陈洪伟
- 作品数：4 被引量：16H指数：3
- 供职机构：中国科学院昆明动物研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 不同防冻剂对兔胚胎干细胞慢速冷冻保存的影响被引量：3
- 2007年
- 干细胞冷冻保存是干细胞研究和临床应用中的必需技术。为提高兔胚胎干细胞在慢速冻存过程中的保存效果,比较了二甲基亚砜(DMSO)和乙二醇(ethylene glycol,EG)对兔胚胎干细胞冷冻保护效果。对冷冻复苏后的细胞进行台盼蓝染色,并研究其胚胎干细胞分子特性,结果表明DMSO比EG具有更好的冷冻保护效果。再在以10%DMSO为基础的防冻液中添加膜稳定剂海藻糖(trehalose)或谷氨酰胺(glutamine),细胞冷冻复苏后结果显示,谷氨酰胺对兔胚胎干细胞有明显的冷冻保护作用,使细胞存活率从71%提高到83.7%。当谷氨酰胺浓度为0、5、10、20、40mmol/L分别加入防冻液中后,20mmol/L的谷氨酰胺具有最佳的冷冻保护效果。以上结果得出兔胚胎干细胞慢速冷冻的防冻液改进配方为:在胚胎干细胞培养液中添加10%DMSO+20mmol/L谷氨酰胺。
- 袁晓华王淑芬杨世华李亚辉陈洪伟季维智
- 关键词：兔胚胎干细胞慢速冷冻防冻液谷氨酰胺
- 肝细胞生长因子促进猕猴胚胎干细胞来源的神经前体细胞的增殖被引量：3
- 2008年
- 肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)是一个多效应因子,在神经系统中具有重要作用。早前的研究发现采用HGF和G5 supplement结合EB(embryoid body)法可诱导猕猴胚胎干细胞(rhesus embryonic stem cells,rESCs)定向分化成高纯度的可移植的神经前体细胞(neural progenitors),但对于HGF在整个诱导分化过程中的具体作用及机制还不清楚。本研究改进先前研究体系,采用单层培养法,同时添加HGF和bFGF(basic fibroblast growth factor,碱性成纤维细胞生长因子)诱导rESCs在两周内定向分化为高纯度[(81.66±4.37)%]的神经前体细胞,并且单独添加HGF或bFGF以及两者都没有添加的条件下也得到了相似比例的神经前体细胞,表明外源性的HGF在诱导rESCs向神经前体细胞转变的过程中对于神经细胞命运的决定并不起作用;进一步研究发现HGF能有效地促进神经前体细胞的增殖,并且与bFGF具有协同作用。总之,本研究建立了一种更为简单的诱导rESCs分化成神经细胞的方法,发现外源性的HGF在rESCs向神经前体细胞分化的过程中并没有神经诱导的作用,但能与bFGF协同作用促进rESCs来源的神经前体细胞的增殖。
- 李荣荣陈洪伟陈栋梁王淑芬张敬陈锐季维智
- 关键词：猕猴胚胎干细胞神经前体细胞HGF
- 饲养层FGF2表达量对猕猴胚胎干细胞自我更新及多能性的影响被引量：2
- 2008年
- 用转基因和RNA干扰(RNAi)法建立5组不同成纤维细胞生长因子-2(fibroblast growth factor-2,FGF2)表达量的猕猴耳部皮肤成纤维细胞(MESF)系:过表达FGF2组(f1),过表达的阴性对照组(f2),FGF2RNA干扰组(f3),RNA干扰的阴性对照组(f4)和未作任何处理的对照组(f5)。5组MESF的FGF2表达量相对值为f1:f2:f3:f4:f5=4∶2∶1∶2∶2;c-fos,TGF-β1,INHBA,Gremlin1在f1中表达量上升,在f3中表达量下降;BMP4,TGF-β2在f1中表达量下降,在f3中表达量上升;表明内源FGF2能够作用于MESF的TGF-β信号通路,引起相关基因表达量的变化。用这些细胞作为饲养层长期培养(10代)猕猴胚胎干细胞(RhESC),结果在f1上培养的RhESC增殖速度都比对照组快,并且c-fos,TGF-β1,INHBA,Gremlin1,Oct-4,Nanog,Sox2表达量均上升,BMP4表达下调;在f3上培养的RhESC增殖较慢,BMP4表达上调,c-fos,TGF-β1,INHBA,Gremlin1,Oct-4,Nanog,Sox2表达下调。5组MESF上培养的RhESC形成的EB均表达各胚层早期标记基因(marker),说明RhESC的多能性没有受到影响,但表达量有差异,f1上RhESC形成的EB所有marker都低表达。结果表明饲养层的FGF2含量不仅影响自身相关基因的表达,还对RhESC的自我更新有一定的作用。
- 张敬魏强卢斌陈永昌陈洪伟李荣荣王喜宏季维智
- 关键词：猕猴FGF2饲养层胚胎干细胞
- 人胚胎干细胞定向分化为神经前体细胞被引量：8
- 2007年
- 采用单层贴壁分化的方法在无血清条件下诱导同源饲养层培养的人胚胎干细胞定向分化,得到了高比例的神经前体细胞(97.5±0.83)%(P<0.05)。这些神经前体细胞具有分化为神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞的能力。在长期的传代培养中发现,随着培养时间的延长,nestin阳性的神经前体细胞比例下降,同时发育能力也发生了变化。在传代培养的早期,神经前体细胞发育为神经元的比例很高,几乎没有胶质细胞分化出来。随着培养时间的延长,胶质细胞的比例逐渐上升。这与体内神经系统的发育过程非常相似。进一步研究发现具有bHLH(basic helix-loop-helix)结构域的转录因子neurogenein2(Ngn2)和Olig2可能在这一变化中起重要作用。因此,人胚胎干细胞来源的神经前体细胞能够模拟体内神经发育的模式,为在体外研究人的神经发育和再生医学奠定了基础。
- 李彬陈洪伟胡智兴谭韬金立方王淑芬季维智
- 关键词：人胚胎干细胞分化神经前体细胞
