陈渝
- 作品数：49 被引量：108H指数：6
- 供职机构：第三军医大学西南医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划国家重点实验室开放基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人血管内皮细胞缺氧早期基因系列表达分析文库的建立及分析
- 2009年
- 目的:建立常氧及缺氧早期人血管内皮细胞基因系列表达分析文库,对表达谱数据进行初步分析,为创伤后多器官功能障碍的防治奠定基础。方法:体外培养人脐静脉内皮细胞株(EA.hy926),分为正常对照组和缺氧3h处理组。采用长标签基因系列表达分析方法(LongSAGE)建立常氧及缺氧3h组人血管内皮细胞基因表达文库,通过与Genebank数据库比对确认基因,对所得标签进行初步分析。结果:通过LongSAGE技术构建了常氧和缺氧脐静脉内皮细胞LongSAGE文库。缺氧SAGE文库测得30756个标签,其中识别出的基因总数为13879,比例为45.13%;重复的双标签体总数为762。常氧SAGE文库测得标签数为31213,其中识别出的基因总数为13665,比例为43.78%;重复的双标签体总数为758。结论:成功建立了人脐静脉内皮细胞常氧和缺氧早期LongSAGE文库,获得涵盖上万个转录本信息的表达谱数据,为创伤后多器官功能障碍的防治奠定基础.
- 梁光萍苏踊跃陈建罗向东陈渝
- 关键词：血管内皮细胞缺氧基因表达谱
- 腺病毒介导gax基因转染在培养的血管平滑肌细胞中的表达被引量：10
- 2003年
- 目的 以腺病毒介导gax基因转染血管平滑肌细胞 (VSMC) ,增强VSMC中 gax基因的表达。方法 采用位置特异性重组方法构建携带大鼠 gax基因表达序列的复制缺陷型 5型腺病毒载体 (Ad CMV gax) ,经 2 93细胞扩增 ,纯化制备高滴度病毒转染液 ;以病毒转染液常规转染VSMC后 ,应用RT PCR、流式细胞仪和免疫细胞化学等方法分别检测VSMC中 gaxmRNA和蛋白质的表达。 结果 流式细胞仪检测和免疫细胞化学染色均显示AdCMV gax转染VSMC后 ,VSMC的Gax蛋白表达率明显增高 ,转染后 2 4小时即可达 80 %左右 ,高水平的表达可维持 5天以上 ;AdCMV gax转染前 ,PDGF BB对 gax基因转录和翻译水平的表达均有下调作用 ,AdCMV gax转染后 ,无论有无PDGF BB刺激 ,VSMC中 gax基因的表达均比转染前显著增高。 结论 腺病毒载体可有效地介导 gax基因转染VSMC ,并且表达为蛋白质。这有利于进一步研究
- 王耿何国祥张萍冉擘力刘建平陈渝
- 关键词：GAX基因血管平滑肌细胞腺病毒
- p27基因对血管平滑肌细胞中连接蛋白43表达的影响
- 目的研究连接蛋白43(Cx43)在p27基因抑制血管平滑肌细胞(VSMC)增殖中的作用。方法以携带大鼠p27基因表达序列的复制缺陷型5型腺病毒载体(AdCMV-p27)转染VSMC后,应用免疫细胞化学染色检测p27和Cx...
- 冉擘力何国祥王耿刘建平景涛陈渝
- 文献传递
- 非诺贝特对严重烧伤大鼠肝脏脂肪变性的疗效观察
- 2016年
- 目的观察非诺贝特对严重烧伤大鼠肝脏脂肪变性的疗效。方法将27只雄性sD大鼠按照随机数字表法分为假伤组、单纯烧伤组、烧伤＋非诺贝特组，每组9只。假伤组大鼠将背部浸入37℃温水中15s模拟致伤，之后不予处理。其余2组大鼠将背部浸入98℃热水中15s造成30％TBSAm度烫伤（以下称烧伤），伤后1h腹腔注射乳酸钠林格液。伤后24h起，烧伤＋非诺贝特组大鼠给予生理盐水稀释的非诺贝特（药物剂量为80mg·kg-1·d-1），连续给药7d，单纯烧伤组大鼠则给予等体积生理盐水。（1）于伤后4、6、8d，各组分别选取3只大鼠采集下腔静脉血，采用全自动生化分析仪检测血清总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、游离脂肪酸（FFA）、高密度脂蛋白（HDL）、低密度脂蛋白（LDL）含量；取血后称取大鼠体质量，随即处死大鼠取肝脏称取湿质量，计算后者与前者比值即肝脏指数，同时行肝脏组织大体观察。（2）各时相点下每只大鼠留取1块肝脏组织样本，HE染色观察组织病理学变化；各时相点下每只大鼠选取1张HE染色切片，评估肝脏脂肪变性程度，并统计各组各级肝脏脂肪变性鼠数。对计量资料行析因设计方差分析及SNK检验，对计数资料行Kruskal-Wallis检验和Nemenyi检验。结果（1）伤后4d，单纯烧伤组大鼠TC、TG、FFA、HDL含量与假伤组比较，差异明显（P值均小于0．05）；烧伤＋非诺贝特组大鼠TC、TG、FFA含量均明显低于单纯烧伤组（P值均小于0．05），HDL含量与单纯烧伤组相近（P〉0．05）；3组大鼠LDL含量相近（P值均大于0．05）。伤后6d，单纯烧伤组大鼠TC、TG、HDL含量与假伤组比较，差异明显（P每均小于0．05）；烧伤＋非诺贝特组大鼠TC、TG含量均明显低于单纯烧伤组（P值均小于0．05），HDL含量明显高于单纯烧伤组（P〈0．05）；3组大鼠FFA、LDL含量相近（P值均大�
- 黄宗伟蒙诚跃陈婧陈雅洁陈渝周涛阳超
- 关键词：烧伤肝细胞非诺贝特血脂异常脂肪变性
- 腺病毒介导gax基因转染抑制血管平滑肌细胞增殖被引量：2
- 2003年
- 目的 以腺病毒介导gax基因转染血管平滑肌细胞 (VSMC) ,探讨gax基因表达增强后VSMC增殖的变化。方法 以携带大鼠gax基因表达序列的复制缺陷型 5型腺病毒载体 (AdCMV gax)常规转染VSMC后 ,应用免疫细胞化学染色检测gax基因表达的变化 ;应用四唑盐 (MTT)比色试验、3H标记的胸腺嘧啶核苷 ( 3H TdR)掺入试验和流式细胞仪检测观察gax基因表达增强对VSMC增殖的影响。结果 ①AdCMV gax转染前 ,PDGF BB下调Gax蛋白的表达 ,接近正常生理浓度的PDGF BB( 2ng ml)即可使VSMC的Gax蛋白表达率由 3 6.42 %显著降低至 2 2 .83 %(P <0 .0 5 ) ,随着PDGF BB浓度的升高 ,gax基因表达下降程度更加显著 ;AdCMV gax转染后 ,无论有无PDGF BB刺激 ,VSMC中gax基因的表达均比转染前显著增高。②AdCMV gax转染使VSMC表达gax增强后 ,VSMC的MTT吸光度值和3H TdR掺入量均较未转染组显著降低 ,G0 G1期的VSMC比例较未转染组显著增高 (P <0 .0 1) ,G2 M期和S期细胞比例显著降低 (P <0 .0 1)。
- 王耿何国祥徐晓辉冉擘力张萍陈渝
- 关键词：GAX基因血管平滑肌细胞细胞增殖
- 重组胰高血糖素样多肽-2对烧伤大鼠肠黏膜的保护作用
- 目的验证重组 GLP-2对严重烧伤大鼠肠道保的护作用。方法将 SD 大鼠随机分为烧伤对照组 (C);重组 GLP-2治疗组(Gr,烧伤4 h 开始皮下注射重组 GLP-2,剂量100 nmol·kg·d);化学合成 GL...
- 赵云王凤君王裴陈渝汪仕良
- 文献传递
- 真核表达载体p4CCL20-ZsGreen1-DR的构建与鉴定(英文)
- 2011年
- 背景:抗炎药物高通量筛选体系的建立,可为相关药物的研究提供一个理想的技术平台。目的:构建以核因子κB顺式作用元件4×CCL20基序为增强子,以SV40为启动子,以ZsGreen1-DR为报告基因的真核表达载体p4CCL20-ZsGreen1-DR。方法:以PGL2-control质粒为模板,PCR扩增目的片段SV40,两侧引入KpnⅠ/BamHⅠ酶切位点,克隆至pZsGreen1-DR质粒的Kpn Ⅰ/BamH Ⅰ酶切位点中,构建成pSV40-ZsGreen1-DR载体。将4×CCL20基序双链DNA克隆到pSV40-ZsGreen1-DR载体的BglⅡ和EcoRⅠ酶切位点之间,构建p4CCL20-ZsGreen1-DR重组质粒。结果与结论:经过DNA测序分析证实p4CCL20-ZsGreen1-DR重组质粒构建成功。该重组质粒可作为抗炎药物高通量筛选体系的基础。
- 王勇王志中钟兵王恒邹庆华陈渝
- 关键词：测序分析
- EOLA1基因启动子序列的鉴定被引量：4
- 2009年
- 目的鉴定EOLA1基因启动子序列,为深入研究EOLA1的转录调控机制奠定基础。方法通过PCR反应进一步缺失突变EOLA1基因5′侧翼区-1672～+51(1723bp)序列,将产物插入到含荧光素酶报告基因的载体pGL3-Basic中,转染ECV304细胞,瞬时表达后测定荧光素酶活性。采用生物信息学分析该1723bp片段可能存在的转录因子结合位点。结果缺失到785bp片段仍具有启动子活性,进一步缺失到717bp片段后活性消失,从而确定启动子位于-738～-676bp序列,其附近含Sp1和Myf顺式作用元件。结论确定了EOLA1启动子范围和转录因子结合位点。
- 梁自文周广举杨宗城陈建陈渝
- 关键词：EOLA1启动子转录因子报告基因
- 雌激素在小鼠表皮发育与人表皮细胞株HaCaT增殖中的作用与机制
- 2016年
- 目的观察雌激素在小鼠表皮发育和Kc（人表皮细胞株HaCaT）增殖中的作用并探讨其机制。方法（1）通过阴道脱落细胞检查法选取5只处于动情期成年C57BL／6小鼠设为动情期组，另将性发育前行卵巢切除的5只成年C57BL／6小鼠设为卵巢切除组。取2组小鼠尾根部全层皮肤，HE染色观测表皮厚度，免疫组织化学染色观察表皮中增殖细胞核抗原（PCNA）阳性细胞分布并计数。（2）取对数生长期HaCaT细胞，用含体积分数10％FBS的RPMI1640培养液培养，按随机数字表法分为阴性对照组、单纯雌二醇组、蛋白激酶B（Akt）抑制剂组、细胞外信号调节激酶（ERK）抑制剂组，每组20孔。各组培养液中，阴性对照组加入1nL二甲基亚砜；单纯雌二醇组加入100nmol／L17 β-雌二醇1 μL；Akt抑制剂组和ERK抑制剂组均加入同前剂量与体积17 β-雌二醇，另分别加入10 μmol／L LY294002和30 μmol／LPD98059各1 μL。分别于培养0（即刻）、24、48、72h，每组取5孔细胞，用细胞计数试制盒8与酶标仪检测细胞增殖活性。（3）取对数生长期HaCaT细胞，同前分组处理，每组3孔。培养72h，用流式细胞仪检测细胞周期分布，计算细胞增殖指数（PI）。（4）取对数生长期HaCaT细胞，同前分组处理，每组3皿。培养72h，蛋白质印迹法检测细胞中磷酸化Akt（p-Akt）、磷酸化ERK（p-ERK）和PCNA蛋白水平。细胞实验均重复3次。对数据行t检验、单因素方差分析、析因设计方差分析、LSD检验。结果（1）卵巢切除组小鼠表皮厚度为（33．5±3．0） μm，明显薄于动情期组的（51．4±3．1） μm（t=20．7，P〈0．01）。2组小鼠PCNA阳性细胞主要集中于表皮基底层；卵巢切除组小鼠表皮中PCNA阳性细胞数为每200倍视野下（37±12）个，明显少于动情期组的每200倍视野下（96±15）个（t：15．3，P〈0．01）。（2）培养0～48h，单纯雌二醇组�
- 周涛陈婧黄宗伟方利陈渝陈雅洁彭毅志
- 关键词：雌激素类表皮细胞外信号调节MAP激酶类蛋白激酶类HACAT细胞
- 小鼠趋化因子受体7重组慢病毒感染对DC2.4细胞免疫原性和迁移功能的影响
- 2013年
- 目的 观察含有趋化因子受体7（CCR7）基因的重组慢病毒感染树突细胞（DC）株DC2.4细胞,对其免疫和迁移功能的影响. 方法 常规培养DC 2.4细胞,构建带有绿色荧光蛋白（GFP）的空载慢病毒和带有上调CCR7基因的慢病毒.按照随机数字表法将细胞分为3组：DC 2.4组（DC2.4细胞未经任何处理）、GFP-DC 2.4组（用GFP空载慢病毒感染DC 2.4细胞）和CCR7-DC2.4组（用GFP标记CCR7上升基因的慢病毒感染DC 2.4细胞）.流式细胞术、蛋白质印迹法、激光扫描共聚焦显微镜分别观测各组细胞表面分子组织相容性复合物Ⅱ（MHCⅡ）、CD80、CD86、CCR7的表达,体外趋化实验检测细胞迁移功能的变化；混合淋巴细胞反应检测各组细胞免疫功能的差别,另设LPS-DC 2.4组作为阳性对照.对数据进行单因素方差分析和t检验. 结果 成功构建表达稳定的慢病毒,感染DC 2.4细胞的效率为87.4％.流式细胞检测结果显示,3组之间MHCⅡ、CD80及CD86的表达差异无统计学意义（F值为0.17～1.19,P值均大于0.05）.CCR7-DC 2.4组CCR7蛋白表达量为45.1 ±2.1,明显高于DC 2.4组的25.3±1.4和GFP-DC 2.4组的28.6±0.9（F=162.90,P ＜0.01）；后2组之间比较,差异无统计学意义（t=2.20,P＞0.05）.激光扫描共聚焦显微镜显示,CCR7-DC 2.4组较DC 2.4组CCR7荧光强度明显升高.CCR7-DC 2.4组细胞体外趋化迁移率为（41.0±2.0）％,明显高于DC 2.4组的（6.0±0.5）％和GFP-DC 2.4组的（6.8±0.3）％（F=84.21,P ＜0.01）；后2组之间比较,差异无统计学意义（t=0.45,P＞0.05）.混合淋巴细胞反应显示,DC2.4、GFP-DC 2.4、CCR7-DC 2.4及LPS-DC 2.4组吸光度值分别为1.6±0.4、1.9±0.4、1.7±0.4、3.8±0.4,前3组之间差无统计学意义（F =1.56,P＞0.05）,LPS-DC 2.4组对T淋巴细胞刺激能力明显高于其他3组（t值为1.53～1.82,P值均小于0.01）. 结论 成功构建能高效表达CCR7的DC 2.4细胞对CCL19有较高的趋化性且对免疫功能无明显
- 董志伟彭毅志张帅陈渝董凤娟
- 关键词：慢病毒感染树突细胞免疫原性细胞运动
