黄演婷
- 作品数：14 被引量：34H指数：4
- 供职机构：广东药学院基础学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省医学科学技术研究基金广东省科技计划工业攻关项目更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生化学工程更多>>
- 重组融合蛋白Trx-IFN-CSP的肠激酶酶切及纯化被引量：2
- 2015年
- [目的]重组融合蛋白Trx-IFN-CSP的肠激酶酶切及纯化研究。[方法]选用国产肠激酶,在不同反应条件下酶切重组融合蛋白,15%的SDS-PAGE检测切割产物,并利用Ni2+亲和层析色谱联合肝素亲和层析色谱对酶切产物进行分离纯化。[结果]0.8 U的肠激酶在温度为10℃下酶切72 h能够完全裂解50μg融合蛋白。酶切产物经亲和层析色谱纯化,可获得电泳纯达99%的目的蛋白。[结论]重组融合蛋白Trx-IFN-CSP经肠激酶酶切及纯化后,可获得纯度达99%的肝靶向干扰素IFN-CSP单体,为进一步研究肝靶向干扰素的生物学活性及产业化开发奠定了基础,也为融合蛋白后处理工艺提供了技术借鉴。
- 卢雪梅黄演婷金小宝朱家勇
- 关键词：融合蛋白肠激酶
- Survivin-2B增强甲氨蝶呤抑制BEL-7402
- 2013年
- 目的:研究高表达Survivin-2B对化疗药物甲氨蝶呤抑制肝肿瘤细胞株BEL-7402作用的影响。方法:构建真核表达重组质粒Survivin-2B/pcDNA3.1(-),利用增强型绿色荧光蛋白pEGFP-C1真核质粒测定脂质体转染条件及效率,采用该条件瞬时转染Survivin-2B/pcDNA3.1(-)、Survivin/pcDNA3.1(-)以及pcDNA3.1(-)阴性对照质粒至肝肿瘤细胞株Bel-7402,MTT法检测100mg/ml甲氨蝶呤作用时,各组细胞抑制情况的差异。结果:成功构建Survivin-2B/pcDNA3.1(-)重组质粒,脂质体转染48 h转染效率为62%,甲氨蝶呤对高表达Survivin-2B的Bel-7402细胞抑制率最高。结论:Survivin-2B与甲氨蝶呤同时作用可以提高对Bel-7402细胞的抑制率,为肿瘤治疗提供了新思路。
- 沈娟丁静黄演婷招巧莲杨政
- 关键词：剪接体SURVIVINBEL-7402
- 重组肝靶向干扰素工程菌菌株的遗传稳定性研究被引量：6
- 2013年
- 研究重组肝靶向干扰素工程菌菌株的遗传稳定性,为重组肝靶向干扰素产业化提供依据。在有选择压力(Amp+)条件下,采用平板划线传代法,将重组肝靶向干扰素工程菌菌株连续传代50代,观察菌落和菌体形态,进行生长速度、质粒稳定性、PCR鉴定、限制性内切酶酶切图谱、测序和表达量检测。结果显示:此工程菌在连续传代过程中,保持了大肠杆菌的典型特征,生长速度与原始种子库无明显差异;各代质粒的PCR和酶切图谱正确,传50代后质粒稳定性接近100%,DNA测序未见基因变异。重组肝靶向干扰素表达水平及菌体蛋白的SDS-PAGE图谱均无显著差异。说明肝靶向干扰素工程菌株具有良好的遗传稳定性,为重组肝靶向干扰素的应用奠定了基础。
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- 重组融合蛋白Trx-IFN-CSP复性工艺研究被引量：4
- 2016年
- 旨在建立并优化融合蛋白Trx-IFN-CSP的复性工艺。对重组融合Trx-IFN-CSP进行体外复性研究,考查p H、温度、蛋白浓度、氧化还原体系及辅助复性小分子等复性条件对融合蛋白重折叠的影响。结果显示,适合Trx-IFN-CSP复性的方法为,反复冻融联合超声破菌获得包涵体;用含有1%Triton X-100、2 mol/L尿素、2%DOC洗涤液初步纯化包涵体;再用6 mol/L盐酸胍溶解液变性包涵体;脉冲加样稀释变性液后4℃条件下梯度透析复性,使用L-Arg辅助复性。经肠激酶切去Trx标签后,每升发酵液最终获得110-130 mg肝靶向干扰素,每批蛋白纯度都在95%以上,比活性在1.9-2.4×108 U/mg之间,制备工艺稳定。
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- 关键词：包涵体
- 新型融合多肽HTPP-MDC体外抑制HBV复制活性及亚细胞定位被引量：4
- 2013年
- 目的:研究肝细胞靶向穿膜肽-家蝇天蚕素(HTPP-MDC)融合多肽体外对乙型肝炎病毒(HBV)的抑制作用及其在肝细胞中的定位。方法:不同浓度HTPP-MDC分别与HepG2.2.15细胞和Chang liver细胞共培养,用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测药物对细胞的毒性作用,应用ELISA和实时荧光定量PCR技术定量研究HTPP-MDC对HepG2.2.15细胞系分泌HBsAg、HBeAg及HBV DNA复制的影响。应用激光共聚焦技术研究HTPP-MDC在肝细胞中的定位。结果:HTPP-MDC在体外能有效抑制HepG2.2.15细胞系分泌HBsAg和HBeAg,对HBVDNA的复制亦有显著抑制作用。激光共聚焦显微镜观察显示HTPP-MDC进入细胞内部。结论:HTPP-MDC在体外对HBV复制有较强的抑制作用,并能快速透过细胞膜进入细胞内,有望用于临床治疗慢性乙型肝炎相关疾病。
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- 家蝇天蚕素-人溶菌酶融合蛋白的生物信息学分析被引量：2
- 2012年
- 目的利用生物信息学方法分析家蝇天蚕素-人溶菌酶融合基因推导的氨基酸序列。方法用ProtParam Tool、CDD、ProtScal、sopma等软件对其理化性质、疏水性/亲水性、信号肽、功能结构域及蛋白质二级结构等重要参数进行预测。结果家蝇天蚕素-人溶菌酶由187个氨基酸组成,预测相对分子质量为20 131.7,理论等电点(pI)为9.69,分子式为C862H1375N277O260S11;半衰期预测结果显示其利于基因工程表达。融合蛋白的氨基酸序列含有天蚕素家族和溶菌酶家族二者的保守结构域,二级结构主要由α-螺旋、β-折叠、β-转角和无规则卷曲组成。结论分析结果为家蝇天蚕素-人溶菌酶融合基因的原核表达及表达产物的生物学功能研究奠定了基础。
- 卢雪梅金小宝朱家勇黄演婷
- 关键词：人溶菌酶融合蛋白生物信息学分析
- 地高辛探针检测重组肝靶向干扰素宿主DNA残留量的研究被引量：5
- 2014年
- 目的:建立检测重组肝靶向干扰素宿主DNA残留量的方法,根据此法检测3批重组肝靶向干扰素每人份剂量宿主DNA残留量。方法:以重组肝靶向干扰素工程菌基因组DNA为模板,并制备探针,用此标记探针对3批重组产品进行DNA残留量检测。结果:3批次重组肝靶向干扰素原液每人份剂量宿主DNA残留量均小于10 ng。结论:地高辛标记探针斑点杂交检测DNA残留量具有特异性强,灵敏度高,重现性好,操作简单,能快速高效检定重组肝靶向干扰素原液并对其制备过程进行质量监控。
- 汪洁卢雪梅黄演婷金小宝朱家勇
- 关键词：地高辛斑点杂交
- 拉米夫定和干扰素α2b体外细胞毒性与抗乙型肝炎病毒作用比较
- 2012年
- 目的体外比较拉米夫定和α-干扰素的细胞毒性和抗乙型肝炎病毒作用。方法体外培养L-02和HepG2.2.15细胞,给予不同浓度的拉米夫定和干扰素α2b,作用72 h后,噻唑蓝(MTT)法检测L-02和HepG2.2.15细胞的生存率;收集不同浓度的拉米夫定和干扰素α2b处理的HepG2.2.15细胞上清液,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测HBsAg、HBeAg的分泌。结果拉米夫定对L-02和HepG2.2.15有一定的毒性作用,而干扰素α2b对细胞无毒性作用,甚至能促进正常细胞的增殖;拉米夫定对HBsAg和HBeAg的抑制作用大于干扰素α2b,拉米夫定对HBsAg的抑制率较高,而干扰素α2b对HBeAg的抑制率较高。结论拉米夫定和α干扰素联合使用可提高抗HBV的作用和质量。
- 马艳金小宝黄演婷卢雪梅
- 关键词：拉米夫定干扰素Α2B细胞毒性抗HBV
- 疟原虫环子孢子蛋白的研究进展被引量：4
- 2012年
- 环子孢子蛋白(circumsporzoite protein,CSP)是疟原虫成熟子孢子表面的锚定蛋白,约含400个氨基酸,由N端保守I区、种属特异性的中央重复区和C端保守Ⅱ区构成。CSP在疟原虫的迁移、靶细胞入侵和增殖过程中发挥重要作用。近年研究显示,CSP在疟疾疫苗和靶向给药系统中具有良好的应用前景。本文对疟原虫CSP的结构特征、功能及其应用前景作一综述。
- 黄演婷卢雪梅金小宝朱家勇
- 关键词：疟原虫环子孢子蛋白疟疾疫苗靶向给药系统
- 肝靶向穿膜肽与家蝇天蚕素基因的融合及其分子特征分析被引量：2
- 2012年
- 本研究利用改进SOE-PCR技术构建肝靶向穿膜肽(HTPP)与家蝇天蚕素(MDC)融合基因并对其分子特征进行了预测和分析。结果表明:成功融合了HTPP与MDC,并构建了HTPP-MDC融合基因的克隆重组质粒HTPP-MDC/pMD20-T。PCR和KpnⅠ/HindⅢ双酶切结果显示获得与预期大小一致的基因片段,测序结果显示获得的基因序列没有发生突变,与预期完全一致。分子特征分析表明,该融合基因编码60个氨基酸,分子量为6516.2Da,理论等电点为9.31,二级结构主要由α-螺旋、无规则卷曲、延伸链和β-转角组成。研究结果为HTPP-MDC后续的功能研究奠定了基础,同时也为应用SOE-PCR技术构建融合基因提供了有益借鉴。
- 卢雪梅黄演婷金小宝汪洁朱家勇
- 关键词：SOE-PCR分子特征
