冯浩
- 作品数：12 被引量：4H指数：1
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- 免疫性血小板减少症患者外周血Th17/Treg细胞比率失衡的研究
- 目的 本实验检测免疫性血小板减少症(ITP)患者外周血中Th17细胞、调节性T细胞(Treg)的表达并初步阐明Th17/Treg细胞比率失衡在ITP中的作用及意义.方法 ITP患者根据血小板计数及治疗效果分为治疗前组(活...
- 曹江周俊冯浩丁宁宁陈伟齐昆明潘秀英徐开林
- 关键词：免疫性血小板减少症TH17细胞TREG细胞
- Akt特异性抑制剂MK2206诱导U937及RS4;11细胞凋亡及其机制被引量：4
- 2015年
- 目的:本研究探讨Akt激酶抑制剂MK2206对U937及RS4;11细胞增殖、凋亡的影响,并分析其可能的作用机制。方法:以不同浓度MK2206处理U937及RS4;11细胞24、48 h,用CCK-8法绘制细胞增殖曲线;Annexin V/7-氨基放线菌素D(7-AAD)双标记法分析细胞凋亡情况;流式细胞术检测细胞周期的变化;实时定量PCR检测Bax、Bcl-2、XIAP、CDK1、caspase-3基因mRNA表达的变化。结果:MK2206对U937及RS4;11细胞增殖具有抑制作用,且抑制效应呈一定的时间和剂量依赖性,U937细胞24、48 h的半数抑制浓度(IC50)分别为(0.48±0.15)和(0.09±0.01)μmol/L,RS4;11细胞24、48 h的半数抑制浓度(IC50)分别为(0.91±0.02)和(0.68±0.11)μmol/L。0.5μmol/L MK2206作用于U937细胞及1.0μmol/L MK2206作用于RS4;11细胞24 h、48 h,Annexin V/7-AAD标记的阳性细胞升高,U937细胞组24 h细胞凋亡率为(4.18±0.70)%,48 h细胞凋亡率为(22.53±4.67)%,均高于对照组的(1.35±0.34)%(P<0.05),且48 h细胞凋亡率较24 h更为明显(P<0.05);RS4;11细胞组24 h和48 h细胞凋亡率分别为(5.74±0.58)%和(10.07±1.24)%,均高于对照组的(1.32±0.31)%(P<0.05),且48 h细胞凋亡率较24 h更为明显(P<0.05)。流式细胞术检测细胞周期结果显示,U937细胞组G2/M期细胞比例为(96.78±9.11)%,高于对照组的(9.64±0.91)%(P<0.05);RS4;11细胞组G2/M期细胞比例为(14.19±3.82)%,高于对照组的(5.75±1.28)%(P<0.05)。荧光定量PCR检测结果示,两种细胞中Bax、caspase-3 mRNA相对表达水平升高,而Bcl-2、XIAP表达水平降低,同时伴CDK1 mRNA水平的减少,与各自对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论:MK2206能有效抑制U937及RS4;11细胞增殖及促进细胞凋亡,使细胞周期阻滞于G2/M期,其促凋亡机制与上调Bax与caspase-3基因表达、下调Bcl-2与XIAP基因表达有关,细胞周期G2/M期阻滞与CDK1基因表达水平下降有关。
- 周俊曹江孟凡静冯浩徐开林
- 关键词：U937细胞RS4细胞凋亡
- 二甲双胍对急性单核细胞白血病细胞株THP-1增殖、分化和凋亡的影响
- 目的:探讨二甲双胍(metformin)对体外培养的急性单核细胞白血病细胞株THP-1细胞增殖、分化和凋亡的影响,并分析其可能的作用机制.方法:用不同浓度的二甲双胍分别对THP-1细胞进行体外干预,24 h、48 h后以...
- 曹江孟凡静冯浩周俊徐开林
- NANOGP8重组蛋白原核诱导表达及其在THP-1细胞中相互作用蛋白质的初步研究
- 目的 构建体外NANOGP8重组蛋白原核表达载体pGEX-4T-1-NANOGP8,优化pGEX-4T-1-NANOGP8重组载体原核诱导表达条件并获得不同形式纯化的GST融合蛋白,初步筛选THP-1细胞中与NANOGP...
- 曹江周俊孟凡静冯浩徐开林
- 关键词：原核表达THP-1细胞蛋白组学
- AATF-Che1超家族基因原核表达及其融合蛋白纯化
- 2014年
- 目的 体外构建抗凋亡转录因子（AATF）-Che1重组蛋白原核表达载体pGEx-4T-1-AATF-Che1,优化pGEX-4T-1-AATF-Che1重组载体原核诱导表达条件,并获得可溶性的纯化谷胱甘肽巯基转移酶（GST）融合蛋白.方法 采用聚合酶链反应（PCR）法从pGEX-4T-1-AATF重组质粒扩增出AATF-Che1基因,将其与原核表达载体pGEX-4T-1双酶切后,回收目的基因片段.通过T4连接酶定向连接AATF-Che1基因和线性化原核表达载体pGEX-4T-1,获得重组蛋白AATF-Che1原核表达质粒pGEX-4T-1-AATF-Che1.将构建正确的表达质粒转化入大肠埃希菌感受态细胞BL21,并采用诱导剂异丙基硫代β-D-半乳糖苷（IPTG）诱导蛋白AATF-Che1的表达.考察不同诱导剂IPTG浓度、诱导时间和诱导温度对重组蛋白表达量及表达方式的影响,从而对诱导条件进行优化.采用谷胱甘肽琼脂糖凝胶珠对可溶形式的GST融合蛋白进行纯化,并采用Western蛋白免疫印记（WB）法鉴定获得的纯化蛋白.结果 原核表达质粒pGEX-4T-1-AATF-Che1的酶切、PCR鉴定结果及测序结果均正确;IPTG诱导蛋白在约65 kD处出现了1条新的蛋白条带,即AATF-Che1与GST的融合蛋白.不同的诱导时间及不同的IPTG浓度条件下,诱导融合蛋白的量均未见明显变化;37℃诱导时,重组蛋白主要以包涵体的形式存在于沉淀中,而16℃诱导时,融合蛋白可溶性地存在于上清液中.最终成功获得AATF-Che1可溶性纯化的融合蛋白,且WB法鉴定其抗原性良好.结论 体外成功构建AATF-Che1基因重组蛋白原核表达载体pGEX-4T-1-AATF-Che1,寻找到优化的重组载体原核诱导表达条件,并获得了大量可溶形式纯化的GST融合蛋白,为进一步研究AATF-Che1超家族基因在肿瘤中的作用奠定了基础.
- 周俊曹江孟凡静冯浩潘秀英吴庆运陈翀牛铭山徐开林
- 关键词：原核表达
- 26S蛋白酶抑制剂b-AP15对Jurkat及RS4;11细胞增殖、凋亡的影响及凋亡机制的研究
- 2015年
- 目的 探讨26S蛋白酶抑制剂b-AP15对Jurkat细胞与RS4;11细胞增殖及细胞凋亡的影响,并分析其作用机制.方法 无菌条件下对Jurkat细胞与RS4;11细胞进行培养,根据有无b-AP15处理,将其分为4组：①Jurkat细胞实验组;②Jurkat细胞对照组;③RS4;11细胞实验组;④RS4;11细胞对照组.其中,Jurkat细胞实验组与RS4;11细胞实验组采用浓度分别为0.05,0.10,0.50,1.00,5.00 μmol/L b-AP15处理24,48 h;Jurkat细胞对照组与RS4;11细胞对照组采用RPMI 1640培养基进行同步培养.采用CCK-8法绘制4组细胞增殖曲线;采用Annexin Ⅴ-别藻蓝蛋白（APC）/7-氨基放线菌素D（7-AAD）双标记流式细胞术检查4组细胞凋亡情况;采用流式细胞术检测细胞4组细胞周期分布情况;采用实时定量PCR检测4组细胞B细胞淋巴瘤/白血病-2相关Ⅹ蛋白（Bax）基因、B细胞淋巴瘤/白血病（Bcl）-2基因、Ⅹ连锁凋亡抑制蛋白（XIAP）、周期素依赖性激酶（CDK）1基因及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶（caspase）-3基因mRNA表达水平.结果 ①b-AP15对Jurkat细胞与RS4;11细胞增殖均具有抑制作用,且该抑制效应呈时间与剂量依赖性;Jurkat细胞经b-AP15处理24,48 h后,半数抑制浓度（IC50）分别为（1.52±0.35）μmol/L与（0.54±0.01） μmol/L,RS4;11细胞经b-AP15处理24,48 h后IC50分别为（0.97±0.02）μmol/L与（0.08±0.03）μmol/L.②使用浓度为1.5 μmol/L b-AP15处理Jurkat细胞实验组后,其与Jurkat细胞对照组相比细胞凋亡率显著增高,且差异有统计学意义（P＜0.001）;使用浓度为1.0 μmol/Lb AP15处理RS4;11细胞实验组后,其与RS4;11细胞对照组相比细胞凋亡率亦显著增加,且差异亦有统计学意义（P＜0.001）;且Jurkat细胞与RS4;11细胞经b-AP15处理48 h后,与处理24 h后者相比细胞凋亡率增高,且差异均有统计学意义（t=11.887,7.449;P＜0.001）.③与Jurkat细胞对照组相比,使用浓度为1.5 μmol/L b-AP15处理Jurkat细胞实验组24 h后,Jurkat细胞周
- 周俊曹江孟凡静冯浩徐开林
- 关键词：蛋白酶抑制药细胞周期JURKAT细胞RS4
- 26S蛋白酶抑制剂b-AP15对Jurkat及RS4;11细胞增殖、凋亡的影响及凋亡机制的研究
- 目的探讨26S蛋白酶抑制剂b-AP15对Jurkat及RS4;11细胞增殖、凋亡的影响,并分析其可能的作用机制。方法不同浓度b-AP15处理Jurkat及RS4;11细胞24、48 h,用CCK-8法绘制细胞增殖曲线;A...
- 周俊曹江孟凡静冯浩徐开林
- 文献传递
- NANOGP8重组蛋白原核诱导表达及其在THP-1细胞中相互作用蛋白质的初步研究
- 目的:构建体外NANOGP8重组蛋白原核表达载体pGEX-4T-1-NANOGP8,优化pGEX-4T-1-NANOGP8重组载体原核诱导表达条件并获得不同形式纯化的GST融合蛋白,初步筛选THP-1细胞中与NANOGP...
- 曹江周俊孟凡静冯浩徐开林
- HAA方案体外诱导AML1-ETO融合基因阳性急性髓系白血病细胞株凋亡的研究
- 目的 探讨高三尖杉酯碱(HHT)联合阿糖胞苷(Ara-c)和阿克拉霉素(ACR)诱导AML1-ETO融合基因阳性急性髓系白血病(AML)细胞株Kasumi-1和Skno-1的凋亡作用，并进一步探讨其作用机制。方法 (1)...
- 冯浩曹江丁宁宁周俊徐开林
- 关键词：AML1-ETO
- 26S蛋白酶抑制剂b-AP15对Jurkat及RS4;11细胞增殖、凋亡的影响及凋亡机制的研究
- 目的探讨26S蛋白酶抑制剂b-AP15对Jurkat及RS4;11细胞增殖、凋亡的影响,并分析其可能的作用机制。方法不同浓度b-AP15处理Jurkat及RS4;11细胞24、48 h,用CCK-8法绘制细胞增殖曲线;A...
- 周俊曹江孟凡静冯浩徐开林
