何明亮
- 作品数：4 被引量：5H指数：2
- 供职机构：香港大学更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 人细胞周期相关激酶启动子的克隆和初步分析被引量：3
- 2004年
- 克隆人的细胞周期相关激酶(CCRK)基因启动子,分析与其表达有关的转录调控因子。通过巢式PCR方法,从人的基因组总DNA中分离出CCRK基因5'端非翻译区大小为1072bp的片段。这段片段的3'端起始点在第一个外显子里第一个翻译密码子ATG(+1)上游128bp处。以1072bp为模板,对启动子进行5'端删除分析,分别扩增951bp穴-1072/-128雪、564bp穴-692/-128雪、313bp穴-441/-128雪、127bp穴-239/-128雪的片段,与pGL3-Basic荧光素酶报告载体重组构建,人工加上克隆位点,5'端带有KpnI、3'端带有XhoI位点。瞬时转染恶性神经胶质瘤细胞株U373,通过双荧光素酶活性进行分析。对分离出的1072bp的片段进行测序,结果与GenBank(AccessionAF035013雪的序列比较,同源序列达到98%。双荧光素酶活性分析564bp片段有最强的活性,313bp片段为有活性的最小片段。本研究为进一步研究分析CCRK的核心启动子和与其相关的转录因子奠定基础。
- 贾向志林李家宓何明亮马文煜黄培堂孔祥复黄翠芬
- 关键词：启动子克隆转录
- 人细胞周期相关激酶(CCRK)启动子的分析和特征研究被引量：2
- 2004年
- 目的 :分析人CCRK基因启动子、启动子的核心序列及与其表达相关的转录因子。方法 :采用 5′ RACE技术鉴定人CCRK基因的转录起始点 ;对启动子区 3′端 3个截短片段 2 5 5bp(- 36 7/- 12 8) ,2 10bp(- 32 2 /- 12 8)和16 0bp(- 2 72 /- 12 8)进行删除分析 ,双荧光素酶分析测出的最小活性片段作为核心启动子的上游位点。通过生物软件MatInspectorV2 .2分析核心启动子区域 ,寻找并推测重要的转录因子 ,并对其核心序列进行定点突变分析 ,再通过电泳迁移率 (EMSA)实验加以鉴定。结果 :采用 5′ RACE技术 ,得到的PCR产物直接测序 ,定位 - 2 4 2“T”为转录起始点 ;通过启动子 3′端小片段删除分析 ,2 5 5 ,2 10和 16 0bp均无活性 ,由此判断 3′端 2 5 5个核苷酸不存在核心启动子序列 ,并定位一段 74bp的区域为核心启动子 (- 4 4 1/- 36 7)区域。通过MatInspector软件分析 ,发现在这段核心启动子区域内有 3个重要的结合位点 :DeltaEF 1,NF κB和Sp1。对这 3个结合位点的核心序列进行定点突变后瞬时转染U373,经双荧光素酶分析发现DeltaEF 1的活性明显升高 ,NF κB没有变化 ,Sp1的活性降低但不太明显。进一步通过电泳迁移率 (EMSA)实验鉴定 ,DeltaEF 1和NF κB能与U373核蛋白形成特异性的DNA 蛋白质复合体 。
- 贾向志林李家宓何明亮马文煜黄培堂孔祥复黄翠芬
- 关键词：神经胶质瘤启动子定点突变转录因子
- 靶向引起病毒感染的SARS相关冠状病毒刺突蛋白上的关键位点的合成肽以及其使用方法
- 本发明提供了，用于定位SARS相关冠状病毒(SARS-CoV)的刺突蛋白(S蛋白)上的关键部分或位点的方法，所述部分或位点引起导致严重的急性呼吸综合征(SARS)的病毒感染。本发明还提供了靶向这种SARS-CoV的S蛋白...
- 郑伯建管轶黄建东何明亮
- 文献传递
- 靶向引起病毒感染的SARS相关冠状病毒刺突蛋白上的关键位点的合成肽以及其使用方法
- 本发明提供了，用于定位SARS相关冠状病毒(SARS－CoV)的刺突蛋白(S蛋白)上的关键部分或位点的方法，所述部分或位点引起导致严重的急性呼吸综合征(SARS)的病毒感染。本发明还提供了靶向这种SARS－CoV的S蛋白...
- 郑伯建管轶黄建东何明亮
- 文献传递
