目的基于AIE荧光探针6PD-DPAN可结合细菌并聚集发光,荧光强度可体现细菌数量的原理,建立一种快速、简便、准确的细菌药物敏感性试验新方法,为临床快速精准用药提供依据。方法评价类研究。收集东莞市厚街医院2022年1—12月临床样本分离菌共107株,其中46株用于新方法的建立,61株用于方法学验证。微量肉汤稀释法测定的最低抑菌浓度(MIC)为金标准,以庆大霉素,左氧氟沙星、头孢噻肟3种抗菌药物作为实验药物;计算第4 h荧光强度比值(R值),采用ROC曲线分析R值在判断细菌生长与否的效能并确定其截断值。新方法检测61株临床菌株的MIC,以微量肉汤稀释法为金标准,分析新方法的基本一致性、分类一致性、极重大错误和重大错误,采用Kappa检验确定两者的一致性。结果培养4 h R值的ROC曲线分析:截断值为3.0,其对细菌生长的判定敏感度和特异度均为100%;细菌生长受抑制R值为11.1(8.6,14.4);细菌生长R值为1.1(1.0,1.2)。与金标准相比,新方法检测61株临床菌株MIC的基本一致性为100%(61/61),分类一致性为96.7%(59/61),未出现极重大错误和重大错误,Kappa值为0.94,新方法与微量肉汤稀释法结果一致性较好。结论本研究成功构建了一种基于AIE技术的细菌药物敏感性试验新方法,可在5 h内取得满意结果,为临床早期精准药物治疗提供依据。
目的基于液相芯片技术,建立一种可同时、快速检测细胞色素P4502C9(CytoChrome P4502C9,CYP2C 9)、CYP2C19、CYP4F2、维生素K环氧化物还原酶(vitamin K epoxide reductase,VKORCI)及ATP结合盒亚家族B成员l(ATP-binding cassette subfamily B memberl,ABCB1)等与华法林和氯吡格雷相关药物基因多态性的方法。方法方法学的建立。从Genbank中查找与华法林和氯吡格雷药物相关的8个靶位点附近基因序列,设计特异性引物和探针;通过多重PCR扩增,等位基因特异性引物延伸(allele specific primer extension,ASPE),MagPlex-Tag微球杂交,经液相芯片系统Luminex 200检测荧光信号,确定基因型;优化反应体系并进行方法学评价。收集2017年6月至2018年12月东莞市厚街医院抗血栓治疗患者血液样本,共260例,采用建立的方法检测其8个靶位点,并与测序结果比较。结果本方法检测260例样本结果显示:纯合子荧光强度中位值(median fluorescence intensity,MFI)比率均>0.9或<0.1,杂合子MFI比率均在0.3〜0.6之间;各基因型批内和批间变异系数分别低于6.4%和10.9%;所需DNA最低检测限为0.75ng;260例样本的检测结果与测序结果完全一致。结论本研究采用液相芯片技术,成功建立了快速检测华法林和氯吡格雷相关药物基因型的方法。
