郭焕成
- 作品数：41 被引量：59H指数：4
- 供职机构：军事医学科学院军事兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家科技支撑计划国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学自动化与计算机技术医药卫生更多>>
- 委内瑞拉马脑炎病毒一步法荧光定量RT-PCR方法的建立被引量：5
- 2015年
- 委内瑞拉马脑炎(Venezuelan equine encephalitis,VEE)是由委内瑞拉马脑炎病毒(Venezuelan equine encephalitis virus,VEEV)复合物引起的一种人兽共患病。我国目前尚无该病,因此建立一种快速准确的检测方法对预防和控制该病至关重要。本研究通过分析委内瑞拉马脑炎病毒nsp1基因序列的保守性,设计了一对能检测VEEV复合物所有亚型毒株的特异性引物和Taqman探针。通过反应体系和反应条件优化,建立了检测委内瑞拉马脑炎病毒复合物的一步法实时荧光定量RT-PCR方法。该方法检测VEEV经体外转录获得的RNA,检测的灵敏度达3.27×102拷贝/μL。以该方法检测与VEEV同属的东方马脑炎病毒(EEEV)和西方马脑炎病毒(WEEV)nsp1基因相同区段的RNA以及同属的基孔肯雅病毒(CHIKV),结果均为阴性,表明该方法具有良好的特异性。该方法将为可能在我国出现的委内瑞拉马脑炎的侦检提供有效技术手段。
- 千莎莎何彪涂忠忠郭焕成涂长春
- 关键词：委内瑞拉马脑炎病毒
- 猪瘟病毒2.1b基因亚亚型野毒株的体外细胞传代适应与全基因组序列分析被引量：2
- 2015年
- 利用RT-PCR从广东某猪场疑似猪瘟(Classical swine fever,CSF)病例中检测出CSFV,并对扩增的E2全长基因进行了序列测定和系统进化分析。结果表明:引发该起猪瘟疫情的毒株属于CSFV 2.1b基因亚亚型,命名为GD176。为了进一步了解该毒株的复制特点,利用PK-15细胞对GD176进行了体外细胞适应性传代,并对获得的细胞适应毒GD176-F46进行了全基因组测序。结果表明:GD176通过在PK-15上不断传代,最终获得了高滴度的适应毒株,其滴度从第6代的102.61TCID50/m L提高至第46代的108.06TCID50/m L。病毒生长动力学结果显示,GD176-F46在感染后72 h病毒滴度达到最高值(108.17TCID50/m L)。为进一步分析GD176在细胞传代适应过程中的稳定性,对不同代次细胞毒的E2全长基因进行扩增和序列测定,结果发现:GD176-F0与GD176-F6、F10、F15、F20、F25、F30、F35、F40和F46的E2基因序列完全一致,这表明囊膜蛋白E2在病毒适应PK-15细胞过程中非常稳定。通过比对GD176和其他2.1亚型毒株各蛋白的氨基酸序列发现,不同毒株之间同源性最小的病毒蛋白是NS5A,低于病毒囊膜糖蛋白E2。获得了高度适应PK-15细胞的GD176细胞毒,为进行病毒毒力评价、复制和致病特性研究奠定了基础。
- 谢晓明张莉吕宗吉龚文杰郭焕成涂长春王全凯
- 关键词：猪瘟病毒全基因组
- Shotgun质谱筛选与猪瘟病毒囊膜蛋白E^rns相互作用的候选宿主蛋白
- 2013年
- 猪瘟病毒(CSFV)Erns蛋白是瘟病毒属成员特有的囊膜糖蛋白,在病毒吸附和侵入靶细胞过程中发挥重要作用。本研究利用Erns特异性抗体对CSFV石门强毒株感染的PK-15细胞进行免疫共沉淀(Co-IP),对获得的蛋白复合物进行Shotgun质谱鉴定。结果显示,与阴性对照相比,病毒感染细胞样品中含有199种差异蛋白,其中可能包含与Erns作用的宿主细胞蛋白。同时,实验还对Co-IP蛋白样品进行SDS-PAGE,切取差异条带进行质谱分析以进一步验证Shotgun技术的蛋白筛选结果。通过Co-IP和Shotgun质谱分析,本研究筛选出一些可能在CSFV生命周期中与Erns互作用的宿主蛋白,为进一步研究CSFV在宿主细胞中的感染和复制的分子机制奠定基础。
- 尹凝蒋大良龚文杰郭焕成谢金鑫夏乐乐余兴龙涂长春
- 关键词：猪瘟病毒蛋白质相互作用SHOTGUN
- 猪瘟病毒基因分型寡核苷酸芯片方法的建立
- 根据猪瘟病毒(CSFV)E2基因序列，设计了41条针对CSFV 3个基因群共10个基因亚群各亚群特异性寡核苷酸探针。利用欧盟猪瘟诊断手册中推荐的CSFVE2基因套式RT-PCR方法，在内套PCR过程中进行Cy3-dCTP...
- 郭焕成席进涂长春
- 关键词：猪瘟病毒寡核苷酸芯片基因分型
- 文献传递
- 猪瘟病毒亚基因复制子及其细胞系的构建被引量：3
- 2016年
- 为探索猪瘟病毒(CSFV)的复制机理,本实验在前期CSFV流行株GD53全基因组测序的基础上,利用新霉素抗性基因(Neor)替换病毒结构蛋白基因以构建CSFV GD53株的亚基因组复制子(GD53-SGR)。首先构建含有T7-5'UTR-N^(pro)-Neor-EMCV/IRES-NS2-NS3-NS4A-NS4B-NS5A-NS5B-3'UTR的重组质粒pc DNA-GD53-SGR,将其利用T7 RNA聚合酶经体外转录制备的RNA转录本转染猪睾丸细胞系(ST)后,利用G418筛选含有GD53-SGR的ST细胞,构建ST-GD53-SGR细胞系。酶切鉴定及测序结果表明,重组质粒pc DNA-GD53-SGR构建正确,利用T7 RNA聚合酶体外转录后获得了与预期大小一致的GD53-SGR RNA。经RT-PCR和间接免疫荧光鉴定结果表明,获得了含有GD53-SGR的ST细胞系。本研究构建的CSFV ST-GD53-SGR细胞系有助于进一步了解CSFV非结构蛋白的功能,同时为CSFV的复制机制研究及抗病毒药物的研发奠定基础。
- 张莉谢金鑫蒋大良余兴龙贾俊杰郭焕成龚文杰涂长春
- 关键词：猪瘟病毒ST细胞
- 猪瘟病毒感染猪外周血白细胞凋亡及CD4^＋和CD8^＋T淋巴细胞亚群的变化被引量：12
- 2008年
- 为了解猪瘟病毒(CSFV)石门株强毒感染对免疫细胞的影响以及免疫细胞的变化动力学,用流式细胞仪对人工感染猪的白细胞凋亡以及CD4+和CD8+T淋巴细胞亚群的动态变化规律进行了检测。结果表明,攻毒后CD4+和CD8+T淋巴细胞比例急剧下降,CD4+T淋巴细胞比例在攻毒后第4 d和第7 d分别由攻毒前的26.87%下降到8.83%和13.86%,CD8+T淋巴细胞比例由攻毒前的28.17%分别下降到14.19%和17.55%。外周血白细胞凋亡的检测结果显示,发病初期感染组凋亡细胞和早期凋亡细胞均显著高于对照组,表明CSFV诱导细胞凋亡是导致免疫细胞减少和免疫抑制的主要原因。
- 孙金福史子学郭焕成涂长春
- 关键词：猪瘟病毒CD4^+T淋巴细胞CD8^+T淋巴细胞
- 猪瘟病毒感染猪外周血白细胞凋亡及CD4+、CD8+T淋巴细胞变化动力学
- 砖瘟病毒(CSFV)感染可导致猪白细胞减少和免疫抑制,为了进一步了解猪瘟病毒石门株强毒感染对免疫细胞的影响以及免疫细胞的变化动力学,本研究用流式细胞仪对人工感染猪的白细胞凋亡和CD4、CD8T淋巴细胞亚群的动态变化规律进...
- 孙金福史子学郭焕成涂长春
- 关键词：猪瘟病毒T淋巴细胞CD8+T淋巴细胞
- 文献传递
- 猪瘟病毒蛋白E2、N^(pro)基因的克隆表达及纯化被引量：2
- 2012年
- 克隆了猪瘟病毒(CSFV)石门株E2和Npro基因,并分别插入pGEX-6p-1表达载体中,构建了原核重组表达质粒。经IPTG诱导后,应用SDS-PAGE电泳检测结果表明,重组质粒均得以成功表达。使用超声法破碎菌体获得蛋白,将带有GST标签的融合蛋白进行亲和层析,其中E2和Npro的表达形式分别为包涵体表达和可溶性蛋白表达。将E2变性后重折叠,应用亲和层析法纯化蛋白,Western blot检测发现CSFV蛋白E2能够被CSFV阳性血清识别,具有良好的反应原性,而Npro不能与CSFV阳性血清反应。
- 高璐璐张思春郭焕成涂长春
- 关键词：猪瘟病毒E2蛋白原核表达
- CSFV感染后宿主凋亡相关基因表达变化研究
- 利用基因表达谱分析感染CSFV后猪基因组转录水平表达差异.对CSF抗体及病毒RNA检测阴性约60日龄长白仔猪颈部肌肉注射10TCIDCSFV石门株血毒,以攻毒前和攻毒后猪自体PBWC作为样品,提取白细胞基因组RNA,用A...
- 史子学孙金福郭焕成涂长春
- 关键词：猪瘟病毒基因芯片
- 文献传递
- 猪瘟病毒基因分型寡核苷酸芯片方法的建立
- 猪瘟病毒(CSFV)E2基因序列，设计了41条针对CSFV 3个基因群共10个基因亚群各亚群特异性寡核苷酸探针。利用欧盟猪瘟诊断手册中推荐的CSFV E2基因套式RT-PCR方法，在内套PCR过程中进行Cy3-dCTP掺...
- 郭焕成席进涂长春
- 文献传递
