/kg（P〉0.9）。感染、发热的发生率A组为18/33;B组为8/35（P〈0.01）。结论：提前给予粒系集落刺激因子（G-CSF）不会影响外周血造血干细胞采集的数量,而发热和感染的发生率却显著降低。
- 盛蓉刘文超薛妍郭晓彤斯小明黄颖
- 关键词：粒系集落刺激因子动员干细胞
- 男性乳腺癌的临床研究进展被引量：15
- 2007年
- 男性乳腺癌发病罕见,过去25年间发病率呈上升趋势。目前对男性乳腺癌生物学、自然病程以及治疗策略的研究大部分是基于对女性乳腺癌的研究成果。男性乳腺癌的发病风险因素包括BRCA2基因突变和职业因素,而职业因素又包括高温工作环境、燃料和尾气;此外,性激素失衡,如生殖腺功能失调、肥胖、辐射等均可增加患病风险。临床病情进展可缓慢或快速转移。病理类型绝大多数为导管癌,10%为导管原位癌。常采取的手术是乳房切除术和腋窝淋巴结清扫或前哨淋巴结活检术。放疗步骤和方法同女性乳腺癌。由于90%的男性乳腺癌患者雌激素受体阳性,因此他莫昔芬是标准的辅助内分泌治疗药物,个别病例也可从化疗中获益。本文对近年有关男性乳腺癌的流行病学、生物学和治疗方面的相关内容进行总结。
- 薛妍郭晓彤刘文超
- 关键词：乳腺肿瘤流行病学
- 还原型谷胱甘肽预防表柔比星心肌毒性的临床观察被引量：10
- 2007年
- 目的:探讨还原型谷胱甘肽防治表柔比星心肌毒性的疗效。方法:共116例乳腺癌术后患者入组并随机接受4周期TA方案化疗+还原型谷胱甘肽(治疗组)治疗或仅TA方案化疗(对照组);利用心电图和AHA心功能评价标准评价两组患者的心脏毒性。结果:116例乳腺癌患者随机分入治疗组(60例)和对照组(56例),化疗后治疗组8例患者心电图诊断异常,比率为13.3%,对照组14例,比率为25%,两组比较有显著性差异(P<0.05);治疗组化疗前后心功能无改变,对照组经化疗后有3例出现心功能Ⅱ级,差别无统计学意义(P>0.05)。结论:本研究证实还原型谷胱甘肽可防治表柔比星的心肌毒性,可提高表柔比星化疗后患者生活质量。
- 喻召才刘文超范黎郭晓彤程婕
- 关键词：还原型谷胱甘肽表柔比星乳腺癌心肌毒性
- RT-PCR检测乳腺癌患者外周血表皮生长因子受体和细胞角质蛋白-19mRNA的表达被引量：2
- 2005年
- 目的 探讨逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR )方法检测乳腺癌患者外周血表皮生长因子受体(EGFR)mRNA作为乳腺癌循环肿瘤细胞标志的可能性及意义。方法 以转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法,分别对40例乳腺癌患者和30例健康人静脉血进行EGFRmRNA检测,同时与目前研究较多的循环上皮细胞标志:细胞角质蛋白CK-19的mRNA做比较。结果 在30例健康人外周静脉血中没有发现EGFRmR NA的表达( 0% ),但有8例CK-19阳性( 26. 7% )。而40例乳腺癌患者检测出13例EGFRmRNA阳性(32. 5% ),与正常人相比P<0. 01,两组间存在显著性差异;CK-19的mRNA阳性例数为14 (35. 0% ),与正常人相比P>0. 05,两组间无统计学差异。通过免疫组化检测到25例( 62. 5% )的肿瘤组织中EGFR阳性,所有外周血中EGFRmRNA阳性的病例,相应的原发肿瘤病灶中EGFR蛋白均为阳性,组织中EGFR蛋白高表达的患者外周血EGFRmRNA检出率也高(P<0. 01)。26例初治患者中5例EGFRmRNA阳性(19. 2% ),14例复治患者中8例EGFRmRNA阳性(57. 1% ),两组相比P<0. 05,存在显著性差异。6例曾使用过紫杉醇类药物挽救化疗的转移性患者中1例EGFRmRNA阳性(16. 7% ), 8例未使用过紫杉醇类药物挽救化疗的转移性患者中7例EGFRmRNA阳性(87. 5% ),两组相比P<0. 05,存在显著性差异。
- 李锋任军贾军尤向辉汪海丹张燕军郭晓彤贠军斯晓明
- 人ALK-1的克隆和真核表达载体的构建被引量：1
- 2005年
- 目的:克隆人ALK-1基因并构建其真核表达载体.方法:设计ALK-1特异性引物,提取人胚胎肺组织总RNA,用RT-PCR方法获取人ALK-1 cDNA.将ALK-1 cDNA克隆至pcDNA3.1/myc-His(-),双酶切鉴定并测序后,转染HEK293细胞.用Western Blot检测目的蛋白的表达.结果:成功获得人ALK-1全长cDNA,双酶切鉴定证实成功构建pcDNA3.1(-)/ALK-1.测序结果表明ALK-1全长cDNA与GeneBank中ALK-1序列完全一致.转染HEK293细胞后,可检测出Mr约为62×103的目的蛋白.结论:获得了ALK-1全长cDNA并成功构建了ALK-1真核表达载体,证实pcDNA3.1(-)/ALK-1转染HEK293细胞后可表达ALK-1蛋白,为深入研究ALK-1介导的TGFβ信号转导通路在创面愈合以及瘢痕疙瘩发生,发展中的作用奠定了基础.
- 舒茂国郭树忠王昕红郭晓彤李立文4
- 关键词：基因表达
- RT-PCR构建人甲胎蛋白全长基因真核表达载体
- 2005年
- 目的 采用反转录PCR(RT-PCR)构建人甲胎蛋白 (Alpha-Fetoprotein, AFP)全长基因真核表达载体,为下一步应用以AFP蛋白为靶点的基因治疗作准备。方法 体外培养人肝癌细胞HepG2,Trizol裂解细胞,提取总mRNA。设计含有特定酶切位点BglⅡ,SalⅠ和真核启动元件Kozak序列的RT-PCT正反向引物,采用RT-PCR法克隆AFP全长cDNA,使用BglⅡ +SalⅠ双酶切载体pEGFP-C3载体和AFPcDNA,将AFPcDNA连接载体pEGFP-C3,构建新的真核表达载体,命名为pEGFP-AFP。结果 通过测序证明pEGFP-AFP真核表达载体含有AFP全长基因。结论:本研究成功构建人甲胎蛋白基因真核表达载体pEGFP-AFP,为进一步的分子试验和基因治疗打下了基础。
- 贾军任军李峰李立文郭晓彤斯晓明
- 关键词：甲胎蛋白
