钟彦伟
- 作品数：218 被引量：804H指数：19
- 供职机构：中国人民解放军第三〇二医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金Scientific Research Foundation for the Returned Overseas Chinese Scholars, State Education Ministry北京市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 丙型肝炎病毒基因工程抗体研究
- 成军钟彦伟王刚刘妍施双双董菁李莉张玲霞陈菊梅
- 该课题组进行了丙型肝炎病毒基因工程抗体研究。研究HCV抗原靶位的基因工程抗体并进行人源化，为HCV诊断、治疗和预防开辟新途径。应用噬菌体抗体库技术，获得特异性的HCV人源化基因工程抗体。利用分子生物学和免疫学等技术进行上...
- 关键词：
- 关键词：丙型肝炎病毒人源基因工程抗体免疫组化
- 丙型肝炎病毒包膜蛋白E2可溶性单链可变区抗体在大肠杆菌中的表达被引量：20
- 2001年
- 利用分子生物学技术 ,构建表达丙型肝炎病毒 (HCV)包膜蛋白E2的人源单链可变区抗体 (ScFv)的原核表达载体 ,并在大肠杆菌JM10 9中表达可溶性的HCV E2 ScFv。以重组的HCVE2蛋白为包被抗原 ,利用噬菌体抗体库的表面展示技术 ,筛选到含有HCV E2 ScFv基因的噬菌体克隆 ,从噬菌体抗体阳性克隆中提取质粒 ,经Ncol/NotI酶切鉴定后 ,该ScFv基因由 75 0bp组成 ,将其亚克隆到pCANTAB5E载体中 ,转化大肠杆菌JM10 9,提取质粒进行DNA序列测定 ,符合ScFv的基因结构特点。IPTG诱导转化的大肠杆菌JM10 9,在其培养上清中获得了可溶性HCVE2单链可变区抗体的表达。酶联免疫吸附法 (ELISA)证实表达的HCV E2 ScFv具有与重组HCVE2蛋白的反应活性和特异性 ,对转化的JM10 9大肠杆菌上清中表述的HCV E2 ScFv进行聚丙烯酰胺凝胶电泳 (PAGE) ,证实表达的HCV E2 ScFv的分子量为 2 8kD。为应用HCV E2 ScFv进行肝组织免疫组织化学和细胞内免疫基因治疗研究奠定了基础。
- 成军施双双钟彦伟夏小兵王刚王琳刘妍陈菊梅
- 关键词：丙型肝炎病毒包膜蛋白单链可变区抗体大肠杆菌
- 乙型和丙型肝炎病毒蛋白对蛋白酪氨酸激酶信号转导的影响被引量：7
- 2003年
- 0引言
生物的细胞每时每刻都在接触着来自细胞内或者细胞外的各种各样信号.信号只是个诱因,生理反应是信号作用于细胞的最终结果.相同的信号作用于不同的细胞可以引发完全不同的生理反应;不同的信号作用于同一种细胞却可以引发出相同的生理反应.细胞的一切生命活动都与信号有关,信号是细胞一切活动的始作俑者.因此,对信号转导的研究非常重要,非常有用.由于肝炎病毒可以影响细胞信号转导,引起细胞的病变及恶性转化[1],而蛋白酪氨酸激酶是重要的细胞信号转导激酶,因此深入研究二者的相互关系对肝炎病毒的发病机制会有进一步的了解.
- 张忠东成军钟彦伟张树林
- 关键词：丙型肝炎病毒蛋白蛋白酪氨酸激酶信号转导脂多糖
- G1764A/C1766T/T1768A三联突变对HBV核心启动子活性的上调作用研究被引量：6
- 2010年
- 目的构建乙型肝炎病毒(HBV)核心启动子(CP)荧光素酶表达载体,探讨HBVCP变异对下游基因转录活性的影响。方法 2005年5月至2008年3月于解放军302医院就诊的慢性乙型肝炎(CHB)及慢加急性肝衰竭(ACLF)患者各40例,采集血清提取HBV DNA,采用巢式PCR法扩增HBVCP片段,克隆至pGEM-TEasy载体。挑选含有CP相关变异位点的质粒,经KpnⅠ/BglⅡ双酶切后,构建pGL3-CP荧光素酶真核报告质粒,并采用定点突变方法获得野生型质粒,将两者同时转染肝癌细胞系HepG2,48h后进行荧光素酶检测。结果患者临床资料经统计分析后显示,CHB患者HBeAg阳性率和HBV DNA载量均高于ACLF患者(P<0.01),而TBIL含量则低于ACLF患者(P<0.01);对CP区热点突变频率分析后发现:G1764A/C1766T/T1768A三联突变在CHB患者中为0.0%(0/40),在ACLF患者中为12.5%(5/40,P<0.05)。细胞转染结果显示:典型CP双联突变A1762T/G1764A病毒株的启动子活性为相应野生株的1.67倍,而G1764A/C1766T/T1768A三联突变病毒株的启动子活性为相应野生株的1.43～1.80倍。结论 HBeAg阳性率、TBIL水平、HBV DNA载量与乙型肝炎重症化相关,HBVCP中存在的A1762T/G1764A、G1764A/C1766T/T1768A突变有顺式激活下游基因转录活性的作用。
- 王耀刘妍许智慧纪冬李晓东钟彦伟徐东平
- 关键词：突变启动区反式激活
- 抗CD95单克隆抗体诱导的活化T细胞凋亡时转录因子nur77的表达
- 1999年
- 以抗ＣＤ９５的特异性单克隆抗体（ＣＨ－１１）诱导人Ｔ细胞Ｊｕｒｋａｔ细胞系发生凋亡，Ｊｕｒｋａｔ细胞在发生凋亡过程中出现典型的ＤＮＡ梯形片段化，以荧光染料（ＰＩ）标记的流式细胞学技术对于发生凋亡的细胞进行定量测定，证实发生凋亡的细胞百分比在各个时间点上为６．１％～４３．５％之间。以电泳泳动迁移率（ＥＭＳＡ）对于发生凋亡的细胞核中转录因子ｎｕｒ７７的表达进行了研究，发现以抗ＣＤ９５单克隆抗体诱导的活化Ｔ细胞发生凋亡时，ｎｕｒ７７转录因子表达水平有显著提高。研究结果对了解细胞凋亡时的信号转导与分子生物学机制具有重要意义。
- 成军斯崇文王勤环刘妍刘妍洪卫国杨继珍
- 关键词：CD95细胞凋亡T细胞转录因子
- HCBP6对HCV核心蛋白反式激活作用的影响
- 2004年
- 目的:研究HCBP6蛋白在细胞内表达时,是否通过蛋白- 蛋白之间的相互作用,对HCV核心蛋白的反式激活作用产生影响. 方法:利用常规的分子生物学技术分别构建HCBP6蛋白和丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白的真核表达载体.酶联免疫黏附法enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测CAT的表达水平,间接测定HCV核心蛋白对于SV40病毒即刻早期启动子的反式激活活性. 结果:重组表达载体pcDNA3.1(-)-HCBP6、pcDNA3.1(-)- core经过限制性内切酶作图分析和核苷酸序列分析证实正确无误.转染HepG2细胞之后,HCV核心蛋白的表达,对于SV40病毒即刻早期启动子的转录表达活性具有显著的反式激活作用.但是,当与HCBP6蛋白的表达载体进行共转染时,SV40病毒的即刻早期启动子的转录活性受到抑制.重复试验得到了相似的结果.HCBP6蛋白的表达对于HCV反式激活SV40病毒即刻早期启动转录活性的抑制率40.4-62.3%. 结论:HCBP6蛋白在细胞内的表达对HCV核心蛋白反式激活SV40病毒的即刻早期启动子的转录活性具有显著的抑制作用.
- 成军李克刘妍王琳陆荫英钟彦伟
- 关键词：HCV核心蛋白反式激活作用分子生物学
- 乙肝病毒多聚酶N238H变异的临床特征及对LAM、ADV敏感性研究
- 目的和背景:文献报道HBV N238T/D变异可能与ADV耐药有关。但是到目前为止,N238H变异的特征及该变异是否与ADV耐药有关一直不清楚。本研究的目的是探索N238H变异的临床特征及对LAM、ADV的敏感性。材料和...
- 钟彦伟徐东平朱华徐智慧苏何玲李晓东朱世殊
- 文献传递
- 丙型肝炎病毒非结构蛋白5A反式激活基因8的克隆化研究
- 2004年
- 目的 丙型肝炎病毒 (HCV)的非结构蛋白 5A(NS5A)是一种具有显著反式激活作用的病毒蛋白质。为了探索HCVNS5A病毒蛋白反式激活作用的新的靶基因 ,我们应用抑制性消减杂交 (SSH)技术对于转染和未转染的肝母细胞瘤细胞系HepG2进行分析。研究结果将有助于阐明HCV感染相关疾病的发病机制。方法 以HCVNS5A表达质粒pcDNA3 1(-)_NS5A转染HepG2细胞 ,以空载体pcDNA3 1(-)为平行对照 ,提取mRNA并进行SSH分析。对于所获基因片段序列分析表明 ,其中之一为新型基因片段 ,与GenBank中注册的已知功能基因序列没有同源性 ,利用表达序列标签 (EST)序列的搜索和比对 ,进行电子拼接 ,根据基因起始密码子的Kozak规则和终止密码子下游保守的多聚腺苷酸信号序列 ,确定新型基因序列。结果 结果从HepG2细胞提取总RNA ,多聚酶链反应 (RT_PCR )技术扩增获得该新基因的全长序列 ,测序证实 ,命名为NS5ATP8在GenBank中注册 ,注册号为AF5 2 93 69。NS5ATP8基因的编码序列全长为 14 49(nt) ,编码产物由 483个氨基酸残基 (aa)组成。结论 HCVNS5A反式激活新型靶基因NS5ATP8筛选与克隆 。
- 杨艳杰成军王春花党晓燕钟彦伟
- 关键词：丙型肝炎病毒非结构蛋白5A靶基因抑制性消减杂交技术
- 丙型肝炎病毒核心蛋白抗独特型人源单链可变区抗体的筛选与鉴定被引量：7
- 2003年
- 为制备抗丙型肝炎病毒核心蛋白的抗独特型单链可变区抗体 (抗 IdscFv) ,采用噬菌体表面展示技术 ,将抗 HCV核心蛋白的单克隆抗体固相包被于Nunc板 ,从噬菌体单链可变区抗体库中经过 5轮“吸附 洗脱 扩增”筛选过程 ,获得可与HCV核心蛋白单克隆抗体结合的抗独特型人源单链可变区抗体的噬菌体集落。随机挑选 6 0个克隆 ,利用酶联免疫吸附法 (ELISA)、交叉反应和竞争抑制实验 ,对其进行免疫学检测和鉴定。获得与HCV核心蛋白单克隆抗体结合活性较强的抗 IdscFv阳性克隆 ,并对HCV核心蛋白特异性抗 IdscFv的编码序列进行测定分析。结果经过 5轮“吸附 洗脱 扩增”筛选 ,在随机挑选的 6 0个克隆中 ,有 2 0株克隆ELISA的吸光度(A4 5 0nm)值较高 ,这些噬菌体上清与牛血清白蛋白 (BSA)进行交叉反应后 ,确定了其中有 6株交叉反应较弱 ,结合 2次ELISA重复实验的A值及竞争抑制实验结果 ,最后确定 1株阳性克隆 ,提取质粒 ,进行DNA序列测定 ,DNA大小为 76 8bp。本实验结果提示用噬菌体抗体库技术能够成功地获得抗 HCV核心蛋白的抗 IdscFv ,为开展用抗
- 钟彦伟成军王刚洪源王琳李莉张玲霞陈菊梅
- 关键词：丙型肝炎病毒核心蛋白
- 应用噬菌体表面展示技术筛选丙型肝炎病毒核心蛋白抗原模拟表位被引量：7
- 2003年
- 为筛选丙型肝炎病毒 (HCV)核心蛋白(core)特异性噬菌体 12肽模拟表位 ,应用噬菌体表面展示技术 ,以抗 HCV核心蛋白抗原的单克隆抗体作为固相筛选分子 ,对人工化学合成的噬菌体随机 12肽库进行 5轮“吸附 洗脱 扩增”的筛选过程 ,随机挑取 5 0个克隆 ,经噬菌体酶联免疫吸附法 (ELISA)鉴定 ,并进行交叉反应实验以及竞争抑制性结合实验 ,最后对所选克隆进行DNA序列分析 ,以确定HCV核心抗原的模拟表位。经免疫学鉴定后 ,从随机筛选的 5 0个克隆中确定 10个阳性克隆 ,进行DNA序列测定 ,确定氨基酸序列XRQXXPXXXHXX为HCV核心的模拟表位。
- 钟彦伟成军王刚洪源王琳李莉张玲霞陈菊梅
- 关键词：噬菌体丙型肝炎病毒核心蛋白模拟表位抗原
