陈中标
- 作品数：6 被引量：5H指数：2
- 供职机构：南方医科大学生物技术学院生物治疗研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划广东省科技计划工业攻关项目更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 人Notch2受体胞内区基因N2ICD的原核表达、纯化和鉴定
- 2016年
- [目的]构建含Notch2胞内区基因N2ICD的原核重组质粒,并在E.coli中表达。[方法]根据Gen Bank上N2ICD基因序列设计引物,用PCR从真核重组质粒p CMV-Tag4/N2ICD中扩增目的基因,克隆至携带GST标签的pGEX-4T-1原核表达载体中并转化E.coli BL21。异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,收集菌体经反复冻融、溶菌酶破菌、超声破碎后,通过SDS-PAGE电泳检测目的蛋白的表达形式,表达产物经谷胱甘肽琼脂糖树脂glutathione sepharose 4B纯化并经Western Blot鉴定。[结果]PCR获取了目的基因人N2ICD,并成功构建了重组表达质粒pGEX-4T-1/N2ICD,目的基因在E.coli中成功表达并以部分可溶性形式表达在上清中,纯化后经Western Blot鉴定表达产物分子量在110 k Da。[结论]重组N2ICD在E.coli中成功获得可溶性表达,为研究Notch2受体在细胞信号转导中的作用奠定了基础。
- 陈中标李飞李佩婷邱晓媚叶健斌胡冰心宁立军宁云山李妍
- 关键词：NOTCH2克隆原核表达纯化
- 基于Mimox工具分析幽门螺杆菌Lpp20蛋白模拟表位
- 2013年
- 目的利用Mimox软件分析幽门螺杆菌Lpp20蛋白模拟表位的性质。方法将源于噬菌体随机肽库筛选技术获得的6个Lpp20模拟表位输入Mimox网站,参数设为默认值,进行模拟表位的比对,寻找其共同序列并分析其性质。结果从ClustalW界面比对结果看,氨基酸D、A、S、G、L在模拟表位中出现的频率较高。通过统计学的方法推导出的共同序列为-[-W][PST][LDE]H[SDE][DM]ASG-[LT][YFW][-R]-,第2位置氨基酸W(50%),第7位置氨基酸D(67%),第8位置氨基酸A(50%),第9位置氨基酸S(50%),第12位置氨基酸L(50%)的出现频率较高。通过JalView界面推导出的共同序列为-WPLHSDASG-LYR-,保守性上第6位置S(分值6)、第7位置D(分值5)、第12位置L(分值5)比较高;特异性上第6位置S(分值2.067 059)、第12位置L(分值2.529 612)、第10位置G(分值1.805 491 4)、第3位置P(分值1.761 471 6)比较高;共同性上第7位置D(66%)、第8位置A(50%)、第9位置S(50%)、第10位置G(66%)比较高。结论结合噬菌体筛选技术和生物信息学Mimox工具对抗原模拟表位进行分析并获得较全面的表位信息,为进一步确定抗原表位及研制新型表位疫苗奠定基础。
- 李妍温月媚曾爽陈中标陈艳宁云山
- 关键词：模拟肽幽门螺杆菌LPP20
- 人Notch配体DLL4基因的克隆及真核表达被引量：4
- 2015年
- [目的]构建真核重组质粒DLL4/pCMV-Tag4并进行瞬时表达,为进一步研究DLL4/Notch信号通路奠定基础。[方法]采用PCR的方法扩增人DLL4基因,并克隆于真核表达载体pCMV-Tag4中,通过酶切和测序鉴定后,瞬时转染HEK293 T细胞,荧光定量PCR和Western blot鉴定人DLL4的表达。[结果]成功构建了DLL4/p CMV-Tag4重组质粒并在HEK293T细胞中表达。[结论]人DLL4在HEK293T细胞中表达,为进一步研究DLL4/Notch信号通路奠定基础。
- 叶建斌梁来妹陈中标杨宜宁立军李妍宁云山
- 关键词：NOTCH信号通路真核表达DLL4
- 人Notch信号通路中Jagged1基因的克隆与真核表达被引量：3
- 2015年
- [目的]克隆人Notch信号通路中配体Jagged1基因并进行真核表达。[方法]采用RT-PCR的方法从Hela细胞总RNA中获取Jagged1基因,并克隆至携带FLAG标签的真核表达载体pCMV-Tag4。经酶切、PCR和测序鉴定后,将重组质粒Jagged1-pCMV-Tag4瞬时转染HEK 293T细胞,通过Q-PCR和Western blot检测目的蛋白的表达。[结果]成功构建了真核表达质粒Jagged1-pCMV-Tag4并在HEK 293T细胞中瞬时表达。[结论]Jagged1在HEK 293T细胞中实现瞬时表达,为稳定表达和进一步研究Jagged1/Notch信号通路奠定基础。
- 叶健斌陈中标梁来妹杨宜宁立军宁云山李妍
- 关键词：NOTCH信号通路真核表达JAGGED1
- 番荔枝内酯(ACGs)介导的Notch2上调抑制胃癌细胞的增殖
- 胃癌(Gastric cancer，GC)是最常见的恶性肿瘤之一，常用的GC治疗方法如手术、放疗和化疗效果有限，GC的预后相当差。因此，继续探索GC的替代治疗方法是至关重要的。 目前，中药里的有效成分，如紫杉醇、足叶草...
- 陈中标
- 关键词：胃癌番荔枝内酯
- 文献传递
- 人Notch受体胞内区基因N2ICD克隆及真核表达被引量：1
- 2016年
- 目的构建真核重组质粒N2ICD/p CMV-Tag4并转染HEK 293T细胞进行表达。方法根据GenBank上Notch2的NICD序列设计引物,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)的方法从人宫颈癌细胞Hela细胞扩增人Notch2受体胞内区基因(N2ICD),酶切和测序鉴定后克隆至携带FLAG标签的真核表达载体pCMV-Tag4并进行瞬时和稳定转染HEK 293T细胞,荧光定量PCR(Q-PCR)和蛋白印迹(WB)检测目的蛋白的表达。结果通过RT-PCR克隆获得人N2ICD基因并成功构建重组质粒N2ICD/pCMV-Tag4,目的蛋白N2ICD在HEK 293T细胞中获得表达。结论成功构建稳定表达N2ICD的HEK 293T细胞株,为进一步探讨Notch2受体的功能奠定基础。
- 陈中标叶健斌梁来妹杨宜宁立军宁云山李妍
- 关键词：真核表达
